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mtlD/gutD双价耐盐基因转化杨树、猕猴桃的研究

中文摘要第1-5页
英文摘要第5-13页
第一章 文献综述第13-32页
 §1 植物的抗盐性第13-15页
  1 土壤盐分过多对植物的危害第13-14页
   1.1 渗透胁迫第13页
   1.2 营养缺乏胁迫第13页
   1.3 离子毒性胁迫第13-14页
   1.4 生理代谢紊乱第14页
  2 植物抗盐的生理基础第14-15页
   2.1 避盐机理第14-15页
    2.1.1 拒盐第14页
    2.1.2 泌(排)盐第14页
    2.1.3 稀盐第14-15页
   2.2 耐盐机理第15页
    2.2.1 耐渗透胁迫第15页
    2.2.2 耐营养缺乏第15页
    2.2.3 耐代谢失调第15页
 §2 植物耐盐基因工程研究的意义及耐盐基因(或蛋白)的分离克隆第15-16页
  1 意义第15-16页
  2 耐盐基因(或蛋白)的分离克隆第16页
 §3 植物耐盐的分子机制第16-18页
  1 植物的柜钠、排钠机制第17页
  2 合成相溶性物质第17页
  3 调控K离子运输系统,提高K离子的选择吸收能力第17页
  4 调控水通道蛋白第17-18页
  5 增强抗氧化防御反应第18页
  6 改变植物的光合作用途径第18页
 §4 抗渗透胁迫基因工程研究进展第18-21页
  1 mtlD和gutD(1-磷酸甘露醇脱氢酶基因和6-磷酸山梨醇脱氢酶基因)第18-19页
  2 SacB(果聚糖-蔗糖酶基因)第19页
  3 OTSA和OTSB(6-磷酸海藻糖合成酶基因和6-磷酸海藻糖磷酸化酶基因)第19页
  4 BADH基因(甜菜碱醛脱氢酶基因)第19-20页
  5 LEA(胚胎发生晚期丰富蛋白基因)第20页
  6 H氢口比咯-5-羧酸合成酶基因(P5CS)第20页
  7 IMTl(肌醇甲基转移酶)和Inpsl(1-磷酸肌醇合成酶)第20页
  8 DMS合成酶基因(3-Dimethylsulfonioproponate)二甲基硫堇化合物合成酶基因第20页
  9 Osmotin合成酶基因(渗调蛋白合成酶基因)第20-21页
 §5 山梨醇、甘露醇代谢途径及mtlD、gutD基因研究进展第21-24页
  1 甘露醇、山梨醇在植物中的分布第21页
  2 山梨醇、甘露醇的作用第21页
  3 甘露醇、山梨醇的代谢第21-23页
   3.1 甘露醇代谢第21-22页
    3.1.1 甘露醇在高等植物中的代谢第21-22页
    3.1.2 甘露醇在大肠杆菌中的代谢第22页
   3.2 山梨醇代谢第22-23页
    3.2.1 山梨醇在高等植物中的代谢第22页
    3.2.2 山梨醇在大肠杆菌中的代谢第22-23页
  4 甘露醇和山梨醇在转基因植物中的可能代谢途径及命运第23页
   4.1 可能代谢途径第23页
   4.2 可能的命运第23页
  5 mtlD、gutD的研究及基因克隆第23-24页
   5.1 mtlD、gutD的研究第23-24页
   5.2 gutD、mtlD基因的克隆第24页
  6 mtlD、gutD基因的转化第24页
 §6 转化基因的遗传特性第24-28页
  1 转基因植物中外源DNA的整合位点和拷贝数第24-25页
   1.1 整合位点第24-25页
   1.2 整合的拷贝数第25页
  2 外源基因对植物基因组基因结构的影响第25页
  3 外源基因的大小及T-DNA对基因整合的影响第25页
  4 转基因植物中外源DNA整合的遗传效应第25-26页
   4.1 位置效应第26页
   4.2 共拟制效应第26页
    4.2.1 正意拟制(即基因沉默)第26页
    4.2.2 反意拟制(即重复诱导的基因沉默)第26页
   4.3 重排效应(rearrangement)第26页
  5 转化基因的遗传稳定性第26-27页
  6 外源基因在转化植株中的遗传传递规律第27页
   6.1 单基因位点的孟德尔遗传第27页
   6.2 多基因位点的孟德尔遗传第27页
   6.3 非孟德尔的遗传方式第27页
  7 转化方法对整合外源基因结构及遗传特性的影响第27-28页
   7.1 转化方法对外源基因结构的影响第28页
    7.1.1 农杆菌介导转化的外源DNA的结构特点第28页
    7.1.2 DNA直接转化的外源DNA的结构特点第28页
   7.2 转化方法对外源基因遗传稳定性的影响第28页
 §7 植物耐盐基因工程研究应采用的几个策略第28-29页
  1 加强非盐生植物耐盐机理研究第28页
  2 开展耐盐基因定位及分离研究第28-29页
  3 使用盐胁迫诱导的组织特异性启动子第29页
  4 构建并转移复合基因第29页
  5 优化转化载体中各元件的组合,消除基因沉默(gene silence)第29页
  6 运用MAR序列第29页
