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给水生物预处理系统中微生物的群落结构分析

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-17页
1 绪论第17-37页
   ·给水生物预处理工艺概述第17-22页
     ·原水水质现状第17页
     ·微污染原水中污染物的危害及传统处理工艺的局限性第17-19页
     ·给水生物预处理工艺的引进及其特点第19-20页
     ·给水生物接触氧化工艺概述第20-22页
   ·给水生物预处理工艺中的硝化过程第22-23页
   ·给水生物预处理工艺中的生物相第23-26页
     ·贫营养环境及其中的微生物第23-24页
     ·给水生物预处理反应器中生物相的研究意义第24页
     ·传统方法对生物膜中生物相的认识第24-25页
     ·传统方法研究生物膜中生物相的局限第25-26页
   ·分子生物学研究手段在环境微生物学领域的应用第26-31页
     ·基因序列系统发育分析方法第26-27页
     ·基因指纹图谱技术第27-28页
     ·以rRNA 为靶序列的探针杂交技术第28-29页
     ·定量PCR 分析方法第29-30页
     ·基因芯片技术第30-31页
   ·本课题的研究意义和研究内容第31-34页
     ·本课题的研究意义第31-32页
     ·研究内容和拟达到的目标第32-34页
 参考文献第34-37页
2 给水生物接触氧化反应器中总细菌群落的多样性研究第37-69页
   ·前言第37-42页
     ·用于给水生物预处理反应器的传统微生物鉴定方法第37-38页
     ·16S rDNA 序列同源性分析方法及其应用第38-41页
     ·本章研究意义和主要内容第41-42页
   ·材料与方法第42-49页
     ·生物膜样品采集第42-43页
     ·生物膜样品中的异养细菌纯培养第43页
     ·生物膜样品基因组DNA 的提取与纯化第43-45页
     ·生物膜样品中真细菌16S rDNA基因片段扩增第45-46页
     ·16S rDNA 基因片段的克隆文库构建第46-47页
     ·重组质粒的筛选和提取第47-48页
     ·基因测序及系统发育分析第48-49页
     ·克隆文库多样性的统计学分析第49页
   ·结果与分析第49-57页
     ·异养细菌纯培养与菌种鉴定结果第49-50页
     ·生物膜样品基因组DNA 提取结果第50-51页
     ·生物膜样品细菌16S rDNA 基因片段扩增及克隆文库的构建与鉴定第51-52页
     ·细菌16S rDNA克隆文库多样性分析第52-53页
     ·细菌16S rDNA 文库克隆子的系统发育分析第53-57页
   ·讨论第57-64页
     ·纯培养方法和克隆文库方法揭示的总细菌群落多样性第57-58页
     ·生物膜样品细菌16S rDNA克隆文库多样性的统计学分析第58-59页
     ·冬季与夏季生物膜样品的细菌群落结构差异第59-60页
     ·给水生物接触氧化反应器中的贫营养细菌第60-62页
     ·给水生物接触氧化反应器中的功能细菌第62-64页
 参考文献第64-69页
3 给水生物接触氧化反应器中氨氧化细菌的分子多样性研究第69-97页
   ·前言第69-78页
     ·氨氧化细菌的生理生化机制概述第69-70页
     ·氨氧化细菌的系统发育研究第70-72页
     ·氨氧化细菌的分子研究特征基因第72-74页
     ·环境中氨氧化细菌的生态分布第74-77页
     ·本章研究意义和主要内容第77-78页
   ·材料与方法第78-81页
     ·生物膜样品第78页
     ·氨氧化细菌CTO 片段的PCR 扩增第78-79页
     ·氨氧化细菌CTO 片段的克隆与克隆子归类第79页
     ·氨单加氧酶基因(amoA)片段的PCR 扩增第79-80页
     ·氨氧化细菌amoA 基因片段的克隆与克隆子归类第80页
     ·基因测序及系统发育分析第80-81页
   ·结果与分析第81-85页
     ·氨氧化细菌CTO片段和amoA基因片段的PCR扩增第81-82页
     ·氨氧化细菌CTO 片段的克隆与序列分析第82-83页
     ·氨氧化细菌amoA基因片段的克隆与序列分析第83-85页
