| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-11页 |
| 第1章 引言 | 第11-40页 |
| 1 病原微生物感染的现状 | 第11页 |
| 2 病原微生物的分类 | 第11-13页 |
| 3 病原微生物的检测方法综述 | 第13-33页 |
| ·传统分离培养方法 | 第13页 |
| ·免疫学检测方法 | 第13页 |
| ·分子生物学检测方法 | 第13-29页 |
| ·直接核酸杂交技术 | 第13页 |
| ·特定基因片段的PCR检测技术 | 第13-16页 |
| ·连接酶链反应 | 第16页 |
| ·DNA指纹技术 | 第16-17页 |
| ·基于16S rRNA与Gyr B的检测技术 | 第17页 |
| ·恒温扩增技术 | 第17-27页 |
| ·链置换扩增反应 | 第18-20页 |
| ·滚环扩增技术 | 第20-24页 |
| ·环介导的等温核酸扩增技术 | 第24-25页 |
| ·依赖核酸序列的扩增 | 第25-26页 |
| ·转录介导的扩增技术 | 第26页 |
| ·单引物恒温扩增 | 第26-27页 |
| ·Qβ复制酶反应 | 第27页 |
| ·信号放大技术 | 第27-29页 |
| ·枝链核酸信号放大系统 | 第27-28页 |
| ·环状探针技术 | 第28页 |
| ·侵染探针技术 | 第28页 |
| ·纳米颗粒 | 第28-29页 |
| ·酪胺信号放大技术 | 第29页 |
| ·免疫学和分子生物学结合检测方法 | 第29-31页 |
| ·免疫PCR | 第29-31页 |
| ·PCR-ELISA | 第31页 |
| ·免疫捕获PCR | 第31页 |
| ·综合法 | 第31-33页 |
| ·生物芯片 | 第31-32页 |
| ·生物传感器 | 第32-33页 |
| ·分析化学技术 | 第33页 |
| ·其它方法 | 第33页 |
| 4 噬菌体展示技术综述 | 第33-39页 |
| ·噬菌体展示技术的基本原理 | 第34-35页 |
| ·噬菌体表面展示系统 | 第35-36页 |
| ·丝状噬菌体展示系统 | 第35页 |
| ·T4噬菌体展示系统 | 第35-36页 |
| ·λ噬菌体展示系统 | 第36页 |
| ·T7噬菌体展示系统 | 第36页 |
| ·噬菌体展示技术的应用 | 第36-38页 |
| ·开发新型疫苗 | 第36-37页 |
| ·多肽类药物 | 第37页 |
| ·在抗体工程中的应用 | 第37-38页 |
| ·在疾病诊断和治疗中的应用 | 第38页 |
| ·在基础研究中的应用 | 第38页 |
| ·展望 | 第38-39页 |
| 5 本研究的主要目标及研究内容 | 第39-40页 |
| 第2章 噬菌体展示介导的免疫PCR | 第40-60页 |
| 1 材料与方法 | 第42-49页 |
| ·材料 | 第42-44页 |
| ·菌株及质粒 | 第42-43页 |
| ·引物及探针 | 第43页 |
| ·试剂与材料 | 第43页 |
| ·培养基与溶液配方 | 第43-44页 |
| ·实验方法 | 第44-49页 |
| ·噬菌体展示单链抗体L13的构建 | 第44-45页 |
| ·重组噬菌体L13的产生及滴度鉴定 | 第45页 |
| ·重组噬菌体L13的特异性鉴定 | 第45-46页 |
| ·噬菌体ELISA鉴定 | 第45-46页 |
| ·Western Blot试验 | 第46页 |
| ·噬菌体ELISA检测汉坦病毒核蛋白 | 第46页 |
| ·噬菌体计数方法评价封阻试剂及洗涤条件 | 第46页 |
| ·噬菌体PCR | 第46-47页 |
| ·噬菌体展示介导的免疫PCR检测汉坦病毒核蛋白 | 第47-48页 |
