| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第15-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-50页 |
| ·猪圆环病毒的研究进展 | 第16-29页 |
| ·猪圆环病毒的发现及危害 | 第16-21页 |
| ·猪圆环病毒特性 | 第21-22页 |
| ·猪圆环病毒流行病学 | 第22-24页 |
| ·猪圆环病毒的分子生物学 | 第24-27页 |
| ·检测方法的研究进展 | 第27-29页 |
| ·猪圆环病毒疫苗的研究进展 | 第29页 |
| ·猪细小病毒的研究进展 | 第29-38页 |
| ·猪细小病毒的发现及危害 | 第29-30页 |
| ·猪细小病毒形态、理化特性与血凝性 | 第30-31页 |
| ·猪细小病毒培养特性 | 第31页 |
| ·猪细小病毒流行病学 | 第31-32页 |
| ·猪细小病毒的分子生物学 | 第32-37页 |
| ·猪细小病毒疫苗的研究进展 | 第37-38页 |
| ·伪狂犬病毒的研究进展 | 第38-48页 |
| ·猪伪狂犬病毒的危害 | 第38-39页 |
| ·猪伪狂犬病毒的特性 | 第39-40页 |
| ·猪伪狂犬病毒鉴别技术的研究 | 第40-42页 |
| ·猪伪狂犬病毒的分子生物学 | 第42-44页 |
| ·伪狂犬病病毒活载体疫苗的研究进展 | 第44-48页 |
| ·研究的目的和意义 | 第48-50页 |
| 第二章 猪2型圆环病毒和猪细小病毒核酸疫苗的研究 | 第50-70页 |
| ·实验材料 | 第50-53页 |
| ·毒种与细胞 | 第50页 |
| ·菌种与质粒 | 第50页 |
| ·研究中所用的引物 | 第50页 |
| ·主要的药品及试剂 | 第50页 |
| ·主要培养基 | 第50-51页 |
| ·质粒小量抽提液 | 第51页 |
| ·质粒大抽与纯化用缓冲液 | 第51页 |
| ·SDS-PAGE缓冲液 | 第51-52页 |
| ·Western blotting缓冲液 | 第52页 |
| ·ELISA缓冲液 | 第52-53页 |
| ·其它缓冲液 | 第53页 |
| ·实验动物 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-61页 |
| ·质粒的小量制备 | 第53页 |
| ·质粒的大量制备与纯化 | 第53-54页 |
| ·PCV2 ORF2基因和PPV VP2基因酶切与回收 | 第54-55页 |
| ·真核表达载体pcDNA-ORF2和pcDNA-VP2的构建 | 第55-56页 |
| ·连接反应 | 第56页 |
| ·感受态细胞制备 | 第56页 |
| ·连接产物的转化 | 第56页 |
| ·构建表达质粒用ORF2基因进行PCR检测 | 第56-57页 |
| ·构建表达质粒用VP2全基因进行PCR检测 | 第57页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第57页 |
| ·转染细胞制作准备 | 第57-58页 |
| ·转染细胞制作 | 第58页 |
| ·酶标SPA制备 | 第58页 |
| ·重组质粒表达及检测 | 第58-59页 |
| ·实验分组 | 第59-60页 |
| ·小鼠脾T淋巴细胞的制备及脾细胞增殖实验 | 第60页 |
| ·外周血T淋巴细胞的预处理及亚群数量的检测 | 第60页 |
| ·免疫小鼠血清抗体检测 | 第60-61页 |
| ·基因疫苗的安全性检测 | 第61页 |
| ·结果与分析 | 第61-66页 |
| ·pcDNA-3.1(+)、PCV2 ORF2和PPV VP2基因酶切与回收 | 第61-62页 |
| ·pcDNA-ORF2和pcDNA-VP2质粒的构建及鉴定 | 第62-63页 |
| ·PCV2 ORF2和PPV VP2基因在哺乳动物细胞中的表达 | 第63-64页 |
| ·脾细胞增殖实验-MMT法 | 第64页 |
| ·T细胞亚类数量的检测 | 第64-65页 |
| ·小鼠血清中PCV2特意性抗体测定 | 第65页 |
| ·实验小鼠血清中PPV特意性抗体测定 | 第65-66页 |
| ·基因疫苗的安全性检测 | 第66页 |
| ·讨论 | 第66-69页 |
| ·目的基因的选择 | 第66-67页 |
| ·真核表达质粒的选择与构建 | 第67页 |
| ·pcDNA-ORF2和pcDNA-VP2核酸疫苗的免疫原性 | 第67-68页 |
| ·pcDNA-ORF2和pcDNA-VP2核酸疫苗的安全性 | 第68-69页 |
| ·结论 | 第69-70页 |
| 第三章 PCV2-PPV-PRV三价基因工程疫苗的研究 | 第70-105页 |
| ·实验材料 | 第70-73页 |
