| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-37页 |
| 1.ALA的生理作用及其应用 | 第14-22页 |
| ·ALA的生理作用 | 第14-17页 |
| ·促进光合作用 | 第14-15页 |
| ·调节叶绿素的合成 | 第14-15页 |
| ·提高叶绿素和捕光系统Ⅱ(PSⅡ)的稳定性 | 第15页 |
| ·提高光合效率 | 第15页 |
| ·影响呼吸作用 | 第15-16页 |
| ·促进植物组织分化 | 第16页 |
| ·启动细胞过氧化反应 | 第16页 |
| ·直接启动脂质过氧化反应 | 第16页 |
| ·间接启动光氧化反应 | 第16页 |
| ·生物体内运输 | 第16页 |
| ·其他方面的作用 | 第16-17页 |
| ·ALA的功能和应用 | 第17-22页 |
| ·农业领域的应用 | 第17-21页 |
| ·新型光活化杀虫除草农药 | 第17-18页 |
| ·促进作物生长并提高产量 | 第18-19页 |
| ·提高植物抗逆性 | 第19-20页 |
| ·促使草皮生长和绿化利用 | 第20页 |
| ·促进苹果果实着色 | 第20页 |
| ·防治病毒病 | 第20页 |
| ·其它 | 第20-21页 |
| ·ALA在医学领域的应用 | 第21-22页 |
| ·光动力疗法治疗皮肤癌 | 第21-22页 |
| ·检验铅中毒的主要试剂 | 第22页 |
| 2.ALA生产方法 | 第22-35页 |
| ·化学方法合成ALA | 第23-25页 |
| ·以马尿酸和琥珀酸为原料的合成工艺 | 第23页 |
| ·以吡啶,糠醛等杂环物质的衍生物为反应原料 | 第23-24页 |
| ·以乙酰丙酸或其衍生物为原料的合成工艺 | 第24-25页 |
| ·微生物转化合成ALA | 第25-35页 |
| ·生物合成5—氨基乙酰丙酸的机理 | 第25-30页 |
| ·碳四途径LA合成的调节机理 | 第25-28页 |
| ·碳五途径ALA合成的调节机理 | 第28-30页 |
| ·ALA的生物合成 | 第30-34页 |
| ·诱变育种法 | 第30-32页 |
| ·基因工程菌生产ALA | 第32-34页 |
| ·生理和环境因素对生物合成ALA的影响 | 第34-35页 |
| ·生物节律 | 第34页 |
| ·细胞(器)发育 | 第34页 |
| ·光和光敏素调节 | 第34页 |
| ·代谢产物的反馈调节 | 第34-35页 |
| ·温度效应 | 第35页 |
| ·外源激素的效应 | 第35页 |
| 3.拟研究内容和方向 | 第35-37页 |
| 第二章 ALAS基因的克隆及原核表达载体的构建 | 第37-47页 |
| 1.实验材料 | 第37-38页 |
| ·菌株及质粒 | 第37页 |
| ·ALAS基因特异PCR扩增引物 | 第37页 |
| ·酶和试剂盒 | 第37-38页 |
| 2.实验方法 | 第38-43页 |
| ·光合细菌菌种嗜酸柏拉红菌的培养与纯化 | 第38页 |
| ·目的基因的克隆 | 第38-40页 |
| ·嗜酸柏拉红菌总DNA的抽提 | 第38-39页 |
| ·PCR引物设计 | 第39页 |
| ·PCR反应体系 | 第39页 |
| ·反应参数设置 | 第39-40页 |
| ·电泳检测 | 第40页 |
| ·PCR产物割胶回收纯化 | 第40页 |
| ·原核表达载体构建、转化 | 第40-42页 |
| ·原核表达载体ALAS-pQE30的构建 | 第40-41页 |
| ·PCR产物和原核表达载体pQE30的双酶切 | 第40-41页 |
| ·电泳检测 | 第41页 |
| ·产物割胶纯化回收 | 第41页 |
| ·表达载体的连接 | 第41页 |
| ·表达载体ALAS-pQE30转化大肠杆菌 | 第41-42页 |
| ·表达菌株感受态细胞的制备 | 第41-42页 |
| ·表达载体ALAS-pQE30转化感受态细胞 | 第42页 |
| ·重组质粒的筛选 | 第42-43页 |
| ·重组质粒PCR筛选 | 第42-43页 |
| ·重组质粒的抽提 | 第42-43页 |
| ·重组质粒PCR鉴定 | 第43页 |
| ·重组质粒的限制性酶切鉴定 | 第43页 |
| 3.结果与分析 | 第43-45页 |
| ·ALAS基因的PCR扩增 | 第43页 |
| ·ALAS-pQE30结构和构建 | 第43页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第43-45页 |
| 4.讨论 | 第45-47页 |
| 第三章 重组质粒的诱导表达及蛋白的纯化与检测 | 第47-56页 |
| 1.实验材料 | 第47-48页 |
| ·菌株 | 第47页 |
| ·培养基 | 第47页 |
| ·试剂 | 第47-48页 |
| 2.实验方法 | 第48-52页 |
| ·ALAS基因的诱导表达 | 第48页 |
| ·细胞总蛋白的提取 | 第48页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第48-49页 |
