| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略语 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-24页 |
| ·新城疫病毒的概述 | 第13-15页 |
| ·病毒结构 | 第13-14页 |
| ·新城疫病毒致病力的分子基础 | 第14页 |
| ·新城疫病毒的分型 | 第14页 |
| ·新城疫的流行概况 | 第14-15页 |
| ·病毒载体的研究概况 | 第15-16页 |
| ·RNA病毒反向遗传操作系统及其应用研究 | 第16-23页 |
| ·反向遗传学操作系统 | 第16页 |
| ·链RNA病毒的反向遗传操作系统的研究进展 | 第16-17页 |
| ·负链RNA病毒的反向遗传操作系统的研究进展 | 第17-19页 |
| ·负链RNA病毒反向遗传技术机理 | 第17-18页 |
| ·分节段的负链RNA病毒反向遗传操作系统的研究进展 | 第18-19页 |
| ·不分节段的负链RNA病毒反向遗传操作系统的研究进展 | 第19页 |
| ·新城疫病毒反向遗传操作系统的研究进展 | 第19-23页 |
| ·NDV的NP、P、L基因与“拯救”策略 | 第19-20页 |
| ·NDV的拯救系统 | 第20-21页 |
| ·NDV的反向遗传操作系统国内外研究进展 | 第21-23页 |
| ·研究目的与意义 | 第23-24页 |
| 第二章 新城疫病毒LaSota株全长载体的构建 | 第24-41页 |
| ·材料 | 第24-28页 |
| ·菌株与病毒 | 第24页 |
| ·载体 | 第24-26页 |
| ·工具酶与试剂盒 | 第26页 |
| ·生化试剂 | 第26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26-27页 |
| ·主要溶液的配制 | 第27-28页 |
| ·抗生素类 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27页 |
| ·质粒抽提相关溶液 | 第27页 |
| ·感受态细胞制备所用试剂 | 第27页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳试剂 | 第27-28页 |
| ·试验方法 | 第28-35页 |
| ·试验设计 | 第28页 |
| ·引物设计与合成 | 第28-29页 |
| ·NDV的增殖 | 第29页 |
| ·NDV的RNA提取 | 第29-30页 |
| ·NDV的反转录 | 第30页 |
| ·NDV分片段PCR | 第30-32页 |
| ·DH5α感受态细胞制备(氯化钙法) | 第31页 |
| ·各目的片段分别与平末端T载的连接与转化 | 第31页 |
| ·重组质粒的小量提取(碱裂解法) | 第31页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第31-32页 |
| ·大片段载体的构建 | 第32-35页 |
| ·p3TH载体的构建 | 第32-33页 |
| ·pEcoRI-NDV23质粒的构建 | 第33-34页 |
| ·pSK-NDV654质粒的构建 | 第34页 |
| ·全长载体的构建 | 第34-35页 |
| ·试验结果 | 第35-39页 |
| ·七个小片段RT-PCR结果 | 第35页 |
| ·目的片段与平末端T载的酶切结果 | 第35-36页 |
| ·七个小片段的测序结果 | 第36页 |
| ·载体p3TH的酶切结果 | 第36-37页 |
| ·重组质粒pEcoRI-NDV23的酶切结果 | 第37-38页 |
| ·重组质粒pSK-NDV654的酶切结果 | 第38-39页 |
| ·全长载体p3TH-NDV的酶切结果 | 第39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 辅助质粒的构建与鉴定 | 第41-52页 |
| ·材料 | 第41-43页 |
| ·菌株与病毒 | 第41页 |
| ·载体 | 第41页 |
| ·工具酶与试剂盒 | 第41页 |
| ·生化试剂 | 第41-42页 |
| ·主要仪器设备 | 第42页 |
| ·主要溶液的配制 | 第42-43页 |
| ·抗生素类 | 第42页 |
| ·培养基 | 第42页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳试剂 | 第42页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)相关试剂 | 第42-43页 |
| ·Western blot的相关溶液 | 第43页 |
| ·试验方法 | 第43-47页 |
| ·辅助质粒的构建 | 第43-44页 |
| ·引物设计与合成 | 第43页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第43-44页 |
| ·目的片段的酶切回收、连接转化 | 第44页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第44页 |
| ·辅助质粒pCl-NP和pCl-P的表达鉴定 | 第44-47页 |
| ·中提质粒 | 第44页 |
| ·NP和P分别在BHK-21细胞中的瞬时表达 | 第44-45页 |
| ·RT-PCR法检测 | 第45页 |
| ·western blot检测 | 第45-47页 |
| ·间接免疫荧光检测 | 第47页 |
| ·试验结果与分析 | 第47-50页 |
| ·真核重组质粒的构建结果 | 第47-48页 |
| ·RT-PCR扩增结果 | 第47页 |
| ·酶切鉴定结果 | 第47-48页 |
| ·测序结果 | 第48页 |
| ·真核重组质粒的表达鉴定结果 | 第48-50页 |
| ·RT-PCR法检测 | 第48-49页 |
| ·western-blot检测结果 | 第49-50页 |
| ·间接免疫荧光检测结果 | 第50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 总结 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 附录1：新城疫病毒LaSota株七个基因片段序列比对结果 | 第59-61页 |
| 附录2：NP、P基因序列及序列比对结果 | 第61-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
