| 中文摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-5页 |
| 中文文摘 | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-12页 |
| 绪论 | 第12-26页 |
| 一、亚油酸 | 第12-15页 |
| ·油酸的定义 | 第12页 |
| ·油酸的分布 | 第12-13页 |
| ·亚油酸的结构 | 第13页 |
| ·油酸的理化性质 | 第13页 |
| ·油酸的生物合成途径 | 第13-14页 |
| ·油酸的功能 | 第14-15页 |
| 二、脂肪酸脱饱和酶 | 第15-22页 |
| ·脂肪酸脱饱和酶的分类 | 第15-16页 |
| ·脂肪酸脱饱和酶的结构 | 第16页 |
| ·脂肪酸脱饱和酶分子研究进展 | 第16-17页 |
| ·Δ12-脂肪酸脱饱和酶 | 第17-19页 |
| ·Δ9-脂肪酸脱饱和酶 | 第19-20页 |
| ·Δ6-脂肪酸脱饱和酶 | 第20-21页 |
| ·脂肪酸脱饱和酶的应用 | 第21-22页 |
| 三、启动子 | 第22-24页 |
| ·启动子的定义 | 第22页 |
| ·原核启动子 | 第22页 |
| ·真核启动子 | 第22-23页 |
| ·脂肪酸脱饱和酶启动子 | 第23-24页 |
| 四、本研究的目的意义与主要内容 | 第24-26页 |
| ·研究目的及意义 | 第24页 |
| ·主要内容 | 第24-26页 |
| 第一章 Δ9-脱饱和酶和Δ12-脱饱和酶基因克隆及分析 | 第26-42页 |
| 第一节 材料与方法 | 第26-33页 |
| 1 材料 | 第26-27页 |
| ·菌株和质粒 | 第26页 |
| ·主要试剂及培养基 | 第26-27页 |
| ·主要仪器 | 第27页 |
| 2 方法 | 第27-33页 |
| ·Δ9-脱饱和酶和Δ12-脱饱和酶基因克隆 | 第27-31页 |
| ·DNA提取 | 第27-28页 |
| ·PCR扩增 | 第28-29页 |
| ·PCR产物回收 | 第29-30页 |
| ·载体的连接 | 第30页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第30-31页 |
| ·菌落PCR验证 | 第31页 |
| ·序列测定与分析 | 第31页 |
| ·Δ9-脱饱和酶和Δ12-脱饱和酶cDNA克隆 | 第31-33页 |
| ·RNA提取 | 第31-32页 |
| ·反转录 | 第32页 |
| ·第二链的合成 | 第32-33页 |
| ·PCR产物回收 | 第33页 |
| ·载体的连接 | 第33页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第33页 |
| ·菌落PCR验证 | 第33页 |
| ·序列测定及分析 | 第33页 |
| 第二节 结果与分析 | 第33-40页 |
| ·Δ9-脱饱和酶和Δ12-脱饱和酶DNA克隆 | 第33-36页 |
| ·DNA提取 | 第33页 |
| ·Δ9-脱饱和酶和Δ12-脱饱和酶克隆 | 第33-34页 |
| ·菌落PCR验证 | 第34页 |
| ·Δ9-脱饱和酶和Δ12-脱饱和酶DNA测序结果 | 第34-36页 |
| ·Δ9-脱饱和酶和Δ12-脱饱和酶cDNA克隆 | 第36-40页 |
| ·RNA提取 | 第36-37页 |
| ·Δ9-脱饱和酶和Δ12-脱饱和酶cDNA扩增 | 第37页 |
| ·菌落PCR验证 | 第37-38页 |
| ·Δ9-脱饱和酶和Δ12-脱饱和酶cDNA序列测序结果 | 第38-40页 |
| 第三节 小结 | 第40-42页 |
| 第二章 脱饱和酶基因在酿酒酵母中的表达 | 第42-54页 |
| 第一节 材料和方法 | 第42-48页 |
| 1 材料 | 第42-43页 |
| ·菌株和质粒 | 第42页 |
| ·主要培养基及试剂 | 第42-43页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| 2 方法 | 第43-48页 |
