中文摘要 | 第1-7页 |
英文摘要 | 第7-19页 |
中英文对照词 | 第19-21页 |
第1章 文献综述 | 第21-52页 |
·整合素(Integrins) | 第22-27页 |
·整合素蛋白的结构 | 第22-24页 |
·整合素蛋白的活化机制与功能 | 第24-27页 |
·整合素蛋白编码基因的克隆 | 第27页 |
·植物类整合素蛋白的研究进展 | 第27-32页 |
·植物类整合素蛋白的检测 | 第27-29页 |
·植物类整合素蛋白的定位 | 第29页 |
·植物类整合素蛋白的功能 | 第29-30页 |
·植物类整合素蛋白的研究展望 | 第30-32页 |
·植物细胞细胞壁-质膜-细胞骨架连续体及其可能生理功能 | 第32-43页 |
·细胞壁的结构与功能 | 第32-34页 |
·细胞骨架的结构与功能 | 第34-43页 |
·细胞骨架的结构 | 第34-39页 |
·微管的结构 | 第36-37页 |
·微丝的结构 | 第37-39页 |
·细胞骨架的功能 | 第39-41页 |
·微管的功能 | 第40-41页 |
·微丝的功能 | 第41页 |
·植物细胞骨架(主要是微管与微丝)与渗透胁迫应答 | 第41-43页 |
参考文献 | 第43-52页 |
第2章 植物类整合素蛋白的检测、定位与功能研究 | 第52-70页 |
·引言 | 第52-53页 |
·材料与方法 | 第53-57页 |
·植物材料 | 第53页 |
·细胞膜蛋白的提取 | 第53-54页 |
·蛋白质浓度测定及SDS-PAGE | 第54页 |
·Western blotting | 第54-55页 |
·间接免疫荧光定位 | 第55页 |
·拟南芥悬浮细胞原生质体制备 | 第55-56页 |
·试验处理 | 第56页 |
·内源ABA 含量的测定 | 第56页 |
·光学显微观察 | 第56页 |
·拟南芥细胞质壁分离测定方法 | 第56-57页 |
·结果与分析 | 第57-64页 |
·拟南芥悬浮细胞和玉米根细胞中类整合素蛋白的免疫印迹分析 | 第57-59页 |
·拟南芥悬浮细胞和玉米根细胞中类整合素蛋白的荧光定位 | 第59-60页 |
·类整合素蛋白参与细胞壁与细胞膜之间的粘连作用的药理学研究 | 第60-62页 |
·原生质体与细胞在渗透胁迫条件下ABA 合成的差异 | 第62-64页 |
·讨论 | 第64-66页 |
参考文献 | 第66-70页 |
第3章 植物类整合素蛋白与α-微管蛋白的荧光共定位及其可能的相互作用研究 | 第70-81页 |
·引言 | 第70-71页 |
·材料与方法 | 第71-72页 |
·植物材料 | 第71页 |
·试验处理 | 第71-72页 |
·玉米幼苗处理 | 第71-72页 |
·拟南芥悬浮细胞处理 | 第72页 |
·间接免疫荧光定位 | 第72页 |
·结果与分析 | 第72-78页 |
·玉米根细胞中类整合素蛋白与α-微管蛋白的荧光共定位 | 第72-73页 |
·植物类整合素蛋白与α-微管蛋白可能的相互作用的研究 | 第73-78页 |
·类整合素蛋白和微管相关物质对拟南芥悬浮细胞α-微管蛋白的影响 | 第73-75页 |
·类整合素蛋白和细胞骨架相关物质对玉米根细胞中类整合素蛋白和α-微管蛋白的影响 | 第75-78页 |
·讨论 | 第78-79页 |
参考文献 | 第79-81页 |
第4章 拟南芥编码类似整合素蛋白基因(At14a)的克隆与表达 | 第81-102页 |
·引言 | 第81-82页 |
·材料与方法 | 第82-89页 |
·材料 | 第82-84页 |
·植物材料 | 第82页 |
·质粒与细菌菌株 | 第82-83页 |
·化学试剂(盒) | 第83页 |
·培养基与主要试剂的配制 | 第83页 |
·主要仪器 | 第83-84页 |
·方法 | 第84-89页 |
·拟南芥编码At14基因的T/A克隆 | 第84-85页 |
·引物的设计 | 第84页 |
·拟南芥叶片总RNA的提取 | 第84页 |
·第一链cDNA 的合成 | 第84页 |
·At14a 序列的PCR 扩增 | 第84页 |
·PCR 产物的回收 | 第84页 |
·目的片段与克隆载体的连接 | 第84-85页 |
·大肠杆菌感受态的制备与重组质粒的转化 | 第85页 |
·阳性克隆的筛选 | 第85页 |
·阳性克隆的PCR 鉴定 | 第85页 |
·重组质粒的核苷酸序列测定 | 第85页 |
·拟南芥编码At14a 基因的TOPO 克隆 | 第85-86页 |
·引物的设计 | 第85页 |
