中文摘要 | 第1-5页 |
英文摘要 | 第5-13页 |
第一章 文献综述 | 第13-32页 |
§1 植物的抗盐性 | 第13-15页 |
1 土壤盐分过多对植物的危害 | 第13-14页 |
1.1 渗透胁迫 | 第13页 |
1.2 营养缺乏胁迫 | 第13页 |
1.3 离子毒性胁迫 | 第13-14页 |
1.4 生理代谢紊乱 | 第14页 |
2 植物抗盐的生理基础 | 第14-15页 |
2.1 避盐机理 | 第14-15页 |
2.1.1 拒盐 | 第14页 |
2.1.2 泌(排)盐 | 第14页 |
2.1.3 稀盐 | 第14-15页 |
2.2 耐盐机理 | 第15页 |
2.2.1 耐渗透胁迫 | 第15页 |
2.2.2 耐营养缺乏 | 第15页 |
2.2.3 耐代谢失调 | 第15页 |
§2 植物耐盐基因工程研究的意义及耐盐基因(或蛋白)的分离克隆 | 第15-16页 |
1 意义 | 第15-16页 |
2 耐盐基因(或蛋白)的分离克隆 | 第16页 |
§3 植物耐盐的分子机制 | 第16-18页 |
1 植物的柜钠、排钠机制 | 第17页 |
2 合成相溶性物质 | 第17页 |
3 调控K离子运输系统,提高K离子的选择吸收能力 | 第17页 |
4 调控水通道蛋白 | 第17-18页 |
5 增强抗氧化防御反应 | 第18页 |
6 改变植物的光合作用途径 | 第18页 |
§4 抗渗透胁迫基因工程研究进展 | 第18-21页 |
1 mtlD和gutD(1-磷酸甘露醇脱氢酶基因和6-磷酸山梨醇脱氢酶基因) | 第18-19页 |
2 SacB(果聚糖-蔗糖酶基因) | 第19页 |
3 OTSA和OTSB(6-磷酸海藻糖合成酶基因和6-磷酸海藻糖磷酸化酶基因) | 第19页 |
4 BADH基因(甜菜碱醛脱氢酶基因) | 第19-20页 |
5 LEA(胚胎发生晚期丰富蛋白基因) | 第20页 |
6 H氢口比咯-5-羧酸合成酶基因(P5CS) | 第20页 |
7 IMTl(肌醇甲基转移酶)和Inpsl(1-磷酸肌醇合成酶) | 第20页 |
8 DMS合成酶基因(3-Dimethylsulfonioproponate)二甲基硫堇化合物合成酶基因 | 第20页 |
9 Osmotin合成酶基因(渗调蛋白合成酶基因) | 第20-21页 |
§5 山梨醇、甘露醇代谢途径及mtlD、gutD基因研究进展 | 第21-24页 |
1 甘露醇、山梨醇在植物中的分布 | 第21页 |
2 山梨醇、甘露醇的作用 | 第21页 |
3 甘露醇、山梨醇的代谢 | 第21-23页 |
3.1 甘露醇代谢 | 第21-22页 |
3.1.1 甘露醇在高等植物中的代谢 | 第21-22页 |
3.1.2 甘露醇在大肠杆菌中的代谢 | 第22页 |
3.2 山梨醇代谢 | 第22-23页 |
3.2.1 山梨醇在高等植物中的代谢 | 第22页 |
3.2.2 山梨醇在大肠杆菌中的代谢 | 第22-23页 |
4 甘露醇和山梨醇在转基因植物中的可能代谢途径及命运 | 第23页 |
4.1 可能代谢途径 | 第23页 |
4.2 可能的命运 | 第23页 |
5 mtlD、gutD的研究及基因克隆 | 第23-24页 |
5.1 mtlD、gutD的研究 | 第23-24页 |
5.2 gutD、mtlD基因的克隆 | 第24页 |
6 mtlD、gutD基因的转化 | 第24页 |
§6 转化基因的遗传特性 | 第24-28页 |
1 转基因植物中外源DNA的整合位点和拷贝数 | 第24-25页 |
