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类整合素蛋白与微管蛋白在植物响应渗透胁迫中的作用

中文摘要第1-7页
英文摘要第7-19页
中英文对照词第19-21页
第1章 文献综述第21-52页
   ·整合素(Integrins)第22-27页
     ·整合素蛋白的结构第22-24页
     ·整合素蛋白的活化机制与功能第24-27页
     ·整合素蛋白编码基因的克隆第27页
   ·植物类整合素蛋白的研究进展第27-32页
     ·植物类整合素蛋白的检测第27-29页
     ·植物类整合素蛋白的定位第29页
     ·植物类整合素蛋白的功能第29-30页
     ·植物类整合素蛋白的研究展望第30-32页
   ·植物细胞细胞壁-质膜-细胞骨架连续体及其可能生理功能第32-43页
     ·细胞壁的结构与功能第32-34页
     ·细胞骨架的结构与功能第34-43页
       ·细胞骨架的结构第34-39页
         ·微管的结构第36-37页
         ·微丝的结构第37-39页
       ·细胞骨架的功能第39-41页
         ·微管的功能第40-41页
         ·微丝的功能第41页
       ·植物细胞骨架(主要是微管与微丝)与渗透胁迫应答第41-43页
 参考文献第43-52页
第2章 植物类整合素蛋白的检测、定位与功能研究第52-70页
   ·引言第52-53页
   ·材料与方法第53-57页
     ·植物材料第53页
     ·细胞膜蛋白的提取第53-54页
     ·蛋白质浓度测定及SDS-PAGE第54页
     ·Western blotting第54-55页
     ·间接免疫荧光定位第55页
     ·拟南芥悬浮细胞原生质体制备第55-56页
     ·试验处理第56页
     ·内源ABA 含量的测定第56页
     ·光学显微观察第56页
     ·拟南芥细胞质壁分离测定方法第56-57页
   ·结果与分析第57-64页
     ·拟南芥悬浮细胞和玉米根细胞中类整合素蛋白的免疫印迹分析第57-59页
     ·拟南芥悬浮细胞和玉米根细胞中类整合素蛋白的荧光定位第59-60页
     ·类整合素蛋白参与细胞壁与细胞膜之间的粘连作用的药理学研究第60-62页
     ·原生质体与细胞在渗透胁迫条件下ABA 合成的差异第62-64页
   ·讨论第64-66页
 参考文献第66-70页
第3章 植物类整合素蛋白与α-微管蛋白的荧光共定位及其可能的相互作用研究第70-81页
   ·引言第70-71页
   ·材料与方法第71-72页
     ·植物材料第71页
     ·试验处理第71-72页
       ·玉米幼苗处理第71-72页
       ·拟南芥悬浮细胞处理第72页
     ·间接免疫荧光定位第72页
   ·结果与分析第72-78页
     ·玉米根细胞中类整合素蛋白与α-微管蛋白的荧光共定位第72-73页
     ·植物类整合素蛋白与α-微管蛋白可能的相互作用的研究第73-78页
       ·类整合素蛋白和微管相关物质对拟南芥悬浮细胞α-微管蛋白的影响第73-75页
       ·类整合素蛋白和细胞骨架相关物质对玉米根细胞中类整合素蛋白和α-微管蛋白的影响第75-78页
   ·讨论第78-79页
 参考文献第79-81页
第4章 拟南芥编码类似整合素蛋白基因(At14a)的克隆与表达第81-102页
   ·引言第81-82页
   ·材料与方法第82-89页
     ·材料第82-84页
       ·植物材料第82页
       ·质粒与细菌菌株第82-83页
       ·化学试剂(盒)第83页
       ·培养基与主要试剂的配制第83页
       ·主要仪器第83-84页
     ·方法第84-89页
       ·拟南芥编码At14基因的T/A克隆第84-85页
         ·引物的设计第84页
         ·拟南芥叶片总RNA的提取第84页
         ·第一链cDNA 的合成第84页
         ·At14a 序列的PCR 扩增第84页
         ·PCR 产物的回收第84页
         ·目的片段与克隆载体的连接第84-85页
         ·大肠杆菌感受态的制备与重组质粒的转化第85页
         ·阳性克隆的筛选第85页
         ·阳性克隆的PCR 鉴定第85页
         ·重组质粒的核苷酸序列测定第85页
       ·拟南芥编码At14a 基因的TOPO 克隆第85-86页
