| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-32页 |
| 第一章 棉花纤维初始发育研究进展 | 第14-20页 |
| 1 棉花纤维的发育 | 第14-15页 |
| 2 棉花纤维初始发育研究进展 | 第15-18页 |
| ·棉花纤维初始发育机理的研究 | 第15-16页 |
| ·棉花纤维与拟南芥表皮毛的联系 | 第16-17页 |
| ·棉花纤维初始发育相关基因研究进展 | 第17-18页 |
| 3 影响棉花纤维分化和发育的因素 | 第18-20页 |
| 第二章 泛素连接酶研究进展 | 第20-24页 |
| 1 泛素—蛋白酶体通路的机理 | 第20-21页 |
| 2 泛素连接酶的种类 | 第21-24页 |
| ·含HECT结构域的E3 | 第22页 |
| ·含RING结构域的E3 | 第22页 |
| ·含U-box结构域的E3 | 第22-24页 |
| 第三章 蛋白质相互作用 | 第24-30页 |
| 1 酵母双杂交系统 | 第24-27页 |
| ·酵母双杂交系统的基本原理 | 第24-25页 |
| ·酵母双杂交系统的优缺点 | 第25页 |
| ·酵母双杂交系统的发展与改进 | 第25-26页 |
| ·酵母双杂交系统的应用 | 第26-27页 |
| 2 其它蛋白质相互作用技术研究 | 第27-30页 |
| ·Pull-down技术 | 第27-28页 |
| ·生物信息学分析方法 | 第28页 |
| ·其它蛋白质相互作用技术 | 第28-30页 |
| 本研究的目的和意义 | 第30-32页 |
| 第二部分 研究报告 | 第32-88页 |
| 第四章 棉花泛素连接酶基因GhMAC3的克隆与鉴定 | 第32-60页 |
| 1 材料与方法 | 第32-46页 |
| ·实验材料 | 第32-35页 |
| ·植物材料 | 第32页 |
| ·菌株、生化试剂与载体 | 第32-33页 |
| ·PCR引物 | 第33页 |
| ·常用溶液及培养基 | 第33-34页 |
| ·RNA提取所需试剂 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-46页 |
| ·棉花胚珠总RNA的提取及纯化 | 第35-36页 |
| ·棉花泛素连接酶基因GhMAC3的3’RACE | 第36-39页 |
| ·3’RACE的cDNA第一链合成 | 第36页 |
| ·内标扩增检测 | 第36-37页 |
| ·目的基因的3'RACE | 第37页 |
| ·PCR扩增产物的琼脂糖电泳、回收 | 第37-38页 |
| ·回收产物连接、转化及测序 | 第38-39页 |
| ·棉花泛素连接酶基因GhMAC3的5’RACE | 第39-41页 |
| ·5’RACE的cDNA第一链合成 | 第39-40页 |
| ·目的基因的5’RACE | 第40-41页 |
| ·棉花泛素连接酶基因GhMAC3全长的克隆及质粒的提取 | 第41-42页 |
| ·棉花泛素连接酶基因GhMAC3的序列分析 | 第42-43页 |
| ·棉花泛素连接酶基因GhMAC3的组织表达特征分析 | 第43页 |
| ·棉花泛素连接酶基因GhMAC3的亚细胞定位 | 第43-46页 |
| ·洋葱表皮瞬时表达载体的制备 | 第43-45页 |
| ·基因枪转化 | 第45-46页 |
| 2 结果分析 | 第46-57页 |
| ·棉花胚珠总RNA提取及反转录 | 第46页 |
| ·棉花泛素连接酶基因GhMAC3的RACE | 第46-54页 |
| ·RACE第一链合成的内标检测 | 第46-47页 |
| ·棉花泛素连接酶基因GhMAC3的RACE | 第47-48页 |
