| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一部分 文献综述及选题目的意义 | 第12-22页 |
| 1 病原学 | 第12-14页 |
| ·病毒分类 | 第12页 |
| ·理化特性 | 第12-13页 |
| ·核酸与蛋白 | 第13-14页 |
| 2 病毒的复制、增殖 | 第14-15页 |
| ·病毒的吸附与穿入 | 第14页 |
| ·RNA基因组的反转录 | 第14页 |
| ·整合 | 第14-15页 |
| ·转录、翻译 | 第15页 |
| ·装配与释放 | 第15页 |
| 3 流行病学 | 第15-16页 |
| ·宿主 | 第15页 |
| ·传播方式及途径 | 第15-16页 |
| 4 临床症状及病理变化 | 第16-18页 |
| ·急、慢性肿瘤的形成 | 第16页 |
| ·矮小综合征 | 第16-17页 |
| ·腺胃炎 | 第17页 |
| ·免疫抑制 | 第17-18页 |
| 5 诊断研究进展 | 第18-20页 |
| ·临床诊断 | 第18页 |
| ·病毒的分离 | 第18页 |
| ·间接免疫荧光试验(IFA) | 第18-19页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第19页 |
| ·ELISA检测方法 | 第19-20页 |
| ·其他检测方法 | 第20页 |
| 6 REV的防治 | 第20-21页 |
| 7 选题目的及意义 | 第21-22页 |
| 第二部分 试验研究 | 第22-59页 |
| 第一章 网状内组织增生症病毒囊膜基因gp90的克隆测序 | 第22-37页 |
| 1 试验材料与设备 | 第22-23页 |
| ·试验材料 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·主要培养基和试剂的制备 | 第22-23页 |
| 2 试验方法 | 第23-29页 |
| ·引物设计及合成 | 第23-24页 |
| ·感染REV的脾脏细胞总DNA的提取 | 第24页 |
| ·gp90基因的扩增与纯化回收 | 第24-29页 |
| ·目的基因的扩增 | 第24页 |
| ·凝胶电泳检测PCR产物 | 第24-25页 |
| ·目的基因的纯化回收 | 第25页 |
| ·大肠杆菌DH5 α感受态细胞制备 | 第25-26页 |
| ·目的基因的连接 | 第26页 |
| ·转化 | 第26页 |
| ·重组克隆的鉴定 | 第26-28页 |
| ·gp90基因序列测定及序列分析 | 第28-29页 |
| 3 试验结果 | 第29-35页 |
| ·gp90基因的扩增 | 第29页 |
| ·重组克隆质粒的筛选与鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组质粒测序结果及分析 | 第30-34页 |
| ·进化树构建 | 第34-35页 |
| 4. 讨论 | 第35-36页 |
| ·引物的设计及PCR扩增 | 第35页 |
| ·gp90基因克隆测序分析 | 第35-36页 |
| 5 结论 | 第36-37页 |
| 第二章 禽网状内皮组织增生症病毒囊膜基因gp90的原核表达以及间接ELISA方法的初步建立 | 第37-59页 |
| 1 试验材料与设备 | 第37-39页 |
| ·试验材料 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·主要溶液及试剂的配置 | 第37-39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| 2 试验方法 | 第39-46页 |
| ·gp90基因片段原核表达重组质粒的构建 | 第39-40页 |
| ·菌种复苏培养 | 第39页 |
| ·质粒抽提和大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞制备 | 第39页 |
| ·质粒载体pMD-19T-gp90与pET-32a(+)的酶切回收 | 第39页 |
| ·原核表达载体pET-32a(+)-gp90的构建 | 第39-40页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞 | 第40页 |
| ·重组原核表达质粒的鉴定 | 第40-41页 |
| ·菌落PCR | 第40页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组表达质粒pET-32a(+)-gp90的诱导表达 | 第41-45页 |
| ·最佳诱导条件的选择 | 第41-42页 |
| ·重组菌的大规模诱导表达 | 第42页 |
| ·表达产物的鉴定 | 第42-44页 |
| ·表达产物的初步纯化 | 第44-45页 |
| ·间接ELISA检测方法的建立 | 第45-46页 |
| ·方阵滴定试验确定最佳抗原、一抗工作浓度 | 第45页 |
| ·临界值的确定 | 第45-46页 |
| ·特异性试验 | 第46页 |
| ·敏感性试验 | 第46页 |
| ·稳定性试验 | 第46页 |
| 3 试验结果 | 第46-55页 |
| ·gp90基因原核表达载体的构建 | 第46-47页 |
| ·重组原核表达质粒测序 | 第47页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第47-52页 |
| ·pE-32a(+)-gp90质粒IPTG最佳诱导浓度的确定 | 第47-48页 |
| ·pET-32a(+)-gp90质粒诱导表达时间的优化 | 第48-49页 |
| ·pET-32a(+)-gp90质粒诱导温度的选择 | 第49-50页 |
| ·表达产物的可溶性及纯化效果分析 | 第50-51页 |
| ·Western-blot分析 | 第51-52页 |
| ·间接ELISA检测方法的建立 | 第52-55页 |
| ·最佳抗原抗体工作浓度的确定 | 第52-53页 |
| ·临界值的确定 | 第53页 |
| ·特异性试验 | 第53-54页 |
| ·敏感性试验 | 第54页 |
| ·稳定性试验 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-58页 |
| ·表达载体pET-32a(+)和宿主菌BL21(DE3)的选择 | 第55-56页 |
| ·原核表达载体的构建和鉴定 | 第56-57页 |
| ·重组质粒的诱导表达和蛋白纯化 | 第57页 |
| ·重组质粒表达条件的优化 | 第57页 |
| ·蛋白质的纯化 | 第57页 |
| ·ELISA检测方法的建立 | 第57-58页 |
| 5 小结 | 第58页 |
| 6 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