 §8 植物耐盐基因工程前景展望第29-31页
 引言第31-32页
第二章 材料和方法第32-45页
 §1 材料第32-33页
  1 植物材料第32页
  2 基因、质粒及菌株第32页
  3 阳性对照质粒第32页
  4 抗体第32-33页
  5 引物第33页
  6 试剂第33页
 §2 方法第33-45页
  1 菌的保存与活化第33-34页
  2 转化受体系统的建立第34-35页
   2.1 杨树转化受体系统的建立第34页
    2.1.1 再生系统的建立第34页
    2.1.2 卡那霉素敏感性试验第34页
    2.1.3 农杆菌敏感性试验第34页
   2.2 猕猴桃转化受体系统的建立第34-35页
    2.2.1 再生系统的建立第34-35页
    2.2.2 卡那霉素敏感性实验第35页
    2.2.3 农杆菌敏感性试验第35页
  3 转化及筛选第35-38页
   3.1 杨树转化及筛选第35-36页
    3.1.1 菌的活化第36页
    3.1.2 转化第36页
   3.2 猕猴桃的转化及筛选第36-38页
    3.2.1 基因枪转化所用基因提取、制备及基因枪的操作第36-38页
    3.2.2 菌的活化第38页
    3.2.3 转化、筛选及再生第38页
  4 PCR检测第38-39页
   4.1 杨树PCR检测第38-39页
    4.1.1 杨树DNA提取第38-39页
    4.1.2 阳性对照质粒DNA提取第39页
    4.1.3 PCR扩增及检测第39页
   4.2 猕猴桃PCR检测第39页
  5 Southern杂交(ECL法)第39-42页
   5.1 探针标记第39页
   5.2 凝胶制备及电泳第39-40页
   5.3 凝胶处理第40页
   5.4 毛细管印迹第40页
   5.5 印迹处理第40页
   5.6 杂交和洗膜第40-41页
   5.7 信号产生及检测第41-42页
  6 Western杂交第42-44页
   6.1 植物可溶性蛋白的提取第42页
   6.2 阳性对照的制备第42-43页
   6.3 蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳第43页
   6.4 蛋白质的转膜第43页
   6.5 免疫反应第43-44页
  7 耐盐性测定第44-45页
   7.1 杨树耐盐性测定第44页
   7.2 猕猴桃耐盐性测定第44-45页
第三章 结果与分析第45-65页
 §1 转化受体系统的建立第45-57页
  1 杨树转化受体系统的建立第45-50页
   1.1 再生系统的建立第45-48页
    1.1.1 叶片不定芽诱导最佳配方筛选第45-47页
    1.1.2 不定芽生根诱导最佳配方筛选第47-48页
   1.2 卡那霉素敏感性实验第48-50页
    1.2.1 叶片外植体不定芽诱导卡那霉敏感性试验第48-49页
    1.2.2 不定芽生根诱导卡那霉素敏感性试验第49-50页
  2 猕猴桃转化受体系统的建立第50-57页
   2.1 再生系统的建立第50-56页
    2.1.1 无菌叶片外植体的获取第50-51页
    2.1.2 叶片预培养第51页
    2.1.3 叶片不定芽诱导最佳配方筛选第51-54页
    2.1.4 不定芽生根诱导最佳配方筛选第54-56页
   2.2 卡那霉素敏感性实验第56-57页
    2.2.1 叶片卡那霉素敏感性实验第56-57页
    2.2.2 不定芽生根诱导卡那霉素敏感性试验第57页
 §2 转化及筛选第57-59页
  1 杨树转化及筛选第57-59页
  2 猕猴桃的转化及筛选第59页
 §3 分子生物学检测第59-62页
  1 PCR检测第59-61页
   1.1 杨树PCR检测第59-60页
   1.2 猕猴桃PCR检测第60-61页
  2 杨树Southern杂交第61页
  3 杨树Western杂交第61-62页
 §4 耐盐性测定第62-65页
  1 杨树耐盐性测定第62-64页
  2 猕猴桃耐盐性测定第64-65页
第四章 讨论第65-68页
 1 高效再生系统的建立第65页
 2 提高基因转化率第65-66页
  2.1 优选农杆菌菌株第65页
  2.2 使用乙酰丁香酮等vir基因活化剂第65-66页
  2.3 掌握好共培养时间第66页
  2.4 灵活使用卡那霉素第66页
  2.5 基因枪转化和叶盘法转化的结合使用第66页
 3 外源基因的整合及遗传效应分析第66-67页
 4 糖醇含量测定及与抗盐性关系研究第67页
 5 加强植物耐盐机理及高效表达载体构建研究第67-68页
结论第68-69页
致谢第69-70页
参考文献第70-76页
作者简介第76-77页
缩略词第77页

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