Burkholderia sp. GXU56脂肪酶基因克隆与表达
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 前言 | 第10-24页 |
| ·脂肪酶简介 | 第10页 |
| ·脂肪酶催化机制 | 第10-12页 |
| ·脂肪酶活性检测方法 | 第12-13页 |
| ·脂肪酶基因结构、表达和分泌机制 | 第13-21页 |
| ·脂肪酶的应用与展望 | 第21-23页 |
| ·本工作的研究目的与方法 | 第23-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-51页 |
| ·菌株及质粒 | 第24页 |
| ·培养基及生长条件 | 第24-26页 |
| ·抗菌素 | 第26页 |
| ·溶液、缓冲液和试剂 | 第26-28页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第28-31页 |
| ·质粒DNA的纯化、定量与沉淀 | 第31-32页 |
| ·电泳 | 第32-33页 |
| ·DNA的限制性内切酶酶切 | 第33页 |
| ·DNA酶切片段的分离与回收 | 第33-34页 |
| ·DNA的连接 | 第34-35页 |
| ·质粒DNA纯化 | 第35-36页 |
| ·PCR扩增 DNA片段 | 第36-37页 |
| ·总DNA的提取 | 第37-38页 |
| ·粘粒基因组文库的构建 | 第38-40页 |
| ·DNA-DNA杂交 | 第40-43页 |
| ·聚丙烯酞胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第43-44页 |
| ·目的基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第44-45页 |
| ·目的基因在枯草芽孢杆菌中的诱导表达 | 第45页 |
| ·非试剂盒操作包涵体蛋白的分离、变性与复性 | 第45-46页 |
| ·试剂盒操作包涵体蛋白的分离、变性与复性 | 第46-47页 |
| ·试剂盒操作蛋白的纯化 | 第47-49页 |
| ·脂肪酶酶活性检测 | 第49-51页 |
| 第三章 脂肪酶基因克隆及分析 | 第51-65页 |
| ·基因组 DNA部分酶切片断的制备 | 第51-52页 |
| ·基因组粘粒文库的构建 | 第52-53页 |
| ·探针获得及序列分析验证 | 第53-55页 |
| ·目的基因克隆的筛选 | 第55-56页 |
| ·阳性克隆的分析以及基因序列补齐 | 第56-64页 |
| ·讨论 | 第64-65页 |
| 第四章 脂肪酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第65-73页 |
| ·表达质粒的构建 | 第65-68页 |
| ·脂肪酶基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第68-71页 |
| ·脂肪酶lipA包涵体复性、纯化 | 第71-72页 |
| ·讨论 | 第72-73页 |
| 第五章 脂肪酶基因在枯草芽孢杆菌表面展示表达 | 第73-80页 |
| ·枯草芽孢杆菌表面展示表达载体的构建 | 第73-78页 |
| ·枯草芽孢杆菌表面展示表达产物分析 | 第78-79页 |
| ·讨论 | 第79-80页 |
| 第六章 结论与展望 | 第80-83页 |
| ·结论 | 第80-81页 |
| ·问题与展望 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-90页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
