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携带卵清蛋白T细胞表位的兔出血症病毒VP60蛋白病毒样颗粒的表达及其免疫原性研究

目录第1-7页
摘要第7-9页
ABSTRACT第9-12页
縮略词表第12-14页
第一章 文献综述:兔出血症(RHD)的研究进展第14-40页
 1 兔病毒性出血症的流行现状第14-16页
 2 RHDV的分类第16页
 3 RHDV的形态特征第16-17页
 4 RHDV病毒基因组结构与功能第17-18页
 5 结构蛋白第18-20页
   ·VP60第19-20页
   ·VP10第20页
 6 非结构蛋白第20-21页
 7 病毒的理化特性第21页
 8 病毒的血凝性第21-22页
 9 血清型及进化特点第22页
 10 RHDV致病性第22-23页
 11 RHDV的培养第23-24页
 12 RHDV的实验室检测第24-25页
 13 不同载体表达兔出血症病毒VP60蛋白的研究进展第25-28页
   ·杆状病毒—昆虫细胞表达系统第26页
   ·大肠杆菌表达系统第26-27页
   ·酵母表达系统第27-28页
   ·植物表达系统第28页
   ·腺病毒表达载体第28页
 14 兔出血症灭活疫苗研究进展第28-29页
 15 兔出血症病毒重组病毒疫苗第29-30页
 16 关于RHDV疫苗存在的问题与展望第30-32页
 参考文献第32-40页
第二章 :四种携带OVA CD8~+T细胞表位重组穿梭载体的构建第40-64页
 摘要第40-41页
 1 材料与方法第41-48页
   ·质粒、菌种第41页
   ·主要试剂与工具酶第41页
   ·核酸序列分析第41页
   ·构建图示第41-42页
   ·引物设计第42-43页
   ·目的基因的扩增第43-45页
     ·常规方法PCR构建目的基因G-V-0-579第43页
     ·重叠区扩增基因拼接法(SOE法)构建目的基因G-v-o-502-510、G-v-o-411-417、G-v-o-302-309第43-45页
   ·T/A克隆与鉴定第45-46页
   ·重组转移载体的构建与鉴定第46-47页
   ·穿梭载体Bacmid的构建与鉴定第47-48页
 2 结果第48-57页
   ·重组穿梭载体Bacmid-V-579的构建第48-50页
   ·重组穿梭载体Bacmid-V-502-510、Bacmid-V-411-417、Bacmid-V-302-309的构建第50-57页
 3 讨论第57-60页
   ·外源表位插入位置的选择第57-58页
   ·SOE法操作要点第58-60页
 参考文献第60-62页
 ABSTRACT第62-64页
第三章 :四种嵌合蛋白的表达及鉴定第64-80页
 摘要第64-65页
 1 材料与方法第65-69页
   ·质粒、菌株与细胞第65页
   ·主要试剂与工具酶第65页
   ·重组杆状病毒的构建和筛选第65-66页
   ·重组病毒的传代与初步鉴定第66-68页
   ·表达产物的鉴定第68-69页
 2 结果第69-73页
   ·重组蛋白的表达鉴定第69-72页
   ·红细胞凝集特性鉴定第72-73页
 3 讨论第73-76页
   ·嵌合蛋白的红细胞凝集特性第73页
   ·免疫荧光和western blot第73-74页
   ·RHDV VLPs的构建第74-76页
 参考文献第76-79页
 ABSTRACT第79-80页
第四章 嵌合蛋白的电镜观察和免疫原性研究第80-94页
 摘要第80页
 1 材料与方法第80-83页
   ·试剂、培养基及重组病毒第80-81页
   ·实验动物第81页
   ·嵌合蛋白的电镜观察第81页
   ·嵌合蛋白免疫原性的研究第81-83页
 2 结果第83-86页
   ·电镜观察第83-84页
   ·小鼠血清中VP60抗体水平的检测第84-85页
   ·小鼠血清中TNF-α的含量检测第85-86页
 3 讨论第86-89页
   ·电镜观察重组蛋白VLPs的形成第86-87页
   ·插入位点与体液免疫应答相关性第87页
   ·VLPs与细胞免疫应答相关性第87-89页
 参考文献第89-92页
 ABSTRACT第92-94页
全文总结第94-96页
附录第96-100页
致谢第100页

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