| ·Real-time PD-IPCR检测汉坦病毒核蛋白 | 第48页 |
| ·PD-IPCR检测朊蛋白 | 第48-49页 |
| 2 结果 | 第49-57页 |
| ·单链抗体L13的构建 | 第49页 |
| ·重组噬菌体L13的滴度鉴定 | 第49页 |
| ·重组噬菌体L13的特异性鉴定 | 第49-50页 |
| ·噬菌体ELISA检测汉坦病毒核蛋白 | 第50页 |
| ·噬菌体计数试验比较ELISA和PD-IPCR的灵敏度 | 第50-51页 |
| ·噬菌体计数方法评价封阻试剂及洗涤条件 | 第51-52页 |
| ·PD-IPCR检测汉坦病毒核蛋白 | 第52-54页 |
| ·Real-time PD-IPCR检测NP | 第54-57页 |
| ·PD-IPCR检测朊蛋白 | 第57页 |
| 3 讨论 | 第57-60页 |
| 第3章 噬菌体展示介导的恒温扩增病原检测方法 | 第60-83页 |
| 1 材料与方法 | 第61-70页 |
| ·材料 | 第61-64页 |
| ·菌株及质粒 | 第61-62页 |
| ·引物及探针 | 第62页 |
| ·试剂与材料 | 第62-63页 |
| ·培养基与溶液配方 | 第63-64页 |
| ·实验方法 | 第64-70页 |
| ·HIV P24抗原的表达、纯化与鉴定 | 第64-66页 |
| ·PCR扩增p24基因 | 第64-65页 |
| ·pET32-p24表达载体的构建 | 第65页 |
| ·重组P24蛋白的表达与纯化 | 第65-66页 |
| ·重组P24蛋白的鉴定 | 第66页 |
| ·噬菌体展示HBsAg scFv的构建与鉴定 | 第66-68页 |
| ·PCR扩增重链可变区和轻链可变区 | 第66页 |
| ·Overlap PCR扩增全长单链抗体基因 | 第66-67页 |
| ·噬菌体展示HBsAg单链抗体的构建 | 第67-68页 |
| ·HBsAg单链抗体的鉴定 | 第68页 |
| ·HBsAg单链抗体基因的序列分析 | 第68页 |
| ·间接噬菌体ELISA和夹心ELISA检测P24和HBsAg | 第68-69页 |
| ·噬菌体展示介导的免疫RCA | 第69页 |
| ·噬菌体展示介导的免疫链置换扩增检测 | 第69-70页 |
| ·Real-time噬菌体展示介导的免疫链置换扩增 | 第70页 |
| 2 结果 | 第70-80页 |
| ·HIV P24蛋白的表达、纯化与鉴定 | 第70-72页 |
| ·PCR扩增p24基因 | 第70页 |
| ·重组P24的克隆、表达与纯化 | 第70-71页 |
| ·重组P24蛋白的鉴定 | 第71-72页 |
| ·噬菌体展示HBsAg scFv的构建与鉴定 | 第72-75页 |
| ·PCR扩增重链可变区和轻链可变区 | 第72-73页 |
| ·全长scFv DNA的组装与扩增 | 第73页 |
| ·HBsAg scFv的鉴定 | 第73-74页 |
| ·HBsAg单链抗体基因的序列分析 | 第74-75页 |
| ·间接噬菌体ELISA和夹心ELISA检测P24和HBsAg | 第75-76页 |
| ·噬菌体展示介导的免疫RCA | 第76-77页 |
| ·噬菌体展示介导的免疫链置换扩增检测 | 第77页 |
| ·Real-time噬菌体展示介导的免疫链置换扩增检测 | 第77-80页 |
| 3 讨论 | 第80-83页 |
| 第4章 结论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-94页 |
| 发表和待发表的文章目录 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95页 |