| ·Ni-NTA纯化示意图 | 第48页 |
| ·ALA的纯化 | 第48-49页 |
| ·外源基因所编码蛋白的SDS-PAGE分析 | 第49-50页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶的制备 | 第49-50页 |
| ·胶的配制比例 | 第49页 |
| ·SDS—PAGE过程 | 第49-50页 |
| ·聚丙烯酸胺的染色 | 第50页 |
| ·总蛋白含量测定 | 第50-51页 |
| ·制作标准曲线 | 第50-51页 |
| ·检测样品的蛋白含量 | 第51页 |
| ·ALAS酶活性测定 | 第51-52页 |
| ·胞外ALA测定 | 第52页 |
| ·ALA标准曲线的制作 | 第52页 |
| ·样品中ALA含量的测定 | 第52页 |
| 3.结果与分析 | 第52-54页 |
| ·重组ALAS-pQE30质粒的诱导表达及蛋白的纯化与检测结果 | 第52-53页 |
| ·不同菌株总蛋白含量及酶活性测定结果 | 第53-54页 |
| ·蛋白质标准曲线 | 第53页 |
| ·ALA标准曲线 | 第53页 |
| ·重组菌胞外ALA产量及ALAS的活性 | 第53-54页 |
| 4.讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 工程菌产ALA培养条件优化 | 第56-71页 |
| 1.试验材料 | 第57页 |
| ·菌株 | 第57页 |
| ·培养基 | 第57页 |
| ·试剂 | 第57页 |
| 2.实验方法 | 第57页 |
| ·条件优化 | 第57页 |
| ·稳定性测评 | 第57页 |
| 3.结论与讨论 | 第57-71页 |
| ·培养基的初步择定 | 第58-60页 |
| ·诱导条件的优化 | 第60-62页 |
| ·诱导剂的添加时机 | 第60-61页 |
| ·诱导剂的添加量 | 第61-62页 |
| ·诱导后的培养时间 | 第62-64页 |
| ·前体的优化 | 第64-66页 |
| ·琥珀酸的初始浓度对胞外ALA积累的影响 | 第64-65页 |
| ·甘氨酸的初始浓度对菌体生长和胞外ALA积累的影响 | 第65-66页 |
| ·乙酰丙酸(LA)对工程菌胞外ALA积累的影响 | 第66-67页 |
| ·LA添加时间对胞外ALA积累的影响 | 第66-67页 |
| ·LA添加量及添加时间对胞外ALA积累的影响 | 第67页 |
| ·发酵放大 | 第67-68页 |
| ·发酵液中ALA稳定性初评 | 第68-71页 |
| 第五章 外源ALA在植物上的初步应用 | 第71-79页 |
| 1.试验材料与试验设计 | 第71-74页 |
| ·试验材料与培养 | 第71页 |
| ·试验设计 | 第71-72页 |
| ·外源ALA处理对植物生长的影响 | 第72页 |
| ·外源ALA处理对植物体内叶绿素含量的影响 | 第72页 |
| ·外源ALA处理对植物比叶重的影响 | 第72页 |
| ·逆境胁迫下植物体内保护酶的变化 | 第72页 |
| ·霜冻胁迫试验 | 第72页 |
| ·干旱胁迫试验 | 第72页 |
| ·试验方法 | 第72-74页 |
| ·叶绿素含量的测定 | 第72-73页 |
| ·比叶重的测定 | 第73页 |
| ·过氧化氢酶和过氧化物酶活性的测定 | 第73页 |
| ·酶液制备 | 第73页 |
| ·过氧化氢酶(CAT)活性测定 | 第73页 |
| ·过氧化物酶(POD)活性测定 | 第73页 |
| ·丙二醛(MDA)的提取与测定 | 第73-74页 |
| 2.结果与分析 | 第74-77页 |
| ·外源ALA处理对植物光合作用的影响 | 第74-75页 |
| ·外源ALA处理对植物体内叶绿素含量的影响 | 第74页 |
| ·外源ALA处理对植物比叶重的影响 | 第74-75页 |
| ·外源ALA处理在霜冻胁迫下引起的体内POD及CAT活性变化 | 第75页 |
| ·外源ALA处理在干旱胁迫下对烟草的影响 | 第75-77页 |
| ·不同处理在干旱胁迫下引起的体内POD及CAT活性变化 | 第75-76页 |
| ·在干旱胁迫下不同处理对烟草生长的影响 | 第76-77页 |
| 3.讨论 | 第77-79页 |
| 第六章 结论与展望 | 第79-82页 |
| 1.结论 | 第79-80页 |
| ·R.acidophilus中ALAS基因的克隆 | 第79页 |
| ·原核表达载体的构建及表达菌株的选择 | 第79页 |
| ·培养条件的优化 | 第79-80页 |
| ·发酵液中ALA的稳定性初探 | 第80页 |
| ·外源ALA对植物生长的影响及提高抗逆性研究 | 第80页 |
| 2.展望 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-93页 |
| 附录 | 第93-101页 |
| 作者简历 | 第101-102页 |
| 致谢 | 第102页 |