         ·引物的设计第85页
         ·拟南芥叶片总RNA 的提取、第一链cDNA 的合成、At14a 序列的PCR 扩增第85-86页
         ·PCR 产物的克隆第86页
         ·阳性克隆的PCR 鉴定第86页
         ·重组质粒的核苷酸序列测定第86页
       ·转At14a-GFP 融合基因的双元载体的构建第86-87页
         ·重组质粒与表达载体质粒的小量提取第86页
         ·转At14a-GFP 融合基因的双元载体的构建第86页
         ·农杆菌阳性克隆的目的基因序列的PCR 鉴定第86-87页
         ·农杆菌阳性克隆的GFP 基因序列的PCR 鉴定第87页
       ·At14a-GFP 融合基因的原生质体瞬时表达第87页
         ·玉米根细胞原生质体的分离第87页
         ·At14a-GFP 融合基因的原生质体瞬时表达第87页
       ·根癌农杆菌介导法培育At14a 基因过表达的转基因拟南芥第87-88页
         ·野生型拟南芥植株的种植第87-88页
         ·根癌农杆菌的培养及其介导的拟南芥转化第88页
         ·转At14a-GFP 融合基因拟南芥种子的抗性筛选第88页
         ·转At14a-GFP 融合基因拟南芥中GFP 的组织学定位第88页
         ·转At14a-GFP融合基因拟南芥中总DNA的PCR分析第88页
       ·转At14a-GFP 基因拟南芥悬浮细胞体系的培育与鉴定第88-89页
         ·转At14a-GFP 基因拟南芥悬浮细胞体系的培育第88-89页
         ·转At14a-GFP基因拟南芥悬浮细胞中总DNA的PCR分析第89页
         ·转At14a-GFP 基因拟南芥悬浮细胞中GFP 表达的细胞学定位第89页
   ·结果与分析第89-100页
     ·拟南芥叶片总RNA 的提取第89-90页
     ·拟南芥叶片第一链cDNA 的合成第90页
     ·拟南芥At14a 序列的PCR 扩增第90-91页
       ·拟南芥At14a 序列TA 克隆的PCR 扩增第90-91页
       ·拟南芥At14a 序列TOPO 克隆的PCR 扩增第91页
     ·拟南芥At14a 序列的克隆与鉴定第91-92页
       ·拟南芥At14a 序列的TA 克隆与鉴定第91-92页
       ·拟南芥At14a 序列的TOPO 克隆与鉴定第92页
     ·拟南芥编码类似整合素蛋白基因(At14a)的序列分析第92-96页
       ·拟南芥At14a 序列的TA 克隆结果的序列分析第92-94页
       ·拟南芥At14a 序列的TOPO 克隆结果的序列分析第94-96页
     ·拟南芥编码At14a-GFP 融合基因的构建第96-97页
     ·转At14a-GFP 融合基因的双元载体的农杆菌阳性克隆的鉴定第97-98页
     ·编码At14a-GFP 融合基因的原生质体的瞬时表达第98页
     ·转At14a-GFP 融合基因的拟南芥植株的获得与鉴定第98-99页
     ·转At14a-GFP基因拟南芥悬浮细胞中GFP表达的细胞学定位第99-100页
   ·讨论第100页
 参考文献第100-102页
第5章 拟南芥编码α-微管蛋白基因(TUA2)的克隆与表达第102-114页
   ·引言第102页
   ·材料与方法第102-106页
     ·材料第102-103页
       ·植物材料第102页
       ·质粒与细菌菌株第102-103页
       ·化学试剂(盒)第103页
       ·培养基与主要试剂的配制第103页
       ·主要仪器第103页
     ·方法第103-106页
       ·拟南芥编码TUA2基因的TOPO克隆第103-104页
         ·引物的设计第103页
         ·拟南芥叶片总RNA 的提取和第一链cDNA 的合成第103页
         ·TUA2 序列的PCR 扩增第103页
         ·PCR 产物的克隆第103-104页
         ·阳性克隆的PCR 鉴定第104页
         ·重组质粒的核苷酸序列测定第104页
       ·转TUA2-GFP 融合基因的双元载体的构建第104-105页
         ·重组质粒与表达载体质粒的小量提取第104页
         ·转TUA2-GFP 融合基因的双元载体的构建第104页