·拟南芥叶片总RNA 的提取、第一链cDNA 的合成、At14a 序列的PCR 扩增 | 第85-86页 |
·PCR 产物的克隆 | 第86页 |
·阳性克隆的PCR 鉴定 | 第86页 |
·重组质粒的核苷酸序列测定 | 第86页 |
·转At14a-GFP 融合基因的双元载体的构建 | 第86-87页 |
·重组质粒与表达载体质粒的小量提取 | 第86页 |
·转At14a-GFP 融合基因的双元载体的构建 | 第86页 |
·农杆菌阳性克隆的目的基因序列的PCR 鉴定 | 第86-87页 |
·农杆菌阳性克隆的GFP 基因序列的PCR 鉴定 | 第87页 |
·At14a-GFP 融合基因的原生质体瞬时表达 | 第87页 |
·玉米根细胞原生质体的分离 | 第87页 |
·At14a-GFP 融合基因的原生质体瞬时表达 | 第87页 |
·根癌农杆菌介导法培育At14a 基因过表达的转基因拟南芥 | 第87-88页 |
·野生型拟南芥植株的种植 | 第87-88页 |
·根癌农杆菌的培养及其介导的拟南芥转化 | 第88页 |
·转At14a-GFP 融合基因拟南芥种子的抗性筛选 | 第88页 |
·转At14a-GFP 融合基因拟南芥中GFP 的组织学定位 | 第88页 |
·转At14a-GFP融合基因拟南芥中总DNA的PCR分析 | 第88页 |
·转At14a-GFP 基因拟南芥悬浮细胞体系的培育与鉴定 | 第88-89页 |
·转At14a-GFP 基因拟南芥悬浮细胞体系的培育 | 第88-89页 |
·转At14a-GFP基因拟南芥悬浮细胞中总DNA的PCR分析 | 第89页 |
·转At14a-GFP 基因拟南芥悬浮细胞中GFP 表达的细胞学定位 | 第89页 |
·结果与分析 | 第89-100页 |
·拟南芥叶片总RNA 的提取 | 第89-90页 |
·拟南芥叶片第一链cDNA 的合成 | 第90页 |
·拟南芥At14a 序列的PCR 扩增 | 第90-91页 |
·拟南芥At14a 序列TA 克隆的PCR 扩增 | 第90-91页 |
·拟南芥At14a 序列TOPO 克隆的PCR 扩增 | 第91页 |
·拟南芥At14a 序列的克隆与鉴定 | 第91-92页 |
·拟南芥At14a 序列的TA 克隆与鉴定 | 第91-92页 |
·拟南芥At14a 序列的TOPO 克隆与鉴定 | 第92页 |
·拟南芥编码类似整合素蛋白基因(At14a)的序列分析 | 第92-96页 |
·拟南芥At14a 序列的TA 克隆结果的序列分析 | 第92-94页 |
·拟南芥At14a 序列的TOPO 克隆结果的序列分析 | 第94-96页 |
·拟南芥编码At14a-GFP 融合基因的构建 | 第96-97页 |
·转At14a-GFP 融合基因的双元载体的农杆菌阳性克隆的鉴定 | 第97-98页 |
·编码At14a-GFP 融合基因的原生质体的瞬时表达 | 第98页 |
·转At14a-GFP 融合基因的拟南芥植株的获得与鉴定 | 第98-99页 |
·转At14a-GFP基因拟南芥悬浮细胞中GFP表达的细胞学定位 | 第99-100页 |
·讨论 | 第100页 |
参考文献 | 第100-102页 |
第5章 拟南芥编码α-微管蛋白基因(TUA2)的克隆与表达 | 第102-114页 |
·引言 | 第102页 |
·材料与方法 | 第102-106页 |
·材料 | 第102-103页 |
·植物材料 | 第102页 |
·质粒与细菌菌株 | 第102-103页 |
·化学试剂(盒) | 第103页 |
·培养基与主要试剂的配制 | 第103页 |
·主要仪器 | 第103页 |
·方法 | 第103-106页 |
·拟南芥编码TUA2基因的TOPO克隆 | 第103-104页 |
·引物的设计 | 第103页 |
·拟南芥叶片总RNA 的提取和第一链cDNA 的合成 | 第103页 |
·TUA2 序列的PCR 扩增 | 第103页 |
·PCR 产物的克隆 | 第103-104页 |
·阳性克隆的PCR 鉴定 | 第104页 |
·重组质粒的核苷酸序列测定 | 第104页 |
·转TUA2-GFP 融合基因的双元载体的构建 | 第104-105页 |
·重组质粒与表达载体质粒的小量提取 | 第104页 |
·转TUA2-GFP 融合基因的双元载体的构建 | 第104页 |
·农杆菌阳性克隆的目的基因序列的PCR 鉴定 | 第104页 |
·农杆菌阳性克隆的GFP 基因序列的PCR 鉴定 | 第104-105页 |
