| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-16页 |
| ·研究的意义和背景 | 第9-10页 |
| ·研究现状 | 第10-13页 |
| ·胰岛素的结构 | 第10-11页 |
| ·胰岛素的性质 | 第11页 |
| ·胰岛素类药物的研究进展 | 第11-13页 |
| ·重组人胰岛素的研究 | 第13-15页 |
| ·人胰岛素前体在大肠杆菌中的表达 | 第13页 |
| ·人胰岛素原在酿酒酵母中的表达 | 第13-14页 |
| ·利用毕赤酵母表达人胰岛素 | 第14-15页 |
| ·研究的目的和技术路线 | 第15-16页 |
| 第二章 人胰岛素前体在毕赤酵母中的表达及其活性 | 第16-37页 |
| ·前言 | 第16页 |
| ·实验材料 | 第16-21页 |
| ·菌株及质粒 | 第16页 |
| ·酶及试剂 | 第16-18页 |
| ·主要仪器 | 第18-19页 |
| ·主要试剂配制 | 第19-21页 |
| ·试验方法 | 第21-29页 |
| ·载体 pPGAPZAAa 图谱 | 第21-22页 |
| ·IS1 基因结构的设计与合成 | 第22页 |
| ·重组质粒的构建 | 第22-24页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第24-25页 |
| ·重组 pGAPZa–IS1 转化毕赤酵母 SMD1168 | 第25-26页 |
| ·重组蛋白 pGAPZa-IS1 的筛选与鉴定 | 第26-27页 |
| ·重组酵母的表达及表达产物的鉴定 | 第27-28页 |
| ·表达产物的 Western Blot 鉴定 | 第28页 |
| ·胰岛素前体的纯化及 C 肽的切除 | 第28-29页 |
| ·胰岛素活性的初步检测 | 第29页 |
| ·结果与分析 | 第29-34页 |
| ·PCR 鉴定结果 | 第29页 |
| ·IS1 与 pGAPZa 的双酶切及回收结果 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第30-31页 |
| ·酵母重组子的筛选和鉴定 | 第31-32页 |
| ·胰岛素前体的表达及鉴定 | 第32页 |
| ·胰岛素前体的纯化和人工 C 肽的切除 | 第32-34页 |
| ·胰岛素的活性检测 | 第34页 |
| ·讨论 | 第34-36页 |
| ·胰岛素前体的设计 | 第34-35页 |
| ·毕赤酵母载体的选择 | 第35页 |
| ·重组子线性化体系的调整 | 第35页 |
| ·Western blot 阴性的原因 | 第35页 |
| ·电泳条件的调整 | 第35-36页 |
| ·SP Sepharose FF 层析洗脱液 | 第36页 |
| ·本章小结 | 第36-37页 |
| 第三章 人胰岛素前体在大肠杆菌中的表达 | 第37-50页 |
| ·前言 | 第37页 |
| ·实验材料 | 第37-39页 |
| ·菌株及质粒 | 第37页 |
| ·酶及试剂 | 第37-38页 |
| ·主要仪器 | 第38页 |
| ·主要试剂配制 | 第38-39页 |
| ·试验方法 | 第39-44页 |
| ·载体 pTWIN1 的图谱 | 第39-40页 |
| ·IS2 的结构设计及基因合成 | 第40页 |
| ·重组质粒的构建 | 第40-42页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组蛋白 pTWIN1-IS2 的诱导表达 | 第43-44页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第44页 |
| ·结果与分析 | 第44-48页 |
| ·质粒的提取 | 第44-45页 |
| ·双酶切的结果 | 第45-46页 |
| ·重组质粒的构建结果 | 第46页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第46-47页 |
| ·胰岛素前体的表达 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| ·自剪切原核表达载体 | 第48-49页 |
| ·IPTG 浓度对表达的影响 | 第49页 |
| ·目的蛋白的可溶性 | 第49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 第四章 结论和创新点 | 第50-51页 |
| ·结论 | 第50页 |
| ·创新点 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简历 | 第55页 |
| 个人情况 | 第55页 |
| 教育背景 | 第55页 |
| 在研期间参与的课题与发表的论文 | 第55页 |