| ·毒种与细胞 | 第70页 |
| ·菌种与质粒 | 第70页 |
| ·研究中所用的引物 | 第70页 |
| ·主要的药品及试剂 | 第70-71页 |
| ·主要培养基 | 第71页 |
| ·质粒小量抽提液 | 第71页 |
| ·质粒大抽与纯化用缓冲液 | 第71-72页 |
| ·SDS-PAGE缓冲液 | 第72页 |
| ·Western blotting缓冲液 | 第72页 |
| ·ELISA缓冲液 | 第72-73页 |
| ·其它缓冲液 | 第73页 |
| ·实验动物 | 第73页 |
| ·实验方法 | 第73-85页 |
| ·质粒的小量制备 | 第73页 |
| ·质粒的大量制备与纯化 | 第73-74页 |
| ·感受态细胞制备 | 第74-75页 |
| ·伪狂犬转移载体pPI-2.EGFP.ORF2的构建 | 第75-76页 |
| ·伪狂犬转移载体pPI-2.EGFP.ORF2.VP2的构建 | 第76-78页 |
| ·PPV VP2基因和pPI-2.EGFP.ORF2载体酶切与回收 | 第76-77页 |
| ·连接反应 | 第77页 |
| ·连接产物的转化 | 第77页 |
| ·重组质粒的PCR扩增与酶切鉴定 | 第77-78页 |
| ·病毒的增殖 | 第78页 |
| ·PCV2的增殖 | 第78页 |
| ·PPV的增殖 | 第78页 |
| ·PRV的增殖 | 第78页 |
| ·PRV病毒基因组的提取 | 第78页 |
| ·转染细胞准备 | 第78页 |
| ·脂质体介导的共转染 | 第78-79页 |
| ·重组病毒的空斑筛选 | 第79页 |
| ·重组病毒的空斑纯化、PCR鉴定及绿色荧光检测 | 第79-80页 |
| ·重组病毒Southern杂交 | 第80-81页 |
| ·重组病毒SDS-PAGE电泳 | 第81页 |
| ·重组病毒Western blotting | 第81-82页 |
| ·重组病毒PRV、PCV2和PPV抗原性检测 | 第82页 |
| ·重组病毒在不同细胞上的增殖滴度 | 第82-83页 |
| ·重组病毒的遗传稳定性检测 | 第83页 |
| ·重组病毒与亲本毒株SA215形态学比较 | 第83页 |
| ·病毒株PFU的测定 | 第83页 |
| ·重组病毒的安全性试验 | 第83页 |
| ·伪狂犬病毒SA215(D)株攻毒小鼠的病理学 | 第83-84页 |
| ·重组病毒对伪狂犬病的保护力实验 | 第84页 |
| ·重组病毒对小鼠的免疫性实验 | 第84-85页 |
| ·重组病毒对PRVFa株在小鼠体内的定植特性研究 | 第85页 |
| ·结果与分析 | 第85-99页 |
| ·伪狂犬转移载体pPI-2.EGFP.ORF2.VP2的构建及酶切鉴定 | 第85-88页 |
| ·重组伪狂犬病毒SA215(D)的构建与筛选 | 第88-89页 |
| ·重组病毒的SA215(D)PCR鉴定 | 第89-90页 |
| ·重组病毒SA215(D)的Southern杂交鉴定 | 第90-91页 |
| ·重组病毒SA215(D)Western-bloting检侧 | 第91页 |
| ·重组病毒SA215(D)PRV、PCV2和PPV抗原性检测 | 第91-92页 |
| ·重组病毒SA215(D)在不同细胞上的增殖 | 第92页 |
| ·重组病毒SA215(D)的遗传稳定性 | 第92-93页 |
| ·重组病毒SA215(D)与亲本毒株SA215形态学比较 | 第93-94页 |
| ·重组病毒SA215(D)安全性试验 | 第94页 |
| ·伪狂犬病毒SA215(D)株攻毒小鼠的病理学观察 | 第94-96页 |
| ·重组病毒对伪狂犬病的保护力实验 | 第96-97页 |
| ·免疫小鼠T细胞亚群数量的变化 | 第97页 |
| ·免疫小鼠的脾淋巴细胞增值反应检测 | 第97页 |
| ·免疫小鼠的PRV、PCV2和PPV抗体检测 | 第97-98页 |
| ·重组病毒SA215(D)对PRV Fa株体内定植特性的研究 | 第98-99页 |
| ·讨论 | 第99-103页 |
| ·伪狂犬病病毒载体的选择 | 第99页 |
| ·重组伪狂犬病病毒SA215(D)的构建 | 第99-100页 |
| ·重组伪狂犬病毒SA215(D)的筛选 | 第100-101页 |
| ·外源基因在伪狂犬病病毒载体中的表达 | 第101页 |
| ·外源基因的插入对伪狂犬病病毒增殖、毒力和保护力的影响 | 第101-102页 |
| ·重组病毒诱导的体液免疫与细胞免疫应答 | 第102-103页 |
| ·结论 | 第103-105页 |
| 参考文献 | 第105-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 个人简介 | 第117-118页 |
| 附件 | 第118页 |
