| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-34页 |
| 1. 基底细胞癌概述 | 第11-19页 |
| ·基底细胞癌的发生与紫外线的照射密切相关 | 第11-13页 |
| ·紫外线诱发基底细胞癌的分子机制 | 第13-19页 |
| ·DNA光损伤 | 第13-17页 |
| ·过氧化作用 | 第17-18页 |
| ·免疫抑制 | 第18-19页 |
| 2. SATB1与肿瘤的相关研究 | 第19-26页 |
| ·SATB1结构特点 | 第19-21页 |
| ·SATB1的转录调控 | 第21-23页 |
| ·SATB1在肿瘤生成与转移中的作用 | 第23-26页 |
| ·SATB1对原癌基因c-Myc和Bcl-2的影响 | 第24-25页 |
| ·SATB1与细胞凋亡 | 第25页 |
| ·SATB1与肿瘤转移 | 第25-26页 |
| 3. miR-34a参与肿瘤发生的过程 | 第26-32页 |
| ·miR-34家族简介 | 第28-29页 |
| ·miR-34家族的生物学功能 | 第29-30页 |
| ·MiR-34家族与恶性肿瘤的关系 | 第30-32页 |
| ·MiR-34s与结肠癌 | 第30页 |
| ·MiR-34s与肝癌 | 第30-31页 |
| ·MiR-34s与其他恶性肿瘤 | 第31-32页 |
| 4. 本研究的主要内容 | 第32-34页 |
| 材料与方法 | 第34-63页 |
| 一、实验材料 | 第34-36页 |
| 1. 实验用细胞系、菌株和质粒以及临床样本 | 第34页 |
| 2. 限制性内切酶及其他修饰酶 | 第34页 |
| 3. 抗体 | 第34页 |
| 4. 其它主要试剂及试剂盒 | 第34-35页 |
| 5. 主要仪器设备 | 第35-36页 |
| 二、实验方法 | 第36-63页 |
| 1. 基本技术路线 | 第36页 |
| 2. 细菌操作与质粒的转化提取 | 第36-38页 |
| 3. HeLa、293A、MCF-7、A431、Hacat、SK-Mel-1、ccc-ESF-1等细胞的培养 | 第38-39页 |
| 4. 克隆构建 | 第39-42页 |
| ·3 ’UTR reporter assay表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·miR-34a Promoter区系列截短体焚光素酶报告基因质粒 | 第40-42页 |
| 5. 非病毒方法介导的哺乳动物细胞转染 | 第42-43页 |
| 6. 双荧光素酶报告系统的检测 | 第43页 |
| 7. 石蜡包埋组织RNA提取方法 | 第43-44页 |
| 8. 荧光实时定量PCR检测(Real-time PCR) | 第44-47页 |
| 9. 细胞总蛋白提取及浓度测定 | 第47-48页 |
| 10. Western Blot | 第48-50页 |
| 11. 紫外线(UVC)照射处理细胞 | 第50页 |
| 12. 单细胞凝胶电泳(彗星实验)检测DNA双链断裂损伤 | 第50-51页 |
| 13. 流式细胞仪测定细胞DNA含量分析细胞周期和细胞凋亡 | 第51-54页 |
| ·Annexin V-FITC法检测细胞凋亡 | 第51-52页 |
| ·PI染色测定细胞周期 | 第52-54页 |
| ·细胞样品的准备 | 第52-53页 |
| ·细胞固定 | 第53页 |
| ·染色 | 第53页 |
| ·流式检测和分析 | 第53-54页 |
| 14. Hoechst染色检测细胞凋亡 | 第54-55页 |
| ·贴壁细胞 | 第54页 |
| ·悬浮细胞 | 第54-55页 |
| 15. MTT法检测细胞增殖 | 第55页 |
| 16. Trans-well法检测细胞浸润能力 | 第55-56页 |
| 17. 染色质免疫共沉淀 | 第56-59页 |
