| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩略词表 | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1 概述 | 第11页 |
| 2 日本乙型脑炎病毒的病原学 | 第11-15页 |
| ·日本乙型脑炎病毒的分类及生物学特征 | 第11-13页 |
| ·蛋白的结构和功能 | 第13-15页 |
| ·结构蛋白 | 第13-14页 |
| ·非结构蛋白 | 第14-15页 |
| 3 日本乙型脑炎的流行病学 | 第15-16页 |
| ·日本乙型脑炎的分布特征 | 第15-16页 |
| ·传播媒介和传染源 | 第16页 |
| 4 猪流行性乙型脑炎的诊断方法 | 第16-21页 |
| ·猪流行性乙型脑炎的血清学诊断方法 | 第17-19页 |
| ·凝结性试验 | 第17-18页 |
| ·抗体标记技术 | 第18-19页 |
| ·猪日本乙型脑炎的其他血清学诊断方法 | 第19页 |
| ·猪流行性乙型脑炎的分子生物学诊断方法 | 第19-21页 |
| ·RT-PCR检测方法 | 第19-20页 |
| ·套式RT-PCR(RT-Nested-PCR)检测方法 | 第20页 |
| ·实时荧光PCR(Real-Time PCR)检测方法 | 第20-21页 |
| 本研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 第二章 实验研究 | 第23-43页 |
| 1 材料 | 第23-24页 |
| ·细菌 | 第23页 |
| ·血清 | 第23页 |
| ·主要试剂及配制 | 第23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 2 试验方法 | 第24-30页 |
| ·重组E蛋白包被抗原的制备 | 第24-27页 |
| ·pET28a(+)-E(BL21)重组菌的复苏与鉴定 | 第24页 |
| ·pET28a(+)-E(BL21)重组菌表达E蛋白的SDS-PAGE鉴定 | 第24-25页 |
| ·E蛋白的大量表达 | 第25页 |
| ·重组E蛋白的纯化 | 第25-26页 |
| ·E蛋白的Western blot分析 | 第26-27页 |
| ·猪乙型脑炎病毒ELISA抗体检测方法的建立 | 第27-29页 |
| ·确定最优条件之前,按以下步骤进行ELISA操作 | 第27页 |
| ·抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度的选择 | 第27页 |
| ·重组抗原包被条件的确定 | 第27页 |
| ·不同封闭液选择和最佳封闭时间的确定 | 第27-28页 |
| ·血清最适作用时间的选择 | 第28页 |
| ·酶标二抗最适合浓度的确定和最适作用时间的选择 | 第28页 |
| ·确定底物显色时间 | 第28页 |
| ·阴阳性的判定标准 | 第28-29页 |
| ·试剂盒的组装及其质量评价 | 第29-30页 |
| ·试剂盒的组装 | 第29页 |
| ·自制试剂盒和康百得猪乙脑抗体检测试剂盒的比较 | 第29页 |
| ·试剂盒的特异性 | 第29页 |
| ·试剂盒的重复性 | 第29页 |
| ·保质期实验 | 第29-30页 |
| 3 试验结果 | 第30-39页 |
| ·E蛋白包被抗原的制备 | 第30-32页 |
| ·pET28a(+)-E(BL21)重组菌的鉴定结果 | 第30页 |
| ·重组菌表达E蛋白的SDS-PAGE鉴定结果 | 第30-31页 |
| ·乙脑病毒E蛋白的亲和层析纯化和Western blot分析结果 | 第31-32页 |
| ·间接ELISA方法的建立及条件优化结果 | 第32-36页 |
| ·抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度的选择 | 第32-33页 |
| ·重组抗原包被条件的确定 | 第33-34页 |
| ·最佳封闭液和最优封闭时间的选择结果 | 第34页 |
| ·血清最适作用时间的选择 | 第34-35页 |
| ·酶标二抗最适浓度的确定和最适作用时间的选择 | 第35-36页 |
| ·底物显色时间的确定 | 第36页 |
| ·临界值的判定 | 第36页 |
| ·试剂盒的质量评价 | 第36-39页 |
| ·自制试剂盒和康百得猪乙脑抗体检测试剂盒的比较 | 第36-37页 |
| ·试剂盒的特异性试验结果 | 第37页 |
| ·试剂盒的重复性实验结果 | 第37-38页 |
| ·试剂盒的保质期实验结果 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-43页 |
| ·包被抗原E蛋白的制备 | 第39页 |
| ·ELISA最优条件的筛选 | 第39-40页 |
| ·试剂盒的组装 | 第40-41页 |
| ·试剂盒的质最评价 | 第41-43页 |
| 结论 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 致谢 | 第49-51页 |
| 附录二：主要试剂的配制 | 第51-52页 |