| ·棉花泛素连接酶基因GhMAC3全长的扩增 | 第48-50页 |
| ·棉花泛素连接酶基因GhMAC3的生物信息学分析 | 第50-54页 |
| ·棉花泛素连接酶基因GhMAC3的组织表达特征分析 | 第54-56页 |
| ·棉花不同组织RNA的提取 | 第54-55页 |
| ·组织表达特征分析 | 第55-56页 |
| ·棉花泛素连接酶基因GhMAC3的亚细胞定位 | 第56-57页 |
| ·洋葱表皮瞬时表达载体的构建 | 第56页 |
| ·细胞定位分析 | 第56-57页 |
| 3 讨论与结论 | 第57-60页 |
| 第五章 棉花GhMAC3相互作用蛋白质的酵母双杂交筛选 | 第60-74页 |
| 1 材料与方法 | 第60-67页 |
| ·材料 | 第60-61页 |
| ·菌株、质粒及引物 | 第60页 |
| ·常用药品 | 第60-61页 |
| ·常用酵母培养基配制 | 第61页 |
| ·棉花胚珠cDNA酵母文库 | 第61页 |
| ·方法 | 第61-67页 |
| ·棉花泛素连接酶GhMAC3酵母双杂交诱饵载体的构建 | 第61-63页 |
| ·诱饵质粒转化酵母 | 第63-64页 |
| ·酵母感受态的制备 | 第63页 |
| ·质粒转化酵母感受态细胞 | 第63-64页 |
| ·诱饵毒性检测及自激活检测 | 第64页 |
| ·毒性检测 | 第64页 |
| ·自激活检测 | 第64页 |
| ·酵母双杂交文库的筛选 | 第64-65页 |
| ·阳性克隆的鉴定及测序 | 第65-67页 |
| ·酵母质粒的提取 | 第65-66页 |
| ·阳性质粒的转化 | 第66页 |
| ·阳性克隆插入片段的检测 | 第66-67页 |
| ·阳性克隆比对分析 | 第67页 |
| 2 结果分析 | 第67-71页 |
| ·酵母双杂交诱饵载体的构建 | 第67-68页 |
| ·诱饵蛋白的毒性及自激活检测 | 第68-69页 |
| ·毒性检测 | 第68页 |
| ·自激活检测 | 第68-69页 |
| ·酵母双杂交阳性克隆的测序与验证 | 第69页 |
| ·酵母双杂交阳性克隆的序列分析 | 第69-71页 |
| 3 讨论与结论 | 第71-74页 |
| 第六章 棉花GhMAC3转拟南芥植株的获得及性状鉴定 | 第74-88页 |
| 1 材料和方法 | 第74-80页 |
| ·材料 | 第74-75页 |
| ·菌株、载体、试剂和仪器 | 第74-75页 |
| ·常用培养基及溶液 | 第75页 |
| ·拟南芥种子 | 第75页 |
| ·方法 | 第75-80页 |
| ·棉花泛素连接酶GhMAC3植物表达载体的构建 | 第75-77页 |
| ·植物表达载体的农杆菌转化 | 第77-78页 |
| ·农杆菌感受态的制备及转化步骤 | 第77页 |
| ·菌落PCR检测 | 第77-78页 |
| ·拟南芥的种植 | 第78-79页 |
| ·拟南芥无菌培养 | 第78-79页 |
| ·拟南芥土壤直播种植 | 第79页 |
| ·拟南芥的转化 | 第79页 |
| ·转基因拟南芥的筛选 | 第79-80页 |
| ·拟南芥的初筛 | 第79页 |
| ·拟南芥初筛的验证 | 第79-80页 |
| ·拟南芥的表型观察 | 第80页 |
| 2 结果 | 第80-85页 |
| ·棉花泛素连接酶GhMAC3植物表达载体的构建 | 第80-81页 |
| ·转基因植株的获得 | 第81-83页 |
| ·拟南芥表型观察 | 第83-85页 |
| 3 讨论与结论 | 第85-88页 |
| 第三部分 全文结论 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-100页 |
| 附录 | 第100-110页 |
| 致谢 | 第110页 |