| 18. 电泳迁移率实验(EMSA-electrophoretic mobility shift assay) | 第59-61页 |
| 19. 免疫组化(二步法) | 第61-62页 |
| ·脱蜡 | 第61页 |
| ·消除内源性过氧化物酶 | 第61页 |
| ·高压法热抗原修复 | 第61-62页 |
| ·抗体杂交 | 第62页 |
| ·DAB显色,复染 | 第62页 |
| ·封片 | 第62页 |
| 20. 统计学方法 | 第62-63页 |
| 实验结果 | 第63-85页 |
| 1. SATB1和miR-34a与皮肤基底细胞癌相关 | 第63-66页 |
| ·SATB1在皮肤基底细胞癌组织中表达普遍上调 | 第63-64页 |
| ·miR-34a与皮肤基底细胞癌的发生相关 | 第64-65页 |
| ·SATB1和miR-34a与皮肤基底细胞癌相关,且表达量相反 | 第65-66页 |
| 2. SATB1与miR-34a影响皮肤基底癌细胞A431的浸润,增殖和凋亡 | 第66-70页 |
| ·SATB1与miR-34a影响皮肤基底癌细胞A431的浸润 | 第66-67页 |
| ·SATB1与miR-34a影响皮肤基底癌细胞A431的增殖 | 第67页 |
| ·SATB1与miR-34a对皮肤基底癌细胞A431凋亡的影响 | 第67-70页 |
| 3. SATB1与miR-34a对紫外线刺激下正常皮肤基底细胞Hacat的作用 | 第70-75页 |
| ·SATB1和miR-34a影响紫外线诱发的皮肤基底细胞DNA损伤程度 | 第70-72页 |
| ·SATB1和miR-34a影响紫外线诱发的皮肤基底细胞Hacat的凋亡 | 第72-74页 |
| ·SATB1和miR-34a在紫外线刺激下的表达呈现相反趋势 | 第74-75页 |
| 4. SATB1和miR-34a相互作用并形成反馈作用环路 | 第75-85页 |
| ·SATBl 是 miR-34a 的IE基因 | 第75-78页 |
| ·miR-34a直接靶向作用于SATB1的3’-UTR | 第76-77页 |
| ·miR-34a抑制SATB1 mRNA和蛋白水平的表达 | 第77-78页 |
| ·miR-34a受到其靶基因SATB1的反式激活 | 第78-85页 |
| ·全长的SATB1能够显著激活miR-34a的启动子 | 第79-80页 |
| ·miR-34a启动子区256-579nt序列是SATB1与其直接相互作用的区域 | 第80-81页 |
| ·miR-34a启动子内256-579nt中的AT富含序列对于SATB1的特异性识别与结合时必须的 | 第81-84页 |
| ·紫外线刺激可以加强SATB1对于miR-34a启动子内的256-579nt区域的结合能力 | 第84-85页 |
| 讨论 | 第85-92页 |
| 1. SATB1和miR-34a在皮肤基底细胞癌组织及细胞中的表达差异提示二者与基底细胞癌的发生相关 | 第85-87页 |
| 2. SATB1对皮肤基底癌细胞的多种调节功能提示该分子广泛参与多个分子的调控 | 第87-88页 |
| 3. miR-34a与SATB1形成调控环路 | 第88-89页 |
| 4. miR-34a与SATB1所形成负调控环路的意义 | 第89-91页 |
| ·miR-34a与SATB1形成的调控环路可能对紫外线造成的DNA损伤发挥协同调节作用 | 第90页 |
| ·miR-34a与SATB1构成的调控环路可能参与控制细胞的浸润 | 第90-91页 |
| 5. 本研究的不足与展望 | 第91-92页 |
| 小结 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-101页 |
| 文献综述 | 第101-114页 |
| REFERENCES | 第109-114页 |
| 英文名词及缩写 | 第114-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 个人简历 | 第117-119页 |
