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拟南芥HAI-1和AtCAL基因的功能和生理生化分析

摘要第1-7页
Abstract第7-10页
目录第10-13页
英文缩写词第13-15页
第1章 绪论第15-31页
   ·植物PP2C磷酸酶的研究第15-18页
     ·蛋白磷酸酶的分类第15页
     ·PP2C磷酸激酶的结构与生化特征第15-18页
   ·植物中PP2C的功能第18-27页
     ·PP2C参与ABA调控的胁迫信号传导第18-20页
     ·PP2C参与ABA调控的种子休眠/萌发信号途径第20-21页
     ·PP2C参与ABA调控的气孔运动第21-22页
     ·PP2C参与ABA调控的抗逆信号途径第22-24页
     ·拟南芥ABA信号途径PP2C负调控因子对逆境胁迫的响应特征第24-25页
     ·PP2C参与植物抗病反应第25页
     ·PP2C在植物体内与转录因子和激酶相互作用第25-26页
     ·干旱胁迫参与PP2C基因的调节第26-27页
   ·ABA胁迫下诱导保卫细胞气孔的关闭第27-29页
     ·植物中ABA调控气孔开放的三种模式第27-28页
     ·植物保卫细胞中ABA信号的传递网络第28-29页
   ·本论文工作设想第29-31页
第2章 拟南芥HAI-1基因的生物信息学分析第31-39页
   ·实验材料第31页
     ·试验材料第31页
     ·相关硬件及软件第31页
   ·实验方法第31-32页
     ·转录调控区域元件分析第31-32页
     ·HAI-1蛋白的一级结构分析第32页
     ·HAI-1蛋白的三级结构分析第32页
   ·实验结果第32-38页
     ·启动子顺式作用元件分析结果第32-35页
     ·蛋白的一级结构分析结果第35-37页
     ·蛋白的三级结构分析结果第37-38页
   ·讨论第38-39页
第3章 拟南芥HAI-1基因的表达及功能分析第39-78页
   ·材料与方法第39-52页
     ·实验材料第39-40页
     ·实验方法第40-46页
     ·质粒提取第46页
     ·感受态细胞的制备第46-47页
     ·菌液PCR检测第47页
     ·亚细胞定位第47页
     ·农杆菌介导转化拟南芥第47-48页
     ·RNA提取及cDNA链生成第48-49页
     ·获得过表达转基因的纯合植株第49页
     ·构建Promoter::GW-GUS表达载体第49页
     ·强启动子转基因植株的获得及GUS染色分析第49页
     ·胁迫条件下HAI-1基因的表达分析第49-50页
     ·拟南芥59220T-DNA插入突变体纯合子的分子鉴定第50页
     ·气孔观测方法第50-52页
   ·结果与分析第52-76页
     ·HAI-1基因T-DNA插入突变体鉴定结果第52-53页
     ·HAI-1基因T-DNA插入突变体的半定量的鉴定结果第53-54页
     ·HAI-1基因在不同的组织部位的Q-PCR定量的鉴定结果第54-55页
     ·HAI-1基因的表达受ABA等逆境胁迫的诱导第55-56页
     ·ABA相关基因在T-DNA缺失突变体中的表达第56-58页
     ·T-DNA插入突变体的萌发率表型分析第58-59页
     ·HAI-1基因过表达转基因植株株系鉴定第59-60页
     ·HAI-1基因过表达转基因植株与野生型表型分析第60-62页
     ·ABA胁迫诱导相关基因在过表达转基因植株中的表达情况第62-63页
     ·过表达转基因植株叶片下表皮的气孔观测情况第63-65页
     ·HAI-1基因的各突变体根长表型分析第65-67页
     ·不同浓度ABA处理HAI-1基因的各突变体的萌发率比较第67-69页
     ·不同浓度NaCl处理HAI-1基因的各突变体的萌发率比较第69-71页
     ·拟南芥HAI-1基因的组织表达及GUS染色分析第71-74页
     ·拟南芥HAI-1基因各突变体的干旱胁迫与失水实验第74-75页
     ·HAI-1::GFP融合表达载体的构建及瞬时表达分析第75-76页
   ·讨论第76-78页
第4章 HAI-1蛋白的原核表达分析第78-87页
   ·材料与方法第78-83页
     ·实验材料第78-80页
     ·实验方法第80-83页
       ·HAI-1基因片段的制备第80页
       ·pEDST17表达载体的制备第80页
       ·大肠杆菌DH5α和BL21 star感受态细胞的制备第80-81页
       ·大肠杆菌的质粒转化第81页
       ·酶切和连接反应第81页
       ·诱导蛋白表达第81-82页
       ·表达产物作可溶性检测第82页
       ·表达产物的SDS-PAGE分析第82-83页
   ·结果与分析第83-86页
     ·HAI-1基因片段的克隆与原核表达载体的构建第83页
     ·HAI-1原核表达产物的SDS-PAGE检测第83-84页
     ·HAI-1表达条件的优化第84-86页
   ·讨论第86-87页
第5章 拟南芥T-DNA插入突变体AtCAL1和AtCAL2的晚花表型的遗传与生理分析第87-104页
   ·材料与方法第87-89页
     ·实验材料第87-88页
     ·实验方法第88-89页
   ·结果与分析第89-103页
     ·缺失突变体AtCAL1和AtCAL2植株的表型特征第89-95页
     ·AtCAL1和AtCAL2基因一系列开花相关基因的转录表达第95-96页
     ·突变体植株AtCAL1和AtCAL2胁迫分析第96-97页
     ·突变体AtCAL1和AtCAL2 ABA胁迫下气孔比较第97-99页
     ·转基因GFP荧光蛋白AtCAL1植株的组织表达第99-103页
   ·讨论第103-104页
结论第104-107页
参考文献第107-121页
附录A 攻读学位期间所发表的学术论文目录第121-122页
致谢第122页

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