| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 引言 | 第12-18页 |
| 1 西伯利亚鲟简介 | 第12页 |
| 2 侧线系统 | 第12-14页 |
| 3 趋化因子及 CXCR7 | 第14-15页 |
| 4 生物学研究方法 | 第15-17页 |
| ·原位杂交技术 | 第15-16页 |
| ·实时荧光定量 PCR（Quantitative Real-time PCR ，qPCR） | 第16页 |
| ·内参基因的选择 | 第16-17页 |
| 5 研究目的和意义 | 第17-18页 |
| 第一章 西伯利亚鲟 CXCR7 基因 cDNA 全长的克隆及生物信息学分析 | 第18-34页 |
| 1 材料和试剂 | 第18-20页 |
| ·实验材料 | 第18页 |
| ·实验试剂 | 第18-19页 |
| ·常用试剂 | 第18页 |
| ·试剂盒 | 第18-19页 |
| ·常用试剂配制及保存方法 | 第19-20页 |
| ·LB 液体培养基 | 第19页 |
| ·LB 固体培养基（抗性） | 第19页 |
| ·氨苄青霉素（Amp）储存液 | 第19页 |
| ·IPTG 储存液 | 第19页 |
| ·X-gal 储存液 | 第19页 |
| ·0.1mol/L 的 CaCl2和 0.1mol/L 的 CaCl2－MgCl2溶液的配制 | 第19页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第19-20页 |
| ·蓝白斑筛选用培养基制备 | 第20页 |
| ·DEPC 处理水的制备 | 第20页 |
| 2 实验方法 | 第20-25页 |
| ·RNA 的提取 | 第20-21页 |
| ·引物设计与合成 | 第21页 |
| ·CXCR7 基因 cDNA 扩增片段的回收、连接 | 第21-22页 |
| ·转化 | 第22页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第22页 |
| ·CXCR7 的 cDNA 的 5 RACE 和 3 RACE | 第22-23页 |
| ·生物信息学分析软件 | 第23-24页 |
| ·西伯利亚鲟基因组 DNA 的提取及 CXCR7a 和 CXCR7b 的扩增 | 第24-25页 |
| 3 结果 | 第25-32页 |
| ·总 RNA 的提取及 CXCR7 的 cDNA 片段的克隆 | 第25页 |
| ·CXCR7 基因 5 端 cDNA 序列和 3 端 cDNA 序列的克隆 | 第25-26页 |
| ·CXCR7a 和 CXCR7b 的 cDNA 序列的生物信息学分析 | 第26-31页 |
| ·西伯利亚鲟 CXCR7a 和 CXCR7b 在基因组水平上的鉴定分析 | 第31-32页 |
| 4 讨论 | 第32-34页 |
| 第二章 内参基因的筛选 | 第34-40页 |
| 1 材料和试剂 | 第34页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·试剂 | 第34页 |
| ·主要仪器 | 第34页 |
| 2 实验方法 | 第34-37页 |
| ·RNA 的提取 | 第34页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第34-35页 |
| ·内参基因的选择和引物设计 | 第35-36页 |
| ·引物的验证和标准曲线的制备 | 第36页 |
| ·实时荧光定量 | 第36页 |
| ·数据处理 | 第36-37页 |
| 3 结果 | 第37-39页 |
| ·RNA 质量的评价 | 第37页 |
| ·内参基因的引物的检验 | 第37页 |
| ·实时荧光定量 PCR 的效率 | 第37-38页 |
| ·各持家基因稳定性的比较 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-40页 |
| 第三章 CXCR7 基因在胚胎发育过程中的表达分析 | 第40-47页 |
| 1 材料和试剂 | 第40页 |
| ·实验材料 | 第40页 |
| ·试剂 | 第40页 |
| 2 实验方法 | 第40-43页 |
| ·RNA 的提取 | 第40页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第40-41页 |
| ·CXCR7a 和 CXCR7b 在各时期胚胎及仔鱼中表达的定性分析 | 第41页 |
| ·标准曲线的制备 | 第41页 |
| ·实时荧光定量 PCR（Real time quantitative PCR） | 第41-43页 |
| ·数据处理 | 第43页 |
| 3 结果 | 第43-45页 |
| ·CXCR7a 和 CXCR7b 在各时期胚胎及仔鱼中表达的定性分析 | 第43-44页 |
| ·CXCR7a 和 CXCR7b 的实时荧光定量引物的评价 | 第44页 |
| ·CXCR7a 和 CXCR7b 在胚胎发育时期的定量结果 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 CXCR7 基因表达的定位分析 | 第47-56页 |
| 1 原位杂交试剂及配制方法 | 第47-49页 |
| 2 实验步骤 | 第49-52页 |
| ·探针的制备过程 | 第49-50页 |
| ·探针的回收 | 第50页 |
| ·整体原位杂交步骤 | 第50-52页 |
| ·胚胎的采集、固定与保存 | 第50页 |
| ·原位杂交第一天 | 第50-51页 |
| ·原位杂交第二天 | 第51-52页 |
| ·原位杂交第三天 | 第52页 |
| 3 结果 | 第52-54页 |
| ·酶切位点的引入 | 第52-53页 |
| ·体外转录和探针的回收 | 第53页 |
| ·原位杂交结果 | 第53-54页 |
| ·利用荧光素检测与碱性磷酸酶显色的方法比较 | 第54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 附录 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
