| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 符号说明 | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-15页 |
| 实验技术路线 | 第15-17页 |
| 1. HCV NS3 helicase及其突变型质粒的构建 | 第15-16页 |
| 2. 重组质粒以及蛋白缺陷重组质粒在HEK-293T细胞中的表达 | 第16-17页 |
| 1 材料与方法 | 第17-38页 |
| ·实验材料 | 第17-20页 |
| ·细菌菌株 | 第17页 |
| ·质粒 | 第17-19页 |
| ·实验所用细胞 | 第19页 |
| ·主要试剂及来源 | 第19页 |
| ·实验所需主要仪器设备 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-38页 |
| ·pJFH1和pSL87质粒的提取 | 第20-21页 |
| ·HCV NS3解旋酶质粒的构建 | 第21-26页 |
| ·HCV NS3 helicase氨基酸突变质粒的构建 | 第26-30页 |
| ·HCV NS3 helicase蛋白表达缺陷型质粒的构建 | 第30-31页 |
| ·HEK-293T细胞培养 | 第31页 |
| ·磷酸钙转染法转染HEK-293T细胞 | 第31-32页 |
| ·萤火虫荧光素酶测定 | 第32-33页 |
| ·双荧光素酶表达的检测 | 第33-34页 |
| ·半定量RT-PCR | 第34-37页 |
| ·统计学分析 | 第37-38页 |
| 2 实验结果 | 第38-48页 |
| ·pSL331/pSL332质粒结构及质粒构建 | 第38页 |
| ·氨基酸突变的pSL337/pSL338质粒构建 | 第38-39页 |
| ·HCV NS3 helicase氨基酸突变质粒测序鉴定 | 第39-40页 |
| ·HCV NS3 helicase蛋白表达缺陷的质粒构建 | 第40-41页 |
| ·HCV NS3 helicase蛋白表达缺陷的载体pCMV-mNS3 helicase的测序鉴定 | 第41-42页 |
| ·转染细胞中荧光素酶的表达 | 第42-45页 |
| ·pSL331/pSL332转染细胞后萤火虫荧光素酶的表达 | 第42-43页 |
| ·pSL332/pSL337/pSL338转染细胞后萤火虫荧光素酶的表达 | 第43-44页 |
| ·pSL332/pSL336转染细胞后萤火虫荧光素酶的相对表达 | 第44-45页 |
| ·RT-PCR检测HCV pCMVNCRLuc和pRL-TK在293T细胞中的表达 | 第45-46页 |
| ·RT-PCR检测的IFN-β和PKR的mRNA的表达 | 第46-48页 |
| 3 讨论 | 第48-51页 |
| ·翻译启动活性检测系统 | 第48页 |
| ·HCV翻译启动活性分析 | 第48-49页 |
| ·HCVNS3解旋酶对HCV翻译自身调控机制的探讨 | 第49-51页 |
| 4 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 综述 | 第55-64页 |
| 参考文献 | 第61-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