1.1 整合位点 | 第24-25页 |
1.2 整合的拷贝数 | 第25页 |
2 外源基因对植物基因组基因结构的影响 | 第25页 |
3 外源基因的大小及T-DNA对基因整合的影响 | 第25页 |
4 转基因植物中外源DNA整合的遗传效应 | 第25-26页 |
4.1 位置效应 | 第26页 |
4.2 共拟制效应 | 第26页 |
4.2.1 正意拟制(即基因沉默) | 第26页 |
4.2.2 反意拟制(即重复诱导的基因沉默) | 第26页 |
4.3 重排效应(rearrangement) | 第26页 |
5 转化基因的遗传稳定性 | 第26-27页 |
6 外源基因在转化植株中的遗传传递规律 | 第27页 |
6.1 单基因位点的孟德尔遗传 | 第27页 |
6.2 多基因位点的孟德尔遗传 | 第27页 |
6.3 非孟德尔的遗传方式 | 第27页 |
7 转化方法对整合外源基因结构及遗传特性的影响 | 第27-28页 |
7.1 转化方法对外源基因结构的影响 | 第28页 |
7.1.1 农杆菌介导转化的外源DNA的结构特点 | 第28页 |
7.1.2 DNA直接转化的外源DNA的结构特点 | 第28页 |
7.2 转化方法对外源基因遗传稳定性的影响 | 第28页 |
§7 植物耐盐基因工程研究应采用的几个策略 | 第28-29页 |
1 加强非盐生植物耐盐机理研究 | 第28页 |
2 开展耐盐基因定位及分离研究 | 第28-29页 |
3 使用盐胁迫诱导的组织特异性启动子 | 第29页 |
4 构建并转移复合基因 | 第29页 |
5 优化转化载体中各元件的组合,消除基因沉默(gene silence) | 第29页 |
6 运用MAR序列 | 第29页 |
§8 植物耐盐基因工程前景展望 | 第29-31页 |
引言 | 第31-32页 |
第二章 材料和方法 | 第32-45页 |
§1 材料 | 第32-33页 |
1 植物材料 | 第32页 |
2 基因、质粒及菌株 | 第32页 |
3 阳性对照质粒 | 第32页 |
4 抗体 | 第32-33页 |
5 引物 | 第33页 |
6 试剂 | 第33页 |
§2 方法 | 第33-45页 |
1 菌的保存与活化 | 第33-34页 |
2 转化受体系统的建立 | 第34-35页 |
2.1 杨树转化受体系统的建立 | 第34页 |
2.1.1 再生系统的建立 | 第34页 |
2.1.2 卡那霉素敏感性试验 | 第34页 |
2.1.3 农杆菌敏感性试验 | 第34页 |
2.2 猕猴桃转化受体系统的建立 | 第34-35页 |
2.2.1 再生系统的建立 | 第34-35页 |
2.2.2 卡那霉素敏感性实验 | 第35页 |
2.2.3 农杆菌敏感性试验 | 第35页 |
3 转化及筛选 | 第35-38页 |
3.1 杨树转化及筛选 | 第35-36页 |
3.1.1 菌的活化 | 第36页 |
3.1.2 转化 | 第36页 |
3.2 猕猴桃的转化及筛选 | 第36-38页 |
3.2.1 基因枪转化所用基因提取、制备及基因枪的操作 | 第36-38页 |
3.2.2 菌的活化 | 第38页 |
3.2.3 转化、筛选及再生 | 第38页 |
4 PCR检测 | 第38-39页 |
4.1 杨树PCR检测 | 第38-39页 |
4.1.1 杨树DNA提取 | 第38-39页 |
4.1.2 阳性对照质粒DNA提取 | 第39页 |
4.1.3 PCR扩增及检测 | 第39页 |
4.2 猕猴桃PCR检测 | 第39页 |
