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大西洋鳕鱼T细胞分化相关基因及牙鲆组织中Ig+细胞分布与应答的研究

摘要第1-6页
Abstract第6-13页
第一章 综述-硬骨鱼类 T细胞分化及免疫球蛋白的研究现状第13-29页
   ·鱼类免疫系统第13-15页
     ·胸腺第13页
     ·皮肤第13-14页
     ·鳃第14页
     ·肾第14页
     ·脾第14-15页
     ·肠道第15页
   ·硬骨鱼类的 T 细胞研究现状第15-25页
     ·CD8T 细胞第15-16页
     ·CD4T 细胞第16-23页
     ·T 细胞分化相关分子之间的调节规律第23-25页
   ·硬骨鱼类免疫球蛋白研究现状第25-28页
   ·本研究的目的第28-29页
第二章 大西洋鳕鱼 TBK1 基因的克隆表达及启动区域结构分析第29-46页
   ·前言第29-30页
   ·材料与方法第30-34页
     ·TBK1cDNA 序列的克隆和基因测序第30页
     ·系统发育分析第30-31页
     ·应用基因步移的方法对 TBK1 基因 5 侧翼序列克隆测序第31-32页
     ·报告基因载体的构建第32页
     ·细胞培养、转染及报告载体的活性检测第32-33页
     ·大西洋鳕鱼前肾原代白细胞的培养第33页
     ·Poly I:C, PMA 和β-glucan 体外刺激前肾白细胞第33页
     ·Poly I:C, PMA 和β-glucan 体内刺激大西洋鳕鱼幼鱼第33-34页
     ·实时定量荧光 PCR第34页
     ·数据分析第34页
   ·结果第34-43页
     ·大西洋鳕鱼 TBK1 基因特点第34-37页
     ·大西洋鳕鱼 TBK1 基因 5’侧翼序列第37-39页
     ·TBK1 报告基因载体活性检测结果第39-40页
     ·TBK1 基因在组织中的分布第40-41页
     ·大西洋鳕鱼 TBK1 在前肾、脾脏及前肾白细胞中的应答第41-43页
   ·讨论第43-46页
第三章 大西洋鳕鱼 NF-κB抑制因子(NRF)的克隆表达,亚细胞定位及组织中的分布第46-55页
   ·前言第46页
   ·材料与方法第46-48页
     ·NRF 基因全长的鉴定及测序第46-47页
     ·系统发育分析第47页
     ·载体的构建第47-48页
     ·细胞培养、细胞转染及绿色荧光观察第48页
     ·实时定量荧光 PCR第48页
     ·数据分析第48页
   ·结果第48-53页
     ·大西洋鳕鱼 NRF 基因特点第48-52页
     ·NRF 基因在组织中的分布第52页
     ·NRF 基因的亚细胞定位第52-53页
   ·讨论第53-55页
第四章 大西洋鳕鱼 T-box 家族转录因子 Eomes/Tbr2的分子克隆、启动区域特点及表达分析第55-66页
   ·前言第55页
   ·材料与方法第55-58页
     ·Eomes 基因 cDNA 序列的克隆和基因测序第55-56页
     ·系统发育分析第56-57页
     ·应用基因步移的方法对 Eomes 基因 5’侧翼序列的克隆测序第57页
     ·报告基因载体的构建第57页
     ·细胞培养、转染及报告载体的活性检测第57页
     ·实时定量荧光 PCR第57页
     ·数据分析第57-58页
   ·结果第58-64页
     ·大西洋鳕鱼 Eomes 基因特点第58-62页
     ·大西洋鳕鱼 Eomes 基因 5’侧翼序列第62-63页
     ·Eomes 报告基因载体活性检测结果第63页
     ·Eomes 基因在组织中的分布第63-64页
   ·讨论第64-66页
第五章 大西洋鳕鱼转录因子 GATA-3及其剪切体的分子克隆和功能检测第66-84页
   ·前言第66-67页
   ·材料与方法第67-70页
     ·大西洋鳕鱼 GATA-3 cDNAs 的克隆第67-68页
     ·系统发育分析第68页
     ·载体的构建第68-69页
     ·细胞培养、细胞转染、和报告基因载体表达活性检测第69页
     ·大西洋鳕鱼前肾原代白细胞的培养第69页
     ·Poly I:C, PMA 和β-glucan 体外刺激前肾白细胞第69-70页
     ·Poly I:C, PMA 和β-glucan 体内刺激大西洋鳕鱼幼鱼第70页
     ·实时定量荧光 PCR第70页
     ·数据分析第70页
   ·结果第70-80页
     ·大西洋鳕鱼 GATA-3 cDNA 核苷酸序列和氨基酸序列第70-74页
     ·GmGATA-3L 与 GmGATA-3S 细胞内定位第74页
     ·GmGATA-3 与 GmGATA-3S 转录功能的检测第74-77页
     ·GmGATA-3L 与 GmGATA-3S 基因 mRNA 在组织中的分布第77-79页
     ·GmGATA-3L 和 GmGATA-3S 基因在体内和体外的表达第79-80页
   ·讨论第80-84页
第六章 大西洋鳕鱼 Foxp3的分子克隆,组织分布,及启动区域分析第84-95页
   ·前言第84页
   ·材料与方法第84-86页
     ·大西洋鳕鱼 Foxp3 的克隆第84-85页
     ·系统发育分析第85页
     ·应用基因步移的方法对 Foxp3 基因 5’侧翼序列的克隆测序第85-86页
     ·报告基因载体的构建第86页
     ·细胞培养、转染及报告载体的活性检测第86页
     ·实时定量荧光 PCR第86页
     ·数据分析第86页
   ·结果第86-93页
     ·大西洋鳕鱼 Foxp3 基因特点第86-90页
     ·大西洋鳕鱼 Eomes 基因 5’侧翼序列第90-92页
     ·Eomes 报告基因载体活性检测结果第92-93页
     ·Eomes 基因在组织中的分布第93页
   ·讨论第93-95页
第七章 牙鲆免疫相关组织特征及抗体阳性细胞的免疫组化定位及流式细胞术分析第95-110页
   ·前言第95页
   ·材料与方法第95-99页
     ·实验用鱼及材料药品第95-96页
     ·组织学及免疫组织化学染色准备第96页
     ·细胞化学及细胞免疫化学准备第96-97页
     ·免疫化学染色第97-98页
     ·牙鲆肾脏,脾脏,肠道,外周血单细胞悬液的制备第98-99页
     ·流式细胞术分析第99页
   ·结果第99-108页
     ·外周血第99-101页
     ·脾脏第101页
     ·肠道第101-105页
     ·肝脏第105页
     ·肾脏第105-108页
     ·抗体阳性细胞在组织中的分布比例第108页
   ·讨论第108-110页
参考文献第110-131页
简写说明第131-133页
在读期间论文发表情况第133-134页
致谢第134-135页

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