| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-8页 |
| 一 前言 | 第8-15页 |
| 1 文献综述 | 第8-11页 |
| ·成纤维生长因子及其受体 | 第8-9页 |
| ·FGF/FGFR2信号途径与骨的发育 | 第9-11页 |
| ·FGFR2调控机制的研究和进展 | 第11页 |
| 2 本论文的研究内容及意义 | 第11-14页 |
| ·研究意义 | 第11-12页 |
| ·研究内容 | 第12-14页 |
| 3 研究思路 | 第14-15页 |
| 二 实验仪器与材料 | 第15-21页 |
| 1 材料 | 第15-20页 |
| ·细胞株、细菌与质粒 | 第15页 |
| ·主要试剂与试剂盒 | 第15-16页 |
| ·常用试剂及配方 | 第16-20页 |
| 2 仪器与设备 | 第20-21页 |
| 三 实验方法 | 第21-41页 |
| 1 DnaseⅠ超敏感实验 | 第21-22页 |
| ·细胞核抽提 | 第21页 |
| ·DnaseⅠ消化细胞核 | 第21页 |
| ·DnaseⅠ消化基因组抽提 | 第21页 |
| ·探针标记 | 第21-22页 |
| 2 Southern Blot | 第22-23页 |
| 3 CHART-PCR | 第23-24页 |
| 4 凝胶迁移实验(EMSA) | 第24-26页 |
| ·核蛋白的提取 | 第24页 |
| ·探针的标记 | 第24-25页 |
| ·探针标记率的测定 | 第25页 |
| ·反应与电泳 | 第25-26页 |
| 5 FGFR2启动子缺失突变的Luciferase报告载体构建 | 第26-32页 |
| ·实验设计 | 第26-27页 |
| ·基因组DNA的制备 | 第27-28页 |
| ·PCR扩增 | 第28-29页 |
| ·切胶回收纯化PCR或酶切产物 | 第29页 |
| ·PCR产物的酶切 | 第29-30页 |
| ·连接反应 | 第30页 |
| ·转导大肠杆菌 | 第30-31页 |
| ·重组子的快速鉴定 | 第31页 |
| ·质粒的抽提 | 第31页 |
| ·酶切鉴定 | 第31-32页 |
| 6 RT-PCR | 第32-34页 |
| ·检测引物设计 | 第32页 |
| ·总RNA抽提 | 第32页 |
| ·总RNA纯度和完整性检测 | 第32-33页 |
| ·逆转录 | 第33页 |
| ·PCR | 第33-34页 |
| 7 Erase-a-base方法构建缺失突变载体 | 第34-36页 |
| 8 核心启动子元件的活性检测 | 第36-37页 |
| ·转染用质粒的制备 | 第36页 |
| ·质粒转染细胞 | 第36-37页 |
| ·Lucifersae检测 | 第37页 |
| 9 siRNA分子转染成骨相关细胞 | 第37-38页 |
| 10 染色质免疫共沉淀 | 第38-39页 |
| 11 启动子点突变 | 第39-41页 |
| ·PCR技术进行启动子点突变 | 第39页 |
| ·Blunting Kination反应 | 第39-40页 |
| ·Ligation反应 | 第40-41页 |
| 四 结果与分析 | 第41-53页 |
| 1 FGFR2在成骨相关细胞中的表达 | 第41-42页 |
| 2 FGFR2基因与启动子结构的分析 | 第42页 |
| 3 FGFR2基因转录活跃区域的确定 | 第42-45页 |
| ·DNaseⅠ超敏感实验对FGFR2基因转录活跃区初步定位 | 第42-43页 |
| ·CHART-PCR实验进一步缩小FGFR2基因转录活跃范围 | 第43-45页 |
| 4 FGFR2基因上游启动子元件的搜寻 | 第45-47页 |
| 5 转录因子NF-Y与FGFR2上游启动子元件特异结合 | 第47-51页 |
| ·上游启动子元件片段与NF-Y的结合 | 第47-49页 |
| ·转录因子NF-Y与FGFR2启动子的原位结合 | 第49-50页 |
| ·转录因子NF-Y决定FGFR2启动子基础活性 | 第50-51页 |
| 6 转录因子NF-Y调控FGFR2基因转录的机制探索 | 第51-53页 |
| 五 讨论 | 第53-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 在学期间发表论文清单 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
