| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-35页 |
| 1 卡拉胶 | 第15-22页 |
| ·卡拉胶的来源 | 第15页 |
| ·卡拉胶的结构 | 第15-16页 |
| ·卡拉胶的分类 | 第16页 |
| ·三种卡拉胶的主要理化性质 | 第16-19页 |
| ·凝胶性 | 第17页 |
| ·溶解性 | 第17-18页 |
| ·粘度 | 第18页 |
| ·化学稳定性 | 第18-19页 |
| ·卡拉胶的主要应用 | 第19-22页 |
| ·卡拉胶在食品和日用化工方面的应用 | 第19页 |
| ·卡拉胶在医药行业中的应用 | 第19-22页 |
| ·抗病毒 | 第19-20页 |
| ·抗肿瘤 | 第20-21页 |
| ·抗凝血 | 第21页 |
| ·降血脂 | 第21页 |
| ·免疫调节 | 第21-22页 |
| 2 卡拉寡糖 | 第22-27页 |
| ·卡拉寡糖的制备 | 第22-24页 |
| ·化学降解法 | 第22-23页 |
| ·超声降解法 | 第23页 |
| ·酶降解法 | 第23-24页 |
| ·卡拉胶寡糖的分离纯化 | 第24-26页 |
| ·分步沉淀法 | 第24页 |
| ·盐析法 | 第24页 |
| ·离子交换法 | 第24-25页 |
| ·凝胶柱层析法 | 第25页 |
| ·高压液相色谱法 ( HPLC ) | 第25页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳法 ( PAGE ) | 第25页 |
| ·毛细管电泳 ( CE ) | 第25页 |
| ·电印迹技术 | 第25-26页 |
| ·其它技术 | 第26页 |
| ·卡拉寡糖的生物活性 | 第26-27页 |
| 3 卡拉胶酶 | 第27-34页 |
| ·卡拉胶降解酶的研究进展 | 第27-32页 |
| ·卡拉胶降解酶的分类 | 第27页 |
| ·卡拉胶降解酶的来源 | 第27-28页 |
| ·卡拉胶降解酶的家族归属 | 第28-29页 |
| ·卡拉胶降解酶的酶学性质研究 | 第29-31页 |
| ·卡拉胶降解酶的作用机制 | 第31-32页 |
| ·卡拉胶降解酶的活性检测方法 | 第32页 |
| ·卡拉胶降解酶的应用 | 第32-33页 |
| ·制备卡拉胶寡糖 | 第32页 |
| ·海藻遗传工程 | 第32-33页 |
| ·制备原生质体 | 第33页 |
| ·分析卡拉胶结构 | 第33页 |
| ·研究细菌中卡拉胶代谢 | 第33页 |
| ·卡拉胶降解酶的应用前景展望 | 第33-34页 |
| 4 本论文的主要研究内容 | 第34-35页 |
| 第二章 卡拉胶酶菌株的筛选及菌种鉴定 | 第35-46页 |
| 1 材料与方法 | 第35-40页 |
| ·实验材料 | 第35-36页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器 | 第35-36页 |
| ·培养基 | 第36页 |
| ·试验方法 | 第36-40页 |
| ·样品的采集 | 第36页 |
| ·产酶菌株筛选 | 第36-37页 |
| ·DNS 法检测酶活性及酶活力定义 | 第37页 |
| ·菌株保藏 | 第37页 |
| ·细菌基因组提取 | 第37-38页 |
| ·发酵上清热稳定性初步测定 | 第38页 |
| ·基于 16S rDNA 的菌株鉴定 | 第38-40页 |
| 2 实验结果 | 第40-44页 |
| ·样品采集 | 第40页 |
| ·活性菌株的筛选 | 第40页 |
| ·菌株发酵上清热稳定性检测 | 第40-41页 |
| ·基于 16S rDNA 的种属鉴定 | 第41-44页 |
| ·基因组的提取 | 第41-42页 |
| ·16S rDNA 基因序列获取 | 第42-44页 |
| ·基于 16S rDNA 的进化树 | 第44页 |
| 3 讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 CgkP 的分离纯化及酶学性质研究 | 第46-63页 |
| 1 材料与方法 | 第46-51页 |
| ·实验材料 | 第46-47页 |
| ·主要试剂 | 第46页 |
| ·主要仪器 | 第46-47页 |
