| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 英文缩略词表 | 第14-16页 |
| 第一部分 文献综述 | 第16-40页 |
| 第一章 成体干细胞简介 | 第16-20页 |
| 1. 成体干细胞与脂肪干细胞 (ASCs) | 第16-17页 |
| 2. 成体干细胞在农业领域的应用 | 第17-20页 |
| 第二章 细胞核重编程常用实验技术 | 第20-26页 |
| 1. 体细胞核移植 (SCNT) 重编程 | 第20-22页 |
| 2. 特定转录因子诱导重编程 | 第22-26页 |
| 第三章 猪多能性干细胞研究进展 | 第26-32页 |
| 1. 猪胚胎干细胞 (ESCs) 概况 | 第26-29页 |
| 2. 猪诱导性多能干细胞 (iPSCs) 研究意义、现状和展望 | 第29-32页 |
| 附表 | 第32-40页 |
| 第二部分 试验研究 | 第40-91页 |
| 第一章 猪ASCs分离和鉴定 | 第40-59页 |
| 1. 材料与方法 | 第41-51页 |
| ·实验动物 | 第41页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第41页 |
| ·抗体 | 第41-42页 |
| ·主要仪器与耗材 | 第42页 |
| ·细胞培养相关试剂配制 | 第42-43页 |
| ·猪ASCs原代培养 | 第43-44页 |
| ·猪ASCs的冻存 | 第44页 |
| ·猪ASCs的复苏 | 第44页 |
| ·猪ASCs的传代 | 第44-45页 |
| ·增殖活力检测 | 第45页 |
| ·核型检测 | 第45-46页 |
| ·表面抗原流式检测 | 第46-47页 |
| ·成脂诱导 | 第47页 |
| ·成骨诱导 | 第47-48页 |
| ·RNA抽提 | 第48-49页 |
| ·RNA逆转录 | 第49页 |
| ·实时荧光定量PCR (Real time PCR) | 第49-50页 |
| ·甲基化免疫荧光染色 | 第50-51页 |
| ·数据统计 | 第51页 |
| 2. 结果 | 第51-56页 |
| ·猪ASCs的增殖活力与传代能力 | 第51-52页 |
| ·猪ASCs的核型分析 | 第52-53页 |
| ·猪ASCs鉴定 | 第53-55页 |
| ·猪ASCs间充质干细胞特异性标记物的表达情况 | 第53页 |
| ·猪ASCs的成脂分化 | 第53-54页 |
| ·猪ASCs的成骨分化 | 第54-55页 |
| ·猪ASCs重编程转录因子的内源表达情况 | 第55页 |
| ·猪ASCs全基因组DNA甲基化水平 | 第55-56页 |
| 3. 讨论 | 第56-59页 |
| ·关于猪ASCs系的建立 | 第56-57页 |
| ·猪ASCs存在高异倍体率 | 第57页 |
| ·猪ASCs低表达内源重编程转录因子 | 第57-58页 |
| ·猪ASCs处于较低水平的全基因组DNA甲基化修饰状态 | 第58-59页 |
| 第二章 利用特定转录因子对猪ASCs进行重编程 | 第59-91页 |
| 1. 材料与方法（内容与第一章相同者，省略） | 第60-76页 |
| ·实验动物 | 第60页 |
| ·细胞 | 第60页 |
| ·菌株 | 第60页 |
| ·质粒 | 第60-61页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第61-62页 |
| ·抗体 | 第62页 |
| ·主要仪器与耗材 | 第62-63页 |
| ·质粒的大量制备 | 第63-64页 |
| ·细胞培养相关试剂的配制 | 第64-65页 |
| ·分子克隆相关试剂的配制 | 第65页 |
| ·小鼠胎儿成纤维细胞 (MEFs) 原代培养 | 第65-66页 |
| ·MEFs的冻存 | 第66页 |
| ·MEFs的复苏 | 第66页 |
| ·MEFs的传代 | 第66-67页 |
| ·饲养层细胞的制备 | 第67页 |
| ·细胞转染和病毒包装 | 第67-69页 |
| ·猪iPSCs产生方案 | 第69-70页 |
| ·诱导效率计算 | 第70页 |
| ·猪iPSCs传代培养与冻存 | 第70页 |
| ·碱性磷酸酶染色 | 第70-71页 |
| ·蛋白免疫荧光染色 | 第71页 |
| ·基因组DNA制备 | 第71-72页 |
| ·亚硫酸氢钠测序 (Bisulfite genomic sequencing) | 第72-75页 |
| ·拟胚体形成 | 第75-76页 |
| ·畸胎瘤形成 | 第76页 |
| 2. 结果 | 第76-86页 |
| ·猪体细胞的重编程 | 第76-79页 |
| ·猪ASCs在无饲养层细胞、无血清体系重编程成iPSCs | 第76-78页 |
| ·猪ASCs重编程效率分析 | 第78-79页 |
| ·猪iPSCs的多能性鉴定 | 第79-85页 |
| ·猪iPSCs的形态学特征和碱性磷酸酶活性 | 第79-80页 |
| ·猪iPSCs的核型分析 | 第80页 |
| ·猪iPSCs多能性基因的内源表达情况 | 第80-81页 |
| ·猪iPSCs的多能性蛋白标记物的表达情况 | 第81-82页 |
| ·猪iPSCs内源OCT4 基因启动子区域的去甲基化程度分析 | 第82-83页 |
| ·猪iPSCs在体内外的分化能力 | 第83-85页 |
| ·猪iPSCs的拟胚体分析 | 第83-85页 |
| ·猪iPSCs的畸胎瘤分析 | 第85页 |
| ·猪iPSCs外源导入基因的沉默 | 第85-86页 |
| 3. 讨论 | 第86-91页 |
| ·源头细胞类型影响猪iPSCs的获取与应用 | 第86页 |
| ·猪ASCs拥有很高的重编程效率 | 第86-87页 |
| ·猪ASCs在无饲养层细胞、无血清条件下能够高效获得iPSCs | 第87页 |
| ·猪ASCs来源的iPSCs存在高异倍体率 | 第87页 |
| ·猪iPSCs高表达多种内源多能性基因 | 第87-88页 |
| ·猪iPSCs表达多能性蛋白标记物 | 第88页 |
| ·猪iPSCs内源OCT4 基因启动子区域去甲基化不彻底 | 第88-89页 |
| ·猪iPSCs能够实现多向分化的潜能 | 第89页 |
| ·药物可诱导型猪iPSCs高度依赖外源重编程转录因子的表达 | 第89-91页 |
| 结论 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-110页 |
| 致谢 | 第110-112页 |
| 个人简历 | 第112-113页 |
