| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一部分 前言 | 第11-20页 |
| 1 抗菌肽的特点 | 第11页 |
| 2 抗菌肽的作用机理 | 第11-13页 |
| 3 Hepcidin抗菌肽的分子生物学及其功能 | 第13-17页 |
| 4 抗菌肽的应用前景 | 第17-20页 |
| 第二部分 材料和方法 | 第20-39页 |
| 1.材料 | 第20-26页 |
| ·供试鱼及其组织样品的采集 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·菌株及表达载体 | 第20-21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21-22页 |
| ·贮存液和培养基 | 第22-26页 |
| ·琼脂胶电泳用贮存液: | 第22页 |
| ·质粒抽提用缓冲液 | 第22-23页 |
| ·Tricine SDS-PAGE用贮存液 | 第23-24页 |
| ·Western-blotting用缓冲液 | 第24-25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| 2.方法 | 第26-39页 |
| ·试验技术路线图 | 第26页 |
| ·肝脏总RNA的提取 | 第26-27页 |
| ·模板cDNA的获得 | 第27页 |
| ·引物的设计 | 第27-28页 |
| ·目的片段的扩增和纯化 | 第28-29页 |
| ·目的片段与pMD-18T连接转化 | 第29-30页 |
| ·载体pMD18-TH和pGAPZB的制备 | 第30-31页 |
| ·质粒的双酶切连接及转化子的筛选 | 第31-32页 |
| ·表达载体的转化 | 第32-33页 |
| ·转化子的鉴定 | 第33-34页 |
| ·阳性重组转化子整合、筛选及表达 | 第34-35页 |
| ·阳性转化子的鉴定 | 第35-38页 |
| ·Tricine SDS-PAGE | 第35-36页 |
| ·Western-blotting | 第36-38页 |
| ·转化子时间表达动态及菌株表达对菌株密度的影响 | 第38-39页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第39-47页 |
| 1 大菱鲆肝脏总RNA的检测 | 第39页 |
| 2 引物的设计 | 第39-40页 |
| 3 目的片段的电泳检验 | 第40页 |
| 4 pMD18-TH所含目的片段的测序结果 | 第40-41页 |
| 5 pGAPZB,pMD18-TH双酶切结果 | 第41页 |
| 6 pGAPZB,pMD18-TH双酶切后回收结果 | 第41-42页 |
| 7 载体pGAPZB-TH目的片段测序结果 | 第42页 |
| 8 载体单酶切结果 | 第42-43页 |
| 9 pGAPZBZ与pGAPZB-TH酵母转化子基因组 | 第43页 |
| 10 pGAPZBZ与pGAPZB-TH酵母转化子PCR鉴定 | 第43-44页 |
| 11 表达产物的Tricine SDS-PAGE分析 | 第44页 |
| 12 融合蛋白的Western-blotting分析 | 第44-45页 |
| 13 阳性转化子的时间表达动态 | 第45-46页 |
| 14 菌株表达对菌株密度的影响 | 第46-47页 |
| 第四部分 讨论 | 第47-54页 |
| 1 高质量总RNA的获得 | 第47-48页 |
| 2 酵母菌株的选择 | 第48-49页 |
| 3 表达载体及其酶切位点的选择 | 第49-50页 |
| 4 电转化 | 第50-51页 |
| 5 酵母转化子的PCR筛选 | 第51页 |
| 6 多拷贝的筛选 | 第51-52页 |
| 7 菌株表达条件的优化 | 第52-54页 |
| 第五部分 结论 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第61页 |
