| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-22页 |
| ·相关病原简介 | 第13-16页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome Virus,PRRSV) | 第13-14页 |
| ·猪圆环病毒Ⅱ型(Porcine circovirus type 2,PCV-2) | 第14-15页 |
| ·猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV) | 第15-16页 |
| ·相关病原的诊断技术 | 第16-19页 |
| ·病毒分离鉴定 | 第16-17页 |
| ·血清学和免疫学方法 | 第17-18页 |
| ·分子生物学诊断技术 | 第18-19页 |
| ·实时荧光定量PCR(REAL TIME QUANTITATIV PCR)方法简介 | 第19-21页 |
| ·实时荧光定量PCR方法的原理 | 第19页 |
| ·实时荧光定量PCR方法的分类 | 第19-20页 |
| ·多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光PCR方法 | 第20页 |
| ·实时荧光定量PCR在生命科学研究中的应用前景 | 第20-21页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒Ⅱ型、猪伪狂犬病病毒SYBR GREEN-Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立 | 第22-38页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·毒株与细胞 | 第22页 |
| ·载体与菌种 | 第22页 |
| ·生化试剂及试剂盒 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-28页 |
| ·病毒培养 | 第23页 |
| ·PRRSV N蛋白基因、PCV-2 rep蛋白基因和PRV gE基因的部分核酸序列的克隆与鉴定 | 第23-27页 |
| ·SYBR Green-Ⅰ实时荧光定量PCR标准品的制备及标准曲线的制作 | 第27-28页 |
| ·3种病毒SYBR Green-Ⅰ实时荧光定量PCR特异性试验 | 第28页 |
| ·3种病毒SYBR Green-Ⅰ实时荧光定量PCR重复性试验 | 第28页 |
| ·结果 | 第28-36页 |
| ·3种病毒特异性引物 | 第28-29页 |
| ·PRRSV N蛋白基因、PCV-2 rep蛋白基因和PRV gE基因的部分核酸序列PCR扩增电泳鉴定结果 | 第29页 |
| ·PRRSV N蛋白基因、PCV-2 rep蛋白基因和PRV gE基因的部分核酸重组质粒PCR鉴定结果 | 第29-30页 |
| ·PRRSV N蛋白基因、PCV-2 rep蛋白基因和PRV gE基因的部分核酸序列重组质粒测序结果 | 第30-31页 |
| ·3种病毒SYBR Green-Ⅰ实时荧光定量PCR标准曲线 | 第31-33页 |
| ·3种病毒SYBR Green-Ⅰ实时荧光定量PCR特异性试验结果 | 第33-34页 |
| ·3种病毒SYBR Green-Ⅰ实时荧光定量PCR重复性试验结果 | 第34-36页 |
| ·讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒Ⅱ型、猪伪狂犬病病毒多重SYBR GREEN-Ⅰ实时荧光PCR方法的建立 | 第38-45页 |
| ·实验材料 | 第38页 |
| ·毒株 | 第38页 |
| ·生化试剂及试剂盒 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-40页 |
| ·病毒培养 | 第38-39页 |
| ·引物 | 第39页 |
| ·PCV、PRV病毒DNA的提取 | 第39页 |
| ·PRRSV病毒cDNA的制备 | 第39页 |
| ·多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光PCR反应条件 | 第39-40页 |
| ·特异性试验 | 第40页 |
| ·重复性试验 | 第40页 |
| ·敏感性试验 | 第40页 |
| ·结果 | 第40-43页 |
| ·3种病毒扩增片段TM值的确定 | 第40-41页 |
| ·特异性试验结果 | 第41页 |
| ·重复性试验结果 | 第41-43页 |
| ·敏感性实验结果 | 第43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 全文结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简历 | 第55页 |