   ·讨论第85-90页
     ·基于CTO 片段和amoA 基因片段的AOB 多样性研究结果的比较第85-86页
     ·生物膜中AOB 的种群多样性和生态分布讨论第86-88页
     ·生物预处理反应器中氨氧化细菌群落的功能冗余第88-90页
 参考文献第90-97页
4 给水生物接触氧化反应器中氨氧化细菌的种群变迁研究第97-141页
   ·前言第97-104页
     ·变性梯度凝胶电泳技术原理第97-100页
     ·DGGE 技术在氨氧化细菌生态学研究中的应用第100-101页
     ·基于RNA的分子生物学技术手段及其应用第101-103页
     ·本章研究意义和主要内容第103-104页
   ·材料与方法第104-114页
     ·生物膜样品采集第104页
     ·生物膜样品的总核酸提取与纯化第104-106页
     ·氨氧化细菌165 rRNA 特异性片段和amoA mRNA 片段反转录第106-107页
     ·基于CTO片段的PCR扩增和V3区巢式扩增第107-108页
     ·V3 区巢式扩增产物变性梯度凝胶电泳分析第108-111页
     ·氨氧化细菌16S rDNA 和165 rRNA 特异性长片段的克隆与克隆子归类第111-112页
     ·基于amoA 基因片段的PCR 扩增和变性梯度凝胶电泳分析第112-113页
     ·基因测序及系统发育分析第113-114页
     ·DGGE凝胶图谱分析第114页
   ·结果与分析第114-131页
     ·上海航头水厂生物接触氧化反应器水样理化指标分析第114-115页
     ·生物膜样品总核酸提取结果第115页
     ·氨氧化细菌CTO 片段的V3 区巢式扩增结果第115-118页
     ·生物膜样品中氨氧化细菌V3 区巢式扩增产物的DGGE 垂直胶和水平胶实验第118-122页
     ·氨氧化细菌16S rDNA 和165 rRNA 特异性长片段克隆文库结合V3 区的DGGE 指纹图分析第122-125页
     ·基于amoA 片段的PCR 扩增和DGGE 指纹图分析第125-129页
     ·航头水厂和惠南水厂氨氧化细菌扩增片段的DGGE 指纹图比较第129-131页
   ·讨论第131-137页
     ·不同靶基因片段和不同技术路线的实验方法比较第131-132页
     ·给水生物接触氧化反应器中氨氧化细菌的种群变迁第132-134页
     ·给水生物接触氧化反应器中新氨氧化细菌种群序列的发现第134-137页
 参考文献第137-141页
5 Real-time PCR 定量给水生物接触氧化反应器中的氨氧化细菌种群第141-168页
   ·前言第141-149页
     ·环境样品中氨氧化细菌的定量方法第141-143页
     ·实时荧光定量PCR的技术原理第143-145页
     ·实时荧光定量PCR 技术的实验条件和影响因素第145-146页
     ·实时荧光定量PCR技术研究环境样品中的氨氧化细菌第146-149页
     ·本章研究意义和主要内容第149页
   ·材料与方法第149-152页
     ·生物膜样品第149页
     ·引物和探针的选择和设计第149-150页
     ·qRT-PCR 标准品准备第150-151页
     ·最佳引物、探针和Mg~(2+)浓度摸索第151页
     ·qRT-PCR 检测生物膜中总细菌和氨氧化细菌数量第151-152页
     ·统计学分析第152页
   ·结果与分析第152-157页
     ·标准曲线的建立第152-153页
     ·生物膜样品中的总细菌和氨氧化细菌定量结果第153-157页
   ·讨论第157-163页
     ·生物膜样品中氨氧化细菌群落的丰度和动态变化第157-158页
     ·环境因子对氨氧化细菌种群结构动态变化的影响第158-159页
     ·氨氧化细菌种群结构动态变化与氨氮去除效果的相关性第159-161页
     ·给水生物预处理反应器中氨氧化细菌种群细胞数量的分子监测第161-163页
 参考文献第163-168页
6 结论与展望第168-172页
论文的创新性第172-173页
附录 1 缩写词列表第173-174页
致谢第174-175页
攻读博士学位期间已发表的学术论文目录第175-177页

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