| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 目录 | 第13-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-44页 |
| ·骨发育和成骨细胞 | 第17-21页 |
| ·骨的特征与形成 | 第17-18页 |
| ·成骨细胞 | 第18-19页 |
| ·成骨细胞中的基因表达 | 第19-21页 |
| ·转录因子Runx2在骨发育中的功能 | 第21-24页 |
| ·Runx2是骨发育中最主要的调节因子 | 第21-22页 |
| ·Runx2的功能调控机制 | 第22-24页 |
| ·转录因子Osterix对骨形成的转录调节 | 第24-27页 |
| ·Osterix是成骨细胞特异性转录因子 | 第24-25页 |
| ·Osterix对骨形成和成骨细胞分化的重要性 | 第25-26页 |
| ·成骨细胞中的Osterix表达调控 | 第26-27页 |
| ·生长因子NELL-1对骨再生促进作用的研究 | 第27-40页 |
| ·人源NELL-1基因的鉴定 | 第28-29页 |
| ·NELL-1的蛋白特征 | 第29-31页 |
| ·NELL-1在小鼠骨骼发育中的关键作用 | 第31-33页 |
| ·NELL-1促进骨再生 | 第33-34页 |
| ·NELL-1促进骨再生的机制 | 第34-39页 |
| ·NELL-1机制研究与应用的前景 | 第39-40页 |
| ·基于基因与干细胞的骨再生与修复治疗 | 第40-44页 |
| ·骨再生与修复的重要性 | 第41-42页 |
| ·基于基因与干细胞的骨修复治疗 | 第42-44页 |
| 第二章 骨诱导因子NELL-1是Osterix的直接转录靶基因 | 第44-66页 |
| ·概述 | 第44-45页 |
| ·材料与方法 | 第45-48页 |
| ·细胞培养 | 第45页 |
| ·报告基因与表达质粒构建 | 第45-46页 |
| ·瞬时转染及报告基因分析 | 第46页 |
| ·电泳迁移率变动分析 | 第46-47页 |
| ·染色质免疫沉淀分析 | 第47页 |
| ·Osterix的RNA干涉 | 第47-48页 |
| ·数据统计 | 第48页 |
| ·实验结果 | 第48-61页 |
| ·NELL-1启动子区含有多个推定的Sp1位点(Sp1/Osterix结合位点) | 第48-49页 |
| ·人NELL-1启动子对Osterix应答 | 第49-50页 |
| ·Osterix的强制性表达在人成骨细胞和非成骨细胞中降低NELL-1mRNA水平 | 第50-52页 |
| ·Osterix对NELL-1启动子区Sp1位点的序列特异性结合 | 第52-55页 |
| ·Osterix在体内能够结合在内源性NELL-1启动子上 | 第55-57页 |
| ·Osterix下调NELL-1表达时不阻断Runx2对NELL-1启动子OSE2位点的结合 | 第57-59页 |
| ·Osterix siRNA能够增加Saos2细胞中NELL-1的mRNA水平及矿化程度 | 第59-61页 |
| ·讨论与小结 | 第61-66页 |
| 第三章 基于噬菌体文库展示技术的NELL-1结合蛋白鉴定 | 第66-84页 |
| ·概述 | 第66-67页 |
| ·材料与方法 | 第67-72页 |
| ·细胞、细菌及噬菌体培养 | 第67页 |
| ·Saos2细胞cDNA文库构建 | 第67-68页 |
| ·cDNA末端修饰 | 第68页 |
| ·cDNA片段的粒径分级 | 第68-69页 |
| ·cDNA片段的载体克隆与体外包装 | 第69页 |
| ·噬菌斑分析测定文库滴定量 | 第69-70页 |
| ·噬菌体文库扩增 | 第70-71页 |
| ·文库淘选 | 第71-72页 |
| ·噬菌斑基因组DNA提取、PCR扩增及分析 | 第72页 |
| ·实验结果 | 第72-80页 |
| ·Saos2细胞株cDNA群集的T7噬菌体文库构建成功 | 第72-76页 |
| ·T7噬菌体文库淘选结果 | 第76-80页 |
| ·讨论与小结 | 第80-84页 |
| 第四章 NELL-1与APR3结合影响成骨细胞增殖及分化 | 第84-109页 |
| ·概述 | 第84-85页 |
| ·材料与方法 | 第85-88页 |
| ·细胞培养 | 第85页 |
| ·质粒构建 | 第85页 |
| ·免疫共沉淀及westem印迹杂交 | 第85-86页 |
| ·免疫荧光染色 | 第86页 |
| ·NELL-1与APR3的共定位 | 第86页 |
| ·MTS细胞增殖分析 | 第86-87页 |
| ·碱性磷酸酶活性检测 | 第87页 |
| ·茜素红染色做矿化分析 | 第87页 |
| ·实时定量荧光PCR | 第87页 |
| ·数据统计 | 第87-88页 |
| ·实验结果 | 第88-105页 |
| ·APR3是NELL-1的直接结合蛋白 | 第88-95页 |
| ·APR3通过与NELL-1结合抑制成骨细胞增殖 | 第95-99页 |
| ·NELL-1部分地通过结合APR3来促进成骨细胞分化及矿化 | 第99-105页 |
| ·讨论与小结 | 第105-109页 |
| 第五章 结论 | 第109-111页 |
| 参考文献 | 第111-126页 |
| 作者简历 | 第126页 |
| 期间发表论文 | 第126-127页 |
