| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-19页 |
| ·黑色素概述 | 第15页 |
| ·黑色素合成代谢 | 第15-17页 |
| ·黑色素生理功能与应用 | 第17-18页 |
| ·研究背景,目的及意义 | 第18-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-38页 |
| ·材料 | 第19-25页 |
| ·试验菌株和质粒载体 | 第19页 |
| ·试验培养基 | 第19-20页 |
| ·试验仪器 | 第20-21页 |
| ·试验试剂 | 第21-22页 |
| ·试验所用主要缓冲液配方 | 第22-25页 |
| ·试验方法 | 第25-38页 |
| ·黑色素合成代谢通路分析 | 第25页 |
| ·黑色素合成关键酶基因扩增引物设计 | 第25-26页 |
| ·PCR扩增引物碱基序列 | 第26页 |
| ·Alteromonas stellipolaris LMG 21856菌株基因组DNA的提取 | 第26-27页 |
| ·PCR扩增目的DNA片段 | 第27-28页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳纯化目的DNA片段 | 第28页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第28-29页 |
| ·目的DNA片段的T-A克隆与鉴定 | 第29-30页 |
| ·质粒DNA抽提 | 第30-31页 |
| ·表达系统构建 | 第31-33页 |
| ·目的蛋白诱导表达与检测 | 第33-36页 |
| ·代谢产物鉴定 | 第36-38页 |
| 第三章 结果与分析 | 第38-62页 |
| ·黑色素合成代谢通路分析 | 第38-40页 |
| ·Alteromonas基因组获得与注释分析 | 第38-39页 |
| ·HPPD催化酪氨酸降解代谢通路 | 第39-40页 |
| ·外源表达系统构建 | 第40-47页 |
| ·Alteromonas stellipolaris LMG 21856菌株基因组提取优化 | 第40-42页 |
| ·PCR扩增目的DNA片段 | 第42页 |
| ·T-A克隆与鉴定 | 第42-44页 |
| ·构建表达载体pET30a-AsHPPD | 第44-47页 |
| ·AsHPPD二级结构分析 | 第47-50页 |
| ·外源诱导AsHPPD基因表达与检测 | 第50-55页 |
| ·SDS-PAGE检测AsHPPD外源表达 | 第51页 |
| ·Western Blotting检测AsHPPD外源表达 | 第51-54页 |
| ·Ni-NTA变性纯化AsHPPD | 第54-55页 |
| ·E. coli BL21(DE3)/pET30a-AsHPPD诱导代谢产物检测 | 第55-62页 |
| ·代谢合成黑色素肉眼观察 | 第55-57页 |
| ·UV-Vis检测HGA和黑色素 | 第57-59页 |
| ·HPLC检测HGA | 第59-60页 |
| ·TLC检测黑色素 | 第60-62页 |
| 第四章 结论与展望 | 第62-64页 |
| ·结论 | 第62页 |
| ·展望 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 附录 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
