| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-13页 |
| 2 DNA疫苗pSVK-CAVA高稳定性宿主菌的筛选与鉴定 | 第13-27页 |
| ·实验材料 | 第13-16页 |
| ·质粒 | 第13页 |
| ·菌种 | 第13页 |
| ·细胞 | 第13-14页 |
| ·酶及主要试剂 | 第14-15页 |
| ·主要仪器设备 | 第15页 |
| ·主要溶液及配置 | 第15-16页 |
| ·实验方法 | 第16-22页 |
| ·用氯化钙制备感受态细胞 | 第16-17页 |
| ·转化感受态细胞 | 第17页 |
| ·质粒小提 | 第17页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第17-18页 |
| ·紫外分光光度计测OD值 | 第18页 |
| ·菌种培养条件 | 第18页 |
| ·宿主菌生长状态和质粒质量监测方法 | 第18页 |
| ·原始种子库的建立 | 第18页 |
| ·主种子库的建立 | 第18-19页 |
| ·工作种子库的建立 | 第19页 |
| ·工作种子库稳定性检测 | 第19页 |
| ·工程菌形态和革兰氏染色特征检测 | 第19-20页 |
| ·工程菌生化特征检测 | 第20页 |
| ·质粒pSVK-CAVA大小和酶切鉴定 | 第20页 |
| ·工作种子库质粒大量提取 | 第20-21页 |
| ·通过Invitrogen公司的Lipofectamine 2000试剂将大提的质粒pSVK-CAVA转染至293T细胞 | 第21页 |
| ·免疫荧光检测质粒pSVK-CAVA表达 | 第21-22页 |
| ·工程菌传代稳定性检测 | 第22页 |
| ·结果 | 第22-25页 |
| ·宿主菌筛选 | 第22-23页 |
| ·三级种子库的建立及工作种子库的稳定性检测 | 第23-25页 |
| ·细菌形态和革兰氏染色特征及其生化特征 | 第25页 |
| ·讨论 | 第25-27页 |
| 3 工程菌E.coli CAVA发酵培养基的优化 | 第27-44页 |
| ·实验材料 | 第27-31页 |
| ·菌种 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27-28页 |
| ·主要溶液及配置 | 第28-30页 |
| ·主要仪器 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-32页 |
| ·基础培养基的筛选 | 第31页 |
| ·单因素试验确定最佳氮源和碳源 | 第31页 |
| ·Plackett-Burman(PB)设计筛选影响质粒摇瓶发酵的显著因素 | 第31-32页 |
| ·最陡爬坡法实验 | 第32页 |
| ·响应面法确定显著影响因素的最佳取值 | 第32页 |
| ·结果 | 第32-42页 |
| ·基础培养基的筛选 | 第32-34页 |
| ·不同碳源对质粒产量的影响 | 第34页 |
| ·不同氮源对质粒产量的影响 | 第34页 |
| ·Plackett-Burman设计筛选影响质粒摇瓶发酵的显著因素 | 第34-37页 |
| ·最陡爬坡法确定响应面因素水平的中心点 | 第37页 |
| ·中心复合设计(Center Composite Design；CCD) | 第37-39页 |
| ·二次回归拟合及方差分析 | 第39-40页 |
| ·显著因素水平的优化 | 第40-42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| 5 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-47页 |
| 综述 | 第47-54页 |
| 参考文献 | 第52-54页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果目录 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
