| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 中英文缩写 | 第7-10页 |
| 1. 绪论 | 第10-26页 |
| ·前言 | 第10-11页 |
| ·文献综述 | 第11-23页 |
| ·抗菌肽研究进展 | 第11-16页 |
| ·防御素研究进展 | 第16-19页 |
| ·菌丝霉素Plectasin的研究进展 | 第19-23页 |
| ·立题依据 | 第23-24页 |
| ·研究目标和内容 | 第24-25页 |
| ·研究目标 | 第24页 |
| ·研究内容 | 第24-25页 |
| ·技术路线 | 第25-26页 |
| 2. 材料与方法 | 第26-44页 |
| ·材料和仪器 | 第26-29页 |
| ·材料 | 第26页 |
| ·试剂 | 第26页 |
| ·培养基 | 第26-27页 |
| ·主要溶液及缓冲液的配制 | 第27-29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-44页 |
| ·Plectasin基因的合成及相关引物的设计 | 第29-30页 |
| ·Rosetta(DE3)/pET-32a(+)-Plectasin融合表达系统的构建 | 第30-34页 |
| ·重组Plectasin基因的转化与表达 | 第34-37页 |
| ·可溶性重组蛋白的分离与纯化 | 第37-40页 |
| ·融合蛋白的蛋白酶切反应 | 第40-41页 |
| ·金属螯合亲和层析精纯菌丝霉素 | 第41-42页 |
| ·SDS-PAGE电泳和Tricine-SDS-PAGE电泳 | 第42-43页 |
| ·菌丝霉素肽段的活性检测 | 第43-44页 |
| 3. 实验结果与分析 | 第44-56页 |
| ·含菌丝霉素基因片段的合成与克隆 | 第44页 |
| ·含酶切位点Plectasin基因片段的扩增 | 第44-45页 |
| ·pET-32a(+)质粒的双酶切 | 第45页 |
| ·pET-32a(+)-Plectasin表达载体构建与克隆菌株转化分析 | 第45-47页 |
| ·PCR检测转化子 | 第47页 |
| ·Plectasin融合基因在Rosetta(DE3)中的表达 | 第47-48页 |
| ·重组Trx-Plectasin融合基因在大肠杆菌不同表达株系中表达量的分析 | 第48-49页 |
| ·诱导温度对融合蛋白表达形式的影响及融合蛋白的可溶性分析 | 第49-51页 |
| ·Trx-Plectasin融合蛋白的亲和纯化 | 第51-52页 |
| ·不同亲和树脂对蛋白质纯化的影响 | 第52-53页 |
| ·融合蛋白的酶切反应及Tricine-SDS-PAGE检测 | 第53-54页 |
| ·牛津杯法测定重组Plectasin的抑菌活性 | 第54-56页 |
| 4. 讨论 | 第56-62页 |
| ·菌丝霉素基因在大肠杆菌Rosetta(DE3)中的高效表达 | 第56-57页 |
| ·大肠杆菌中融合表达有利于重组蛋白的正确折叠 | 第57-58页 |
| ·低温诱导提高了菌丝霉素以可溶性蛋白形式产生的比例 | 第58-59页 |
| ·合理的优化条件是实现融合蛋白高质量纯化的保证 | 第59-60页 |
| ·金属螯合亲和树脂的选择与融合蛋白纯度、产量密切相关 | 第60-62页 |
| 5. 结论与展望 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 附录一 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