         ·农杆菌阳性克隆的目的基因序列的PCR 鉴定第104页
         ·农杆菌阳性克隆的GFP 基因序列的PCR 鉴定第104-105页
       ·根癌农杆菌介导法培育TUA2 基因过表达的转基因拟南芥第105页
         ·野生型拟南芥植株的种植第105页
         ·根癌农杆菌的培养及其介导的拟南芥转化第105页
         ·转TUA2-GFP 融合基因拟南芥种子的抗性筛选第105页
         ·转TUA2-GFP 融合基因拟南芥中GFP 表达的组织学定位第105页
         ·转TUA2-GFP 融合基因拟南芥中总DNA 的PCR 分析第105页
         ·转TUA2-GFP 融合基因拟南芥的表型分析第105页
       ·转TUA2-GFP 基因拟南芥悬浮细胞体系的培育与鉴定第105-106页
         ·转TUA2-GFP 基因拟南芥悬浮细胞体系的培育第105-106页
         ·转TUA2-GFP基因拟南芥悬浮细胞中总DNA的PCR分析第106页
         ·转TUA2-GFP 基因拟南芥悬浮细胞中GFP 表达的细胞学定位第106页
   ·结果与分析第106-113页
     ·拟南芥叶片总RNA 的提取与拟南芥叶片第一链cDNA 的合成第106页
     ·拟南芥TUA2 序列TOPO 克隆的PCR 扩增第106-107页
     ·拟南芥TUA2 序列的TOPO 克隆与鉴定第107页
     ·拟南芥编码α-微管蛋白基因(TUA2)的序列分析第107-108页
     ·拟南芥编码TUA2-GFP 融合基因的构建第108-109页
     ·转TUA2-GFP 融合基因的双元载体的农杆菌阳性克隆的鉴定第109-110页
     ·转TUA2-GFP 融合基因的拟南芥植株的获得与鉴定第110-111页
     ·转TUA2-GFP融合基因的拟南芥植株的表型分析第111-112页
     ·转TUA2-GFP 基因拟南芥悬浮细胞中GFP 表达的细胞学定位第112-113页
   ·讨论第113-114页
第6章 微管在植物响应干旱胁迫中的作用第114-126页
   ·引言第114页
   ·材料与方法第114-117页
     ·试验材料第114-115页
     ·微管的间接免疫荧光定位第115页
     ·内源ABA 含量的测定第115页
     ·逆转录PCR 反应(RT-PCR)第115-116页
       ·化学试剂(盒)第115页
       ·引物的设计第115-116页
       ·玉米根系总RNA 的提取第116页
       ·第一链cDNA 的合成第116页
       ·VP14 序列的PCR 扩增第116页
     ·试验处理第116-117页
   ·结果与分析第117-123页
     ·不同处理玉米根细胞中微管列阵的变化第117页
     ·干旱胁迫对玉米根细胞中微管与ABA 含量的影响第117-120页
     ·微管在干旱胁迫诱导玉米根细胞合成ABA 过程中的作用第120-123页
   ·讨论第123-124页
 参考文献第124-126页
第7章 编码类整合素基因(At14α)在拟南芥响应干旱胁迫中的生理功能分析第126-133页
   ·引言第126页
   ·材料与方法第126-128页
     ·植物材料第126-127页
     ·纯合突变体at14α的鉴定第127页
     ·试验处理第127页
     ·气孔导度的测定第127页
     ·叶片水势的测定第127页
     ·土壤含水量的测定第127-128页
     ·叶片内源ABA 含量的测定第128页
   ·结果与分析第128-132页
     ·拟南芥纯合突变体at14α的鉴定第128页
     ·三基因型拟南芥响应干旱胁迫的形态学变化第128-129页
     ·干旱处理对三基因型拟南芥叶片气孔导度的影响第129-130页
     ·干旱处理对三基因型拟南芥叶片水势的影响第130-131页
     ·干旱处理对土壤含水量的影响第131页
     ·干旱处理对三基因型拟南芥叶片ABA 含量的影响第131-132页
   ·讨论第132-133页
第8 章总结与讨论第133-136页
附表第136-140页
 附表1 拟南芥悬浮细胞培养基配方第136-137页
 附录2 玉米幼苗水培培养液配方第137-138页
 附表3 植物激素ELISA 操作第138-140页
致谢第140-141页
攻读学位期间发表的学术论文目录第141页

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