5 Southern杂交(ECL法) | 第39-42页 |
5.1 探针标记 | 第39页 |
5.2 凝胶制备及电泳 | 第39-40页 |
5.3 凝胶处理 | 第40页 |
5.4 毛细管印迹 | 第40页 |
5.5 印迹处理 | 第40页 |
5.6 杂交和洗膜 | 第40-41页 |
5.7 信号产生及检测 | 第41-42页 |
6 Western杂交 | 第42-44页 |
6.1 植物可溶性蛋白的提取 | 第42页 |
6.2 阳性对照的制备 | 第42-43页 |
6.3 蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第43页 |
6.4 蛋白质的转膜 | 第43页 |
6.5 免疫反应 | 第43-44页 |
7 耐盐性测定 | 第44-45页 |
7.1 杨树耐盐性测定 | 第44页 |
7.2 猕猴桃耐盐性测定 | 第44-45页 |
第三章 结果与分析 | 第45-65页 |
§1 转化受体系统的建立 | 第45-57页 |
1 杨树转化受体系统的建立 | 第45-50页 |
1.1 再生系统的建立 | 第45-48页 |
1.1.1 叶片不定芽诱导最佳配方筛选 | 第45-47页 |
1.1.2 不定芽生根诱导最佳配方筛选 | 第47-48页 |
1.2 卡那霉素敏感性实验 | 第48-50页 |
1.2.1 叶片外植体不定芽诱导卡那霉敏感性试验 | 第48-49页 |
1.2.2 不定芽生根诱导卡那霉素敏感性试验 | 第49-50页 |
2 猕猴桃转化受体系统的建立 | 第50-57页 |
2.1 再生系统的建立 | 第50-56页 |
2.1.1 无菌叶片外植体的获取 | 第50-51页 |
2.1.2 叶片预培养 | 第51页 |
2.1.3 叶片不定芽诱导最佳配方筛选 | 第51-54页 |
2.1.4 不定芽生根诱导最佳配方筛选 | 第54-56页 |
2.2 卡那霉素敏感性实验 | 第56-57页 |
2.2.1 叶片卡那霉素敏感性实验 | 第56-57页 |
2.2.2 不定芽生根诱导卡那霉素敏感性试验 | 第57页 |
§2 转化及筛选 | 第57-59页 |
1 杨树转化及筛选 | 第57-59页 |
2 猕猴桃的转化及筛选 | 第59页 |
§3 分子生物学检测 | 第59-62页 |
1 PCR检测 | 第59-61页 |
1.1 杨树PCR检测 | 第59-60页 |
1.2 猕猴桃PCR检测 | 第60-61页 |
2 杨树Southern杂交 | 第61页 |
3 杨树Western杂交 | 第61-62页 |
§4 耐盐性测定 | 第62-65页 |
1 杨树耐盐性测定 | 第62-64页 |
2 猕猴桃耐盐性测定 | 第64-65页 |
第四章 讨论 | 第65-68页 |
1 高效再生系统的建立 | 第65页 |
2 提高基因转化率 | 第65-66页 |
2.1 优选农杆菌菌株 | 第65页 |
2.2 使用乙酰丁香酮等vir基因活化剂 | 第65-66页 |
2.3 掌握好共培养时间 | 第66页 |
2.4 灵活使用卡那霉素 | 第66页 |
2.5 基因枪转化和叶盘法转化的结合使用 | 第66页 |
3 外源基因的整合及遗传效应分析 | 第66-67页 |
4 糖醇含量测定及与抗盐性关系研究 | 第67页 |
5 加强植物耐盐机理及高效表达载体构建研究 | 第67-68页 |
结论 | 第68-69页 |
致谢 | 第69-70页 |
参考文献 | 第70-76页 |
作者简介 | 第76-77页 |
缩略词 | 第77页 |