·根癌农杆菌介导法培育TUA2 基因过表达的转基因拟南芥 | 第105页 |
·野生型拟南芥植株的种植 | 第105页 |
·根癌农杆菌的培养及其介导的拟南芥转化 | 第105页 |
·转TUA2-GFP 融合基因拟南芥种子的抗性筛选 | 第105页 |
·转TUA2-GFP 融合基因拟南芥中GFP 表达的组织学定位 | 第105页 |
·转TUA2-GFP 融合基因拟南芥中总DNA 的PCR 分析 | 第105页 |
·转TUA2-GFP 融合基因拟南芥的表型分析 | 第105页 |
·转TUA2-GFP 基因拟南芥悬浮细胞体系的培育与鉴定 | 第105-106页 |
·转TUA2-GFP 基因拟南芥悬浮细胞体系的培育 | 第105-106页 |
·转TUA2-GFP基因拟南芥悬浮细胞中总DNA的PCR分析 | 第106页 |
·转TUA2-GFP 基因拟南芥悬浮细胞中GFP 表达的细胞学定位 | 第106页 |
·结果与分析 | 第106-113页 |
·拟南芥叶片总RNA 的提取与拟南芥叶片第一链cDNA 的合成 | 第106页 |
·拟南芥TUA2 序列TOPO 克隆的PCR 扩增 | 第106-107页 |
·拟南芥TUA2 序列的TOPO 克隆与鉴定 | 第107页 |
·拟南芥编码α-微管蛋白基因(TUA2)的序列分析 | 第107-108页 |
·拟南芥编码TUA2-GFP 融合基因的构建 | 第108-109页 |
·转TUA2-GFP 融合基因的双元载体的农杆菌阳性克隆的鉴定 | 第109-110页 |
·转TUA2-GFP 融合基因的拟南芥植株的获得与鉴定 | 第110-111页 |
·转TUA2-GFP融合基因的拟南芥植株的表型分析 | 第111-112页 |
·转TUA2-GFP 基因拟南芥悬浮细胞中GFP 表达的细胞学定位 | 第112-113页 |
·讨论 | 第113-114页 |
第6章 微管在植物响应干旱胁迫中的作用 | 第114-126页 |
·引言 | 第114页 |
·材料与方法 | 第114-117页 |
·试验材料 | 第114-115页 |
·微管的间接免疫荧光定位 | 第115页 |
·内源ABA 含量的测定 | 第115页 |
·逆转录PCR 反应(RT-PCR) | 第115-116页 |
·化学试剂(盒) | 第115页 |
·引物的设计 | 第115-116页 |
·玉米根系总RNA 的提取 | 第116页 |
·第一链cDNA 的合成 | 第116页 |
·VP14 序列的PCR 扩增 | 第116页 |
·试验处理 | 第116-117页 |
·结果与分析 | 第117-123页 |
·不同处理玉米根细胞中微管列阵的变化 | 第117页 |
·干旱胁迫对玉米根细胞中微管与ABA 含量的影响 | 第117-120页 |
·微管在干旱胁迫诱导玉米根细胞合成ABA 过程中的作用 | 第120-123页 |
·讨论 | 第123-124页 |
参考文献 | 第124-126页 |
第7章 编码类整合素基因(At14α)在拟南芥响应干旱胁迫中的生理功能分析 | 第126-133页 |
·引言 | 第126页 |
·材料与方法 | 第126-128页 |
·植物材料 | 第126-127页 |
·纯合突变体at14α的鉴定 | 第127页 |
·试验处理 | 第127页 |
·气孔导度的测定 | 第127页 |
·叶片水势的测定 | 第127页 |
·土壤含水量的测定 | 第127-128页 |
·叶片内源ABA 含量的测定 | 第128页 |
·结果与分析 | 第128-132页 |
·拟南芥纯合突变体at14α的鉴定 | 第128页 |
·三基因型拟南芥响应干旱胁迫的形态学变化 | 第128-129页 |
·干旱处理对三基因型拟南芥叶片气孔导度的影响 | 第129-130页 |
·干旱处理对三基因型拟南芥叶片水势的影响 | 第130-131页 |
·干旱处理对土壤含水量的影响 | 第131页 |
·干旱处理对三基因型拟南芥叶片ABA 含量的影响 | 第131-132页 |
·讨论 | 第132-133页 |
第8 章总结与讨论 | 第133-136页 |
附表 | 第136-140页 |
附表1 拟南芥悬浮细胞培养基配方 | 第136-137页 |
附录2 玉米幼苗水培培养液配方 | 第137-138页 |
附表3 植物激素ELISA 操作 | 第138-140页 |
致谢 | 第140-141页 |
攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第141页 |