| ·培养基 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-51页 |
| ·DNS 法检测酶活性及酶活力定义 | 第47-48页 |
| ·蛋白质浓度测定方法 | 第48页 |
| ·发酵上清的制备 | 第48页 |
| ·硫酸铵沉淀 | 第48页 |
| ·疏水层析 | 第48-49页 |
| ·离子交换层析 | 第49页 |
| ·SDS-PAGE 蛋白电泳 | 第49页 |
| ·底物特异性 | 第49-50页 |
| ·最适反应温度 | 第50页 |
| ·温度稳定性 | 第50页 |
| ·最适反应 pH | 第50页 |
| ·pH 稳定性 | 第50页 |
| ·SDS、EDTA 以及金属离子对酶活性的影响 | 第50-51页 |
| 2 实验结果 | 第51-61页 |
| ·蛋白分离纯化 | 第51-56页 |
| ·酶活力检测标准曲线 | 第51页 |
| ·蛋白含量测定 | 第51-52页 |
| ·硫酸铵沉淀 | 第52-53页 |
| ·疏水层析 | 第53-54页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第54页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第54-55页 |
| ·分离纯化结果 | 第55-56页 |
| ·酶学性质研究 | 第56-61页 |
| ·酶的底物特异性 | 第56-57页 |
| ·酶的最适反应温度 | 第57页 |
| ·酶的温度稳定性 | 第57-58页 |
| ·酶的最适反应 pH | 第58-59页 |
| ·酶的 pH 稳定性 | 第59-60页 |
| ·不同金属离子以及 SDS、EDTA 对酶活性的影响 | 第60-61页 |
| 3 讨论 | 第61-63页 |
| 第四章 卡拉胶酶基因克隆与序列分析 | 第63-78页 |
| 1 材料与方法 | 第63-68页 |
| ·实验材料 | 第63-64页 |
| ·主要仪器 | 第63页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第63页 |
| ·菌株、质粒和感受态细胞 | 第63-64页 |
| ·LB 培养基 | 第64页 |
| ·实验方法 | 第64-68页 |
| ·基因组的提取 | 第64页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第64页 |
| ·简并 PCR | 第64-66页 |
| ·反向 PCR | 第66-68页 |
| ·序列比对分析 | 第68页 |
| 2 实验结果 | 第68-76页 |
| ·卡拉胶酶基因的克隆 | 第68-76页 |
| ·基因组提取 | 第68-69页 |
| ·简并 PCR 结果 | 第69-71页 |
| ·反向 PCR | 第71-72页 |
| ·基因序列分析 | 第72-76页 |
| 3 讨论 | 第76-78页 |
| 第五章 CgkP 降解终产物和降解方式研究 | 第78-89页 |
| 1 材料与方法 | 第78-82页 |
| ·实验材料 | 第78-79页 |
| ·主要仪器 | 第78-79页 |
| ·主要试剂 | 第79页 |
| ·实验方法 | 第79-82页 |
| ·制备 CgkP 纯酶 | 第79页 |
| ·制备κ-卡拉寡糖 | 第79页 |
| ·分离纯化κ-卡拉寡糖 | 第79-80页 |
| ·硫酸苯酚法检测各组分糖含量 | 第80页 |
| ·纯化寡糖的质谱 ( ESI-MS ) 分析 | 第80页 |
| ·主产物分析 | 第80页 |
| ·粘度法检测酶降解方式 | 第80-82页 |
| 2 结果与讨论 | 第82-87页 |
| ·硫酸－苯酚法测糖标准曲线 | 第82页 |
| ·κ-卡拉胶寡糖的制备 | 第82-83页 |
| ·κ-卡拉胶寡糖的纯化 | 第83-85页 |
| ·乙醇沉淀κ-卡拉胶寡糖 | 第83页 |
| ·P6 柱分离纯化κ-卡拉胶寡糖 | 第83-85页 |
| ·κ-卡拉胶寡糖的质谱鉴定 | 第85-86页 |
| ·CgkP的降解方式研究 | 第86-87页 |
| 3 讨论 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第93页 |