| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-22页 |
| ·副猪嗜血杆菌生物学特征 | 第10-11页 |
| ·流行病学及分型 | 第11-13页 |
| ·血清型分型 | 第12-13页 |
| ·限制性酶切图谱分型 | 第13页 |
| ·基因型分型 | 第13页 |
| ·临床症状与病理变化 | 第13-14页 |
| ·HPS 临床症状 | 第13-14页 |
| ·病理变化 | 第14页 |
| ·发病机理与毒力因子 | 第14-16页 |
| ·诊断方法 | 第16-19页 |
| ·微生物学诊断 | 第16-17页 |
| ·血清学诊断 | 第17-18页 |
| ·分子生物学诊断 | 第18-19页 |
| ·防控措施 | 第19-21页 |
| ·加强饲养管理，减少各种应激因素 | 第20页 |
| ·药物预防 | 第20页 |
| ·免疫预防 | 第20-21页 |
| ·研究意义 | 第21-22页 |
| 第2章 副猪嗜血杆菌 Nest-PCR 检测方法的建立与应用 | 第22-33页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·毒株与菌种 | 第22页 |
| ·主要实验试剂 | 第22页 |
| ·主要溶液配制 | 第22-23页 |
| ·主要实验仪器 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-27页 |
| ·引物设计和合成 | 第23页 |
| ·副猪嗜血杆菌 DNA 的提取 | 第23-24页 |
| ·PCR 扩增与鉴定 | 第24页 |
| ·DNA 快速回收试剂盒回收 DNA 产物 | 第24-25页 |
| ·PCR 产物与 pGEM-T Easy Vector 的连接及鉴定 | 第25-26页 |
| ·对 dNTPs 的优化 | 第26页 |
| ·对引物浓度的优化 | 第26页 |
| ·对退火温度的优化 | 第26-27页 |
| ·特异性试验 | 第27页 |
| ·敏感性试验 | 第27页 |
| ·稳定性和重复性试验 | 第27页 |
| ·应用试验 | 第27页 |
| ·应用范围试验 | 第27页 |
| ·实验结果 | 第27-31页 |
| ·Nest-PCR 检测方法的建立 | 第27-28页 |
| ·特异性试验 | 第28-29页 |
| ·敏感性试验 | 第29-30页 |
| ·稳定性和重复性试验 | 第30页 |
| ·应用试验 | 第30页 |
| ·应用范围试验 | 第30-31页 |
| ·分析与讨论 | 第31-33页 |
| ·建立 HPS Neat-PCR 诊断方法的意义 | 第31-32页 |
| ·Nest-PCR 方法的特点 | 第32-33页 |
| 第3章 副猪嗜血杆菌 TaqMan-MGB 实时荧光定量 PCR 检测方法的建立与应用 | 第33-43页 |
| ·实验材料 | 第33-34页 |
| ·毒株与菌株 | 第33页 |
| ·主要实验试剂 | 第33页 |
| ·常用实验溶液及培养基的配制 | 第33-34页 |
| ·主要实验仪器 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-36页 |
| ·引物和探针的设计与合成 | 第34页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第34页 |
| ·标准品制备 | 第34-35页 |
| ·对探针浓度的优化 | 第35页 |
| ·对引物浓度的优化 | 第35页 |
| ·对退火温度的优化 | 第35页 |
| ·FQ-PCR 扩增反应 | 第35-36页 |
| ·敏感性试验与标准曲线的绘制 | 第36页 |
| ·特异性试验 | 第36页 |
| ·重复和性准确性试验 | 第36页 |
| ·临床应用性试验 | 第36页 |
| ·实验结果 | 第36-41页 |
| ·质粒 DNA 浓度的测定 | 第36-37页 |
| ·副猪嗜血杆菌 FQ-PCR 方法的建立 | 第37-38页 |
| ·FQ-PCR 的敏感性结果 | 第38页 |
| ·FQ-PCR 的特异性结果 | 第38-39页 |
| ·FQ-PCR 的稳定性和重复性 | 第39-40页 |
| ·FQ-PCR 临床样品检测 | 第40-41页 |
| ·分析与讨论 | 第41-43页 |
| 第4章 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-50页 |
| 缩略语词汇表 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第52页 |
