| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 引言 | 第14-20页 |
| 1. 牙鲆概述 | 第14-15页 |
| 2. IGF 系统 | 第15-17页 |
| 3. HIF 系统 | 第17-19页 |
| 4. 研究的目的与意义 | 第19-20页 |
| 第一章 牙鲆胰岛素样生长因子结合蛋白-1（IGFBP-1）的克隆及表达 | 第20-51页 |
| 1. 实验材料 | 第20-24页 |
| ·实验用鱼 | 第20-21页 |
| ·实验试剂 | 第21页 |
| ·常用试剂 | 第21-22页 |
| ·常用生化试剂 | 第22-23页 |
| ·实验仪器 | 第23-24页 |
| 2. 实验方法 | 第24-38页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第24页 |
| ·总 RNA 的鉴定 | 第24-25页 |
| ·牙鲆 IGFBP-1 cDNA 片段的克隆 | 第25-27页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第27页 |
| ·连接 | 第27-28页 |
| ·转化反应 | 第28-30页 |
| ·RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends) | 第30-36页 |
| ·IGFBP-1 小片段、5′RACE 和 3′RACE 的拼接 | 第36页 |
| ·序列分析 | 第36-37页 |
| ·半定量 RT-PCR | 第37页 |
| ·荧光定量 qRT-PCR | 第37-38页 |
| ·统计分析 | 第38页 |
| 3 结果 | 第38-47页 |
| ·RNA 提取质量鉴定 | 第38页 |
| ·牙鲆 IGFBP-1 cDNA 小片段及 5'-RACE、3'-RACE | 第38-41页 |
| ·牙鲆 IGFBP-1 序列比对及进化树构建 | 第41-44页 |
| ·牙鲆 IGFBP-1 基因在胚胎、仔鱼不同发育阶段及成体组织中的表达 | 第44-46页 |
| ·TH 和 TU 对牙鲆仔鱼变态期 IGFBP-1 基因表达的影响 | 第46-47页 |
| 4. 讨论 | 第47-51页 |
| 第二章 牙鲆低氧诱导因子-1α（HIF-1α）全长 cDNA 的克隆及表达检测 | 第51-67页 |
| 1. 实验材料 | 第51-52页 |
| ·实验用鱼 | 第51-52页 |
| ·实验试剂 | 第52页 |
| ·常用试剂和仪器 | 第52页 |
| 2. 实验方法 | 第52-57页 |
| ·总 RNA 的提取及鉴定 | 第52页 |
| ·牙鲆 HIF-1α cDNA 片段的克隆 | 第52-53页 |
| ·PCR 产物的纯化、连接及转化 | 第53-54页 |
| ·RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends) | 第54-56页 |
| ·HIF-1α小片段、5′RACE 和 3′RACE 的拼接 | 第56页 |
| ·HIF-1α半定量检测 | 第56-57页 |
| 3 结果 | 第57-64页 |
| ·RNA 提取质量鉴定 | 第57页 |
| ·牙鲆 HIF-1α cDNA 小片段及 5'-RACE、3'-RACE | 第57-60页 |
| ·牙鲆 HIF-1α序列比对及进化树构建 | 第60-64页 |
| ·牙鲆 HIF-1α基因在胚胎、仔鱼及成鱼各组织中的表达 | 第64页 |
| 4. 讨论 | 第64-67页 |
| 第三章 低氧胁迫下牙鲆体内酶活性的变化 | 第67-79页 |
| 1. 实验材料 | 第67页 |
| 2. 实验方法 | 第67-73页 |
| ·酶活的测定 | 第68页 |
| ·总蛋白测定 | 第68-69页 |
| ·超氧化物歧化酶（SOD）活性测试 | 第69-70页 |
| ·乳酸脱氢酶（LDH）的测定 | 第70-71页 |
| ·过氧化氢酶（CAT）活力的测定 | 第71-72页 |
| ·总抗氧化能力（T-AOC）的测定 | 第72-73页 |
| ·荧光定量 qRT-PCR 和统计分析 | 第73页 |
| 3. 结果 | 第73-76页 |
| ·死亡率统计 | 第73页 |
| ·酶活 | 第73-76页 |
| ·低氧对 IGFBP-1 mRNA 表达的影响 | 第76页 |
| 4. 讨论 | 第76-79页 |
| 小结 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-86页 |
| 附录 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
