| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-13页 |
| 缩略语表 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-39页 |
| 1 嗜水气单胞菌与细菌性败血症 | 第15-16页 |
| 2 嗜水气单胞菌的形态特征与培养特性 | 第16页 |
| 3 嗜水气单胞菌的分类地位 | 第16-17页 |
| 4 血清型 | 第17-18页 |
| 5 宿主范围、分布及流行 | 第18-19页 |
| 6 症状及病理 | 第19-20页 |
| 7 毒力机制 | 第20-31页 |
| ·胞外产物外毒素 | 第20-27页 |
| ·气溶素 | 第20-25页 |
| ·气溶素通道的性质 | 第20-21页 |
| ·毒素的结构特征 | 第21页 |
| ·毒素的作用机理 | 第21-22页 |
| ·气溶素的应用 | 第22-24页 |
| ·气溶素基因 | 第24-25页 |
| ·溶血素HlyA | 第25-26页 |
| ·胞外蛋白酶 | 第26-27页 |
| ·细菌表面物质和内毒素 | 第27-31页 |
| ·S 层 | 第27-30页 |
| ·S 层蛋白性质 | 第27页 |
| ·S 层相关基因 | 第27-28页 |
| ·S 层蛋白的分泌 | 第28-29页 |
| ·S 层的功能 | 第29-30页 |
| ·脂多糖 | 第30-31页 |
| ·4-型鞭毛 | 第31页 |
| ·转铁机制 | 第31页 |
| 8 感染 | 第31-32页 |
| 9 嗜水气单胞菌的诊断 | 第32-33页 |
| 10 嗜水气单胞菌鱼类免疫防治现状 | 第33-39页 |
| ·疫苗免疫 | 第33-39页 |
| ·全菌疫苗 | 第34-35页 |
| ·亚单位疫苗 | 第35-36页 |
| ·基因工程疫苗 | 第36-39页 |
| ·基因工程亚单位疫苗 | 第36-37页 |
| ·基因缺失苗或突变苗 | 第37页 |
| ·核酸疫苗 | 第37-39页 |
| 第二章 嗜水气单胞菌毒力与毒力基因的相关性 | 第39-46页 |
| 1 前言 | 第39-40页 |
| 2 材料和方法 | 第40-42页 |
| ·实验材料 | 第40页 |
| ·PCR 检测 | 第40-41页 |
| ·引物设计 | 第40页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第40-41页 |
| ·PCR 反应 | 第41页 |
| ·PCR 反应产物电泳、回收和测序 | 第41页 |
| ·不同A. hydrophila 菌株对鲫鱼的致病性 | 第41-42页 |
| ·细菌数的测定 | 第41页 |
| ·对鲫鱼的毒力试验 | 第41-42页 |
| 3 结果 | 第42页 |
| ·三种毒力基因PCR 扩增电泳结果 | 第42页 |
| ·序列测定 | 第42页 |
| ·对异育银鲫致死性 | 第42页 |
| 4 讨论 | 第42-46页 |
| 第三章 嗜水气单胞菌气溶素aerA 基因的分子克隆 | 第46-61页 |
| 1 前言 | 第46-47页 |
| 2 材料与方法 | 第47-49页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·基因组DNA 全长的获得 | 第47页 |
| ·染色体步行的方法获得气溶素基因（aerA）的全序列 | 第47-49页 |
| 3 结果 | 第49-51页 |
| ·aerA 基因的克隆 | 第49-50页 |
| ·aerA 基因的序列特点 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-61页 |
| 第四章 气溶素基因原核表达、活性检测及其应用的初步分析 | 第61-82页 |
| 1 前言 | 第61-62页 |
| 2 材料与方法 | 第62-69页 |
| ·主要仪器设备 | 第62-63页 |
| ·主要试剂 | 第63页 |
| ·表达载体的构建 | 第63-64页 |