| ·PYMD9和PYMD12质粒的构建 | 第43-45页 |
| ·cDNA与pYES2.0载体的连接 | 第43-44页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第44页 |
| ·菌落PCR验证 | 第44页 |
| ·重组质粒的提取和双酶切验证 | 第44-45页 |
| ·序列测定与分析 | 第45页 |
| ·酿酒酵母工程菌的表达 | 第45-47页 |
| ·酿酒酵母感受态细胞的制备 | 第45-46页 |
| ·醋酸锂转化 | 第46页 |
| ·菌液PCR验证 | 第46页 |
| ·酿酒酵母工程菌的诱导表达 | 第46-47页 |
| ·重组表达产物的GC-MS分析 | 第47-48页 |
| 第二节 结果与分析 | 第48-52页 |
| ·重组质粒菌落PCR验证 | 第48页 |
| ·重组质粒双酶切验证 | 第48-49页 |
| ·醋酸铿法转化酿酒酵母 | 第49页 |
| ·转化子菌液PCR验证 | 第49-50页 |
| ·酿酒酵母工程菌的诱导表达 | 第50-51页 |
| ·脂肪酸转换效率 | 第51-52页 |
| 第三节 小结 | 第52-54页 |
| 第三章 启动子MD6p和GAP对Δ12-脱饱和酶表达效率的影响 | 第54-66页 |
| 第一节 材料和方法 | 第54-58页 |
| 1 材料 | 第54-55页 |
| ·菌株和质粒 | 第54页 |
| ·主要试剂培养基 | 第54页 |
| ·主要仪器 | 第54-55页 |
| 2 方法 | 第55-58页 |
| ·表达载体pYGAPMD12和pYMD6pMD12的构建 | 第55-58页 |
| ·表达载体pYGAPMD12的构建 | 第55-57页 |
| ·GAP片段的克隆 | 第56页 |
| ·PCR产物回收 | 第56页 |
| ·表达载体的连接 | 第56-57页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第57页 |
| ·菌落PCR验证 | 第57页 |
| ·双酶切验证 | 第57页 |
| ·序列测定 | 第57页 |
| ·pYMD6pMD12质粒的构建 | 第57-58页 |
| ·Δ12-脱饱和酶cDNA与表达载体的连接 | 第57-58页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第58页 |
| ·菌落PCR验证 | 第58页 |
| ·双酶切验证 | 第58页 |
| ·序列测定及分析 | 第58页 |
| ·载体pYGAPMD12和pYMD6pMD12的表达 | 第58页 |
| 第二节 结果与分析 | 第58-64页 |
| ·pYGAPMD12质粒构建 | 第58-60页 |
| ·GAP片段的克隆 | 第58-59页 |
| ·菌落PCR验证 | 第59页 |
| ·双酶切验证 | 第59-60页 |
| ·GAP序列测定 | 第60页 |
| ·pYMD6pMD12质粒的构建 | 第60-61页 |
| ·Δ12-脱饱和酶cDNA和pYMD12载体双酶切回收 | 第60页 |
| ·菌落PCR验证 | 第60-61页 |
| ·双酶切验证 | 第61页 |
| ·pYGAPMD12和pYMD6pMD12的表达及产物GC/MS分析 | 第61-64页 |
| ·醋酸锂法转化酿酒酵母 | 第61-62页 |
| ·转化子菌液PCR验证 | 第62页 |
| ·酿酒酵母工程菌的诱导表达 | 第62-63页 |
| ·脂肪酸转化效率 | 第63-64页 |
| 第三节 小结 | 第64-66页 |
| 第四章 结论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 附录 主要符号对照表 | 第76-78页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第78-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
