| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 第一部分 实验研究 | 第14-53页 |
| 第一章 以牛和鼠按比例混合的成纤维细胞作为词养层培养牛胚胎干细胞 | 第14-30页 |
| 1 材料 | 第14-16页 |
| ·主要仪器设备 | 第14-15页 |
| ·实验动物 | 第15页 |
| ·实验试剂及耗材 | 第15页 |
| ·培养液 | 第15-16页 |
| 2 实验方法 | 第16-20页 |
| ·小鼠和牛胎儿成纤维细胞的培养 | 第16页 |
| ·小鼠和牛胎儿成纤维细胞的冷冻保存和复苏解冻 | 第16-18页 |
| ·胎儿成纤维细胞的生长曲线测定 | 第18页 |
| ·饲养层制备 | 第18页 |
| ·牛孵化囊胚获得 | 第18-19页 |
| ·胚胎干细胞传代 | 第19页 |
| ·牛胚胎干细胞未分化状态的检测 | 第19-20页 |
| 3 结果 | 第20-25页 |
| ·胎儿成纤维细胞染色体数目分析 | 第20-21页 |
| ·胎儿成纤维细胞生长曲线的测定 | 第21页 |
| ·不同饲养层上牛胚胎干细胞的生长状态比较 | 第21-22页 |
| ·牛胚胎干细胞在不同比例混合饲养层上的生长状态 | 第22-23页 |
| ·混合饲养层上牛胚胎干细胞未分化状态的检测 | 第23-25页 |
| 4 讨论 | 第25-27页 |
| 参考文献 | 第27-30页 |
| 第二章 国产丝裂霉素处理的STO细胞作为饲养层培养牛胚胎干细胞 | 第30-42页 |
| 1 材料 | 第30-31页 |
| ·主要仪器设备 | 第30-31页 |
| ·实验材料 | 第31页 |
| ·实验试剂及耗材 | 第31页 |
| ·培养液 | 第31页 |
| 2 方法 | 第31-32页 |
| ·STO细胞的培养 | 第31页 |
| 方法同第一章2.1 | 第31页 |
| ·STO细胞冻存与复苏解冻培养 | 第31-32页 |
| 方法同第一章2.2.1 | 第32页 |
| ·丝裂霉素处理STO细胞 | 第32页 |
| ·饲养层的制备 | 第32页 |
| 方法同第一章2.5 | 第32页 |
| ·牛孵化囊胚的获得 | 第32页 |
| 方法同第一章2.6 | 第32页 |
| ·胚胎干细胞传代 | 第32页 |
| 方法同第一章2.7 | 第32页 |
| ·牛胚胎干细胞未分化状态的检测 | 第32页 |
| 3 结果 | 第32-37页 |
| ·不同丝裂霉素的浓度处理不同时间对STO细胞细胞形态影响 | 第32-33页 |
| ·STO细胞连续传代后的形态学变化 | 第33-34页 |
| ·以STO细胞作为饲养层培养的牛胚胎干细胞未分化状态的检测 | 第34-37页 |
| 4 讨论 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-42页 |
| 第三章 两种不同饲养层培养的牛胚胎干细胞标志基因的表达差异 | 第42-52页 |
| 1 材料 | 第42-43页 |
| ·主要仪器设备 | 第42-43页 |
| ·试剂和酶 | 第43页 |
| 2 方法 | 第43-45页 |
| ·RT-qPCR方法检测mRNA表达 | 第43-44页 |
| ·反转录合成cDNA | 第44页 |
| ·特异基因的荧光定量检测 | 第44页 |
| ·实时荧光定量扩增 | 第44-45页 |
| 3 结果 | 第45-48页 |
| ·RT-PCR产物特异性检测 | 第45-47页 |
| ·以同一饲养层下培养的不同代次牛胚胎干细胞特异基因表达差异 | 第47-48页 |
| ·不同饲养层下培养的同一代次牛胚胎干细胞特异基因表达差异 | 第48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 第二部分 文献综述 | 第53-66页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66-68页 |
| 攻读学位期间已发表学术论文 | 第68页 |
