| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| ·心脑血管疾病 | 第11页 |
| ·丹参及丹参酮综述 | 第11-13页 |
| ·丹参综述 | 第11页 |
| ·丹参酮及其药用功能 | 第11-13页 |
| ·丹参酮药源紧缺性 | 第13页 |
| ·丹参毛状根的研究进展 | 第13-14页 |
| ·毛状根技术的诞生及其应用 | 第13页 |
| ·丹参毛状根培养体系的建立 | 第13页 |
| ·诱导子处理对丹参毛状根中丹参酮含量的影响 | 第13-14页 |
| ·丹参酮生物合成途径及其关键酶基因的克隆 | 第14-19页 |
| ·丹参酮生物合成途径 | 第14-17页 |
| ·丹参酮生物合成途径上关键酶基因的克隆 | 第17-19页 |
| ·植物次生代谢工程 | 第19-20页 |
| ·生物碱类 | 第19页 |
| ·黄酮类 | 第19-20页 |
| ·萜类 | 第20页 |
| ·本课题研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-38页 |
| ·实验材料 | 第21-23页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·质粒及菌种 | 第21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21-22页 |
| ·购买的制剂及药品等 | 第22页 |
| ·实验室常用溶液及试剂 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-38页 |
| ·丹参无菌苗的快繁 | 第23-24页 |
| ·丹参总RNA 的提取，检测及反转录 | 第24-26页 |
| ·丹参总RNA 的提取 | 第24-25页 |
| ·RNA 的检测 | 第25页 |
| ·RNA 的反转录 | 第25-26页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第26-31页 |
| ·植物双元表达载体pCAMBIA1304~+的构建 | 第26页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA1304~+ +SmHMGR 的构建 | 第26-30页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA1304~+ +SmGGPPS 的构建 | 第30-31页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA1304~+ +SmHMGR+SmGGPPS 的构建 | 第31页 |
| ·农杆菌C58C1 介导的植物表达载体遗传转化丹参叶片诱导发根 | 第31-32页 |
| ·菌种的活化 | 第31-32页 |
| ·丹参叶片的预培养 | 第32页 |
| ·共培养 | 第32页 |
| ·除菌培养 | 第32页 |
| ·毛状根的扩大培养 | 第32页 |
| ·丹参转基因毛状根的PCR 阳性鉴定 | 第32-34页 |
| ·丹参转基因毛状根总DNA 提取 | 第32-33页 |
| ·丹参转基因毛状根的PCR 阳性鉴定 | 第33-34页 |
| ·丹参转基因毛状根的RT-PCR 分析 | 第34-36页 |
| ·转基因丹参毛状根的RNA 提取 | 第35页 |
| ·RNA 反转录成cDNA 第一条链 | 第35页 |
| ·RT-PCR 分析 | 第35-36页 |
| ·丹参转基因毛状根的丹参酮含量分析 | 第36-37页 |
| ·丹参酮的提取 | 第36页 |
| ·丹参酮标准品的制备 | 第36-37页 |
| ·HPLC 色谱条件 | 第37页 |
| ·样品测定方法 | 第37页 |
| ·丹参酮的抗氧化活性分析 | 第37-38页 |
| ·丹参酮不同浓度梯度溶液的稀释 | 第37页 |
| ·DPPH 溶液与丹参酮溶液混合反应 | 第37页 |
| ·DPPH 自由基清除活性 | 第37-38页 |
| 第三章 结果与分析 | 第38-58页 |
| ·丹参总RNA 的提取 | 第38页 |
| ·载体构建 | 第38-42页 |
| ·目的基因的获得 | 第38-39页 |
| ·pCAMBIA1304~+ +SmHMGR 的构建 | 第39-40页 |
| ·pCAMBIA1304~+ +SmGGPPS 的构建 | 第40-41页 |
| ·pCAMBIA1304~+ +SmHMGR+SmGGPPS 的构建 | 第41-42页 |
| ·农杆菌C58C1 介导的丹参外植体遗传转化 | 第42-43页 |
| ·转基因丹参毛状根的PCR 鉴定 | 第43-45页 |
| ·pCAMBIA1304~+ +SmHMGR 单转丹参毛状根的PCR 鉴定 | 第43页 |
| ·pCAMBIA1304~+ +SmGGPPS 单转丹参毛状根的PCR 鉴定 | 第43-44页 |
| ·pCAMBIA1304~+ +SmHMGR+SmGGPPS 共转丹参毛状根的PCR 鉴定 | 第44-45页 |
| ·转基因丹参毛状根的RT-PCR 分析 | 第45-46页 |
| ·转基因丹参毛状根中丹参酮的提取及含量测定 | 第46-55页 |
| ·丹参酮有效活性成份的提取 | 第46页 |
| ·HPLC 色谱条件的确定 | 第46-47页 |
| ·标准曲线的制作 | 第47-49页 |
| ·转基因丹参毛状根丹参酮含量的HPLC 测定及分析 | 第49-55页 |
| ·SmHMGR 及SmGGPPS 单独或共转化丹参毛状根的总丹参酮含量分析 | 第49-51页 |
| ·SmHMGR 及SmGGPPS 单独或共转化丹参毛状根对其3 种丹参酮成份 | 第51-53页 |
| ·SmHMGR 及SmGGPPS 在丹参毛状根中对丹参酮合成的作用比较 | 第53-54页 |
| ·丹参酮ⅡA 的含量对丹参毛状根形态的影响 | 第54-55页 |
| ·转基因丹参毛状根中丹参酮的抗氧化活性分析 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| 第四章 总结与展望 | 第58-61页 |
| ·研究总结 | 第58-59页 |
| ·研究展望 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-70页 |
| 硕士期间发表的论文及成果 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
