| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-34页 |
| 1.棉铃虫对拟除虫菊酯抗药性的研究 | 第11-15页 |
| ·棉铃虫对拟除虫菊酯抗性的发生 | 第11-12页 |
| ·棉铃虫对拟除虫菊酯的抗性机理 | 第12-15页 |
| 2.细胞色素P450氧化酶 | 第15-25页 |
| ·细胞色素P450的光谱特征 | 第16-17页 |
| ·细胞色素P450的保守结构区 | 第17-18页 |
| ·细胞色素P450的催化反应机理 | 第18-19页 |
| ·细胞色素P450基因 | 第19-22页 |
| ·细胞色素P450基因与昆虫抗药性的研究 | 第22-25页 |
| 3.实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR)技术 | 第25-30页 |
| ·荧光定量PCR的荧光化学方法 | 第25-27页 |
| ·荧光定量PCR的定量方法 | 第27-29页 |
| ·常用定量PCR仪 | 第29-30页 |
| 4.昆虫细胞色素P450基因的异源表达 | 第30-34页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第30页 |
| ·酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)表达系统 | 第30-32页 |
| ·杆状病毒介导的昆虫细胞表达系统 | 第32-33页 |
| ·转染动物细胞表达系统 | 第33-34页 |
| 第二章 棉铃虫细胞色素P450基因的克隆和序列分析 | 第34-52页 |
| 1.材料与方法 | 第35-41页 |
| ·供试昆虫 | 第35页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第35-36页 |
| ·总RNA提取和cDNA第一链的合成 | 第36-37页 |
| ·引物设计及细胞色素P450cDNA片段的PCR扩增、克隆、测序 | 第37-40页 |
| ·采用RACE策略克隆细胞色素P450基因全长 | 第40-41页 |
| ·设计编码区引物验证所得基因的完整性 | 第41页 |
| 2.结果与分析 | 第41-49页 |
| ·目标片段的获得 | 第41-42页 |
| ·目标条带的亚克隆 | 第42-43页 |
| ·RACE技术获得P450基因的序列全长 | 第43页 |
| ·设计编码区引物验证基因的准确性 | 第43-44页 |
| ·棉铃虫CYP6AE12和CYP9A18基因全序列分析 | 第44-49页 |
| 3.讨论 | 第49-52页 |
| ·棉铃虫细胞色素P450新基因片段的获得 | 第49页 |
| ·两个新P450基因序列分析 | 第49-52页 |
| 第三章 棉铃虫抗性品系和敏感品系P450基因mRNA水平的比较 | 第52-69页 |
| 1.实验材料与方法 | 第53-57页 |
| ·供试材料 | 第53-54页 |
| ·引物设计 | 第54页 |
| ·荧光定量PCR反应 | 第54-55页 |
| ·荧光定量PCR反应效率的测定 | 第55页 |
| ·细胞色素P450基因mRNA表达量的比较 | 第55-57页 |
| 2.结果与分析 | 第57-65页 |
| ·PCR产物熔解曲线和扩增效率一致性分析 | 第57-62页 |
| ·基因相对表达量的比较 | 第62-65页 |
| 3.讨论 | 第65-69页 |
| ·P450基因过量表达与昆虫抗药性的研究 | 第65-67页 |
| ·P450基因参与农药代谢的标准 | 第67-69页 |
| 第四章 棉铃虫P450基因酵母表达产物的代谢活性 | 第69-77页 |
| 1.材料与方法 | 第70-73页 |
| ·化学试剂 | 第70页 |
| ·棉铃虫CYP9A12、CYP9A14和CYP9A17V2的酵母转化 | 第70页 |
| ·PCR检测CYP9A12、CYP9A14和CYP9A17V2 mRNA在酵母诱导培养中的表达 | 第70-71页 |
| ·诱导外源基因表达 | 第71页 |
| ·酵母细胞反应酶液的提取 | 第71页 |
| ·酵母细胞酶液PNOD、ECOD、MCOD及MROD活性测定 | 第71-72页 |
| ·酵母表达外源基因产物对顺式氰戊菊酯的代谢 | 第72-73页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第73页 |
| ·数据统计分析 | 第73页 |
| 2.结果 | 第73-75页 |
| ·PCR检测外源P450基因在酵母中的表达 | 第73-74页 |
| ·重组酵母细胞色素P450氧化酶活性测定 | 第74页 |
| ·酵母表达外源基因产物对顺式氰戊菊酯的代谢 | 第74-75页 |
| 3.讨论 | 第75-77页 |
| 全文总结 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-88页 |
| 附录:攻读学位期间发表的学术论文 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