| ·重组嗜水气单胞菌气溶素aerA 基因的诱导表达 | 第64页 |
| ·表达产物的鉴定 | 第64-66页 |
| ·亲和层析纯化表达的蛋白 | 第66-68页 |
| ·天然条件下纯化可溶性目的蛋白 | 第67页 |
| ·变性条件下纯化包涵体形式的目的蛋白 | 第67-68页 |
| ·重组气溶素蛋白的溶血活性的鉴定 | 第68页 |
| ·变性重组气溶素蛋白的复性 | 第68-69页 |
| ·变性条件下，重组蛋白AerA-W 在琼脂中的复性 | 第68-69页 |
| ·变性蛋白的透析复性 | 第69页 |
| ·活性检测 | 第69页 |
| ·应用重组气溶素蛋白分离血液中锥虫 | 第69页 |
| 3 结果 | 第69-71页 |
| ·嗜水气单胞菌aerA 基因在大肠杆菌中的表达及表达条件优化 | 第69-70页 |
| ·重组蛋白AerA-W 的变性及非变性条件下的纯化 | 第70页 |
| ·变性重组气溶素蛋白的复性 | 第70-71页 |
| ·应用重组气溶素蛋白分离血液中的锥虫 | 第71页 |
| 4 讨论 | 第71-82页 |
| ·用pET-32a 载体成功地表达了嗜水气单胞菌气溶素aerA 基因 | 第71-72页 |
| ·影响蛋白可溶性的因素 | 第72-74页 |
| ·合适的载体和宿主菌组合 | 第72-73页 |
| ·表达条件的优化 | 第73页 |
| ·与蛋白序列有关 | 第73-74页 |
| ·重组蛋白AerA-W 的溶血活性的检测 | 第74页 |
| ·重组蛋白AerA-W 包涵体复性的可行性分析 | 第74-75页 |
| ·重组气溶素蛋白成功地分离血液中的锥虫 | 第75-82页 |
| 第五章 嗜水气单胞菌气溶素蛋白抗原决定簇的分析 | 第82-95页 |
| 1 前言 | 第82-83页 |
| 2 材料和方法 | 第83-86页 |
| ·材料 | 第83页 |
| ·气溶素氨基酸序列分析 | 第83页 |
| ·表达载体的构建及鉴定 | 第83-84页 |
| ·重组载体的诱导表达 | 第84-85页 |
| ·表达产物的鉴定 | 第85页 |
| ·亲和层析纯化表达的重组蛋白 | 第85页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第85页 |
| ·Dot-blot 免疫印迹 | 第85-86页 |
| 3 结果 | 第86-93页 |
| ·气溶素氨基酸序列分析 | 第86-88页 |
| ·气溶素各部分在大肠杆菌中的表达及SDS-PAGE 分析 | 第88-90页 |
| ·天然条件或变性条件下AerA-A 和AerA-M 纯化 | 第90-92页 |
| ·Dot-blot 免疫印迹 | 第92-93页 |
| 4 讨论 | 第93-95页 |
| 第六章 基因工程疫苗的研究 | 第95-108页 |
| 第一节 气溶素基因工程亚单位疫苗 | 第95-101页 |
| 1 前言 | 第95-96页 |
| 2 材料和方法 | 第96-97页 |
| ·材料 | 第96页 |
| ·目的蛋白的切胶回收 | 第96页 |
| ·兔多克隆抗体的制备 | 第96页 |
| ·Western 免疫印迹Dot-blot 免疫印迹 | 第96-97页 |
| 3 结果与讨论 | 第97-101页 |
| 第二节 气溶素APT 区域核酸疫苗的构建及免疫 | 第101-108页 |
| 1 前言 | 第101-102页 |
| 2 材料和方法 | 第102-106页 |
| ·材料 | 第102页 |
| ·气溶素APT 区域核酸疫苗的构建 | 第102-104页 |
| ·质粒的大量提取及定量 | 第104页 |
| ·鱼类免疫接种 | 第104页 |
| ·ELISA 检测程序 | 第104页 |
| ·Western-blot 分析 | 第104-105页 |
| ·攻毒试验 | 第105-106页 |
| 3 结果与讨论 | 第106-108页 |
| 小结 | 第108-111页 |
| 参考文献 | 第111-128页 |
| 附录 | 第128-129页 |
| 致谢 | 第129-130页 |
