| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-26页 |
| ·前言 | 第11页 |
| ·PRRSV分子生物学结构 | 第11-12页 |
| ·PRRSV形态结构 | 第11页 |
| ·PRRSV的基因组结构及编码的蛋白 | 第11-12页 |
| ·PRRSV流行病学特征 | 第12-13页 |
| ·PRRSV分类 | 第12页 |
| ·PRRSV生物学特性 | 第12-13页 |
| ·PRRSV传播途径 | 第13页 |
| ·PRRSV防治措施现状 | 第13-15页 |
| ·PRRSV免疫学研究进展 | 第13-14页 |
| ·PRRSV疫苗的种类及特点 | 第14-15页 |
| ·PRRSV致病机理 | 第15-16页 |
| ·不同品种猪对PRRSV抗性差异及其遗传机制 | 第16-17页 |
| ·不同品种猪对PRRSV抗性差异的表现 | 第16页 |
| ·猪对PRRSV抗性差异的机制 | 第16-17页 |
| ·PRRSV感染相关受体 | 第17-19页 |
| ·硫酸乙酰肝素受体 | 第17-18页 |
| ·CD169 | 第18页 |
| ·CD163 | 第18-19页 |
| ·PRRSV感染与细胞凋亡的研究进展 | 第19-20页 |
| ·几个与凋亡有关的基因及关系(Bcl2L1、Bax、P53) | 第20-21页 |
| ·转座子与基因捕获 | 第21-24页 |
| ·捕获载体的研究进展 | 第22-24页 |
| ·PB转座子 | 第24-26页 |
| ·PB转座子结构 | 第24-25页 |
| ·PB转座子作为哺乳动物遗传工具的特点及应用 | 第25-26页 |
| 2 研究目的和意义 | 第26-27页 |
| 3 实验材料和方法 | 第27-45页 |
| ·实验材料和仪器设备 | 第27-30页 |
| ·主要实验材料 | 第27页 |
| ·主要试剂及配制 | 第27-29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29-30页 |
| ·主要试验方法 | 第30-45页 |
| ·PAMs凋亡检测试验 | 第30-31页 |
| ·采集肺样 | 第30页 |
| ·灌洗肺泡细胞 | 第30页 |
| ·流式检测 | 第30-31页 |
| ·PAMs凋亡相关基因表达检测 | 第31-33页 |
| ·总RNA提取 | 第31-32页 |
| ·反转录肺泡灌洗细胞总RNA,合成cDNA第一链 | 第32页 |
| ·内参基因的选择 | 第32-33页 |
| ·计算方法 | 第33页 |
| ·PAMs中CD169基因的表达检测 | 第33-34页 |
| ·PAMs中CD169mRNA表达检测 | 第33-34页 |
| ·PAMs表面CD169蛋白量检测 | 第34页 |
| ·肺组织中CD169免疫组化试验 | 第34-35页 |
| ·组织的取材、脱水、石蜡包埋 | 第34页 |
| ·组织的切片 | 第34-35页 |
| ·切片的免疫组化染色 | 第35页 |
| ·转座子质粒(PHi5)的转化、鉴定与扩增 | 第35-44页 |
| ·质粒溶解 | 第35-36页 |
| ·质粒小量制备 | 第36-37页 |
| ·质粒的鉴定 | 第37-38页 |
| ·质粒大量扩增 | 第38-39页 |
| ·Marc145细胞解冻、培养与传代 | 第39页 |
| ·G418对Marc145细胞最低致死浓度的筛选 | 第39页 |
| ·优化PB转座子pHi5转染Marc145细胞条件 | 第39-40页 |
| ·优化PB转座子pHi5与转座酶Cy143共转染Marc145细胞的条件 | 第40-42页 |
| ·PB稳定插入的Marc145细胞库构建 | 第42页 |
| ·转座子插入基因组的检测 | 第42-44页 |
| ·统计学方法及生物学软件 | 第44-45页 |
| 4 试验结果 | 第45-61页 |
| ·PAMs凋亡率比较 | 第45-47页 |
| ·PAMs凋亡相关基因的表达差异 | 第47-49页 |
| ·RNA质量检测 | 第47页 |
| ·定量引物PCR扩增效果检测结果 | 第47-48页 |
| ·凋亡相关基因相对表达量检测 | 第48-49页 |
| ·PAMs受体CD169表达及阳性细胞率 | 第49-53页 |
| ·CD169mRNA表达差异比较 | 第49-50页 |
| ·CD169引物检测 | 第49-50页 |
| ·CD169基因mRNA表达水平 | 第50页 |
| ·CD169蛋白表达水平 | 第50-52页 |
| ·CD169~+巨噬细胞率 | 第52-53页 |
| ·肺组织中CD169免疫组化 | 第53-54页 |
| ·构建有PB转座子插入突变的Marc145细胞库 | 第54-61页 |
| ·质粒pHi5酶切鉴定及电泳检测 | 第54-55页 |
| ·质粒pHi5大量制备质量检测 | 第55页 |
| ·Marc145细胞的培养 | 第55-56页 |
| ·G418对Marc145最低致死浓度的筛选 | 第56页 |
| ·瞬时转染条件的优化 | 第56-57页 |
| ·稳定转染条件的优化 | 第57-58页 |
| ·筛选鉴定PB转座子稳定插入的Marc45细胞 | 第58-61页 |
| 5 讨论 | 第61-65页 |
| ·PRRSV与细胞凋亡及宿主抗性(易感性)差异机理的讨论 | 第61-62页 |
| ·巨噬细胞表面受体蛋白CD169表达与PRRSV感染宿主关系的探讨 | 第62-63页 |
| ·关于PB转座子作为研究致病抗病机理有效工具的讨论 | 第63-65页 |
| 6 小结 | 第65-66页 |
| ·本研究主要结论 | 第65页 |
| ·本实验创新点 | 第65页 |
| ·本研究的不足与进一步研究内容 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 在校期间发表论文、申请专利 | 第74页 |
| 附录 | 第74-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
