| 摘 要 | 第1-5页 |
| 英 文 摘 要 | 第5-6页 |
| 前 言 | 第6-8页 |
| 第一章 猪瘟病毒主要抗原蛋白 | 第8-18页 |
| 1 材料与方法 | 第8-14页 |
| ·毒株、菌株与表达系统 | 第8页 |
| ·生物学制剂及各种酵母培养基的配制 | 第8-9页 |
| ·引物的设计与合成 | 第9页 |
| ·CSFV的 RNA的提取 | 第9页 |
| ·RT-PCR和cDNA的鉴定 | 第9页 |
| ·反转录合成cDNA | 第9页 |
| ·PCR扩增 | 第9页 |
| ·E.coli 感受态的制备 | 第9-10页 |
| ·真核表达载体pPSWE的构建 | 第10-11页 |
| ·电转化酵母感受态细胞的制备 | 第11页 |
| ·重组真核表达载体pPSWE的线性化 | 第11页 |
| ·真核表达载体pPSWE的转化 | 第11-12页 |
| ·高拷贝重组酵母菌的筛选和保存 | 第12页 |
| ·酵母总DNA的提取 | 第12页 |
| ·Mut+重组酵母菌(甲醇利用快型)的诱导表达 | 第12页 |
| ·目的蛋白的浓缩 | 第12-13页 |
| ·SDS-PAGE | 第13页 |
| ·Western blottinging分析 | 第13-14页 |
| 2 结果 | 第14-16页 |
| ·重组表达载体pPSWE的构建与鉴定 | 第14-15页 |
| ·RT-PCR产物的琼脂糖凝胶结果 | 第14页 |
| ·目的片段的克隆和鉴定 | 第14-15页 |
| ·重组质粒pPSWE的测序确认 | 第15页 |
| ·重组表达载体pPSWE在巴斯德毕赤氏酵母中的表达 | 第15-16页 |
| 3 讨论 | 第16-17页 |
| 4 结论 | 第17-18页 |
| 第二章 猪瘟病毒C-株E2蛋白在E.coli中的可溶性表达 | 第18-26页 |
| 1 材料与方法 | 第18-19页 |
| ·菌株与质粒 | 第18页 |
| ·限制性内切酶及试剂 | 第18页 |
| ·仪器和设备 | 第18-19页 |
| 2 引物设计、合成和目的片段的克隆 | 第19-20页 |
| ·重组表达载体的构建与鉴定 | 第19页 |
| ·pGST-E2试表达 | 第19页 |
| ·pGST-E2表达蛋白的鉴定 | 第19页 |
| ·pGST-E2蛋白大量表达及鉴定 | 第19-20页 |
| 3 结果 | 第20-23页 |
| ·重组表达载体的构建与鉴定 | 第20-21页 |
| ·PCR琼脂糖凝胶电泳结果 | 第20页 |
| ·重组表达载体的PCR鉴定 | 第20-21页 |
| ·在BL21(Star)中表达融合蛋白pGST-E | 第21-23页 |
| 4 讨论 | 第23-24页 |
| ·表达载体、宿主菌和外源基因的关系 | 第23-24页 |
| ·融合蛋白pGST-E2的可溶性表达条件的优化 | 第24页 |
| 5 结论 | 第24-25页 |
| 参考文献 | 第25-26页 |
| 第三章 文献综述 | 第26-40页 |
| 1 猪瘟病毒研究进展 | 第26-36页 |
| ·猪瘟概述 | 第26页 |
| ·猪瘟的病原 | 第26页 |
| ·猪瘟的发病机理和临床表现 | 第26-27页 |
| ·猪瘟病毒的诊断和免疫 | 第27页 |
| ·猪瘟病毒的的形态和理化特点 | 第27页 |
| ·猪瘟病毒与食品安全 | 第27-28页 |
| ·猪瘟病毒基因组研究进展 | 第28-31页 |
| ·猪瘟病毒非结构基因研究进展 | 第31-32页 |
| ·Npro基因 | 第31页 |
| ·核衣壳蛋白C | 第31-32页 |
| ·CSFV疫苗类型 | 第32-35页 |
| ·传统的活疫苗 | 第32页 |
| ·基因工程疫苗 | 第32-35页 |
| ·基因工程亚单位疫苗 | 第32-34页 |
| ·候选的基因工程疫苗 | 第34-35页 |
| ·基因工程疫苗研究的意义 | 第35页 |
| ·疫苗的安全性 | 第35-36页 |
| 2 酵母表达系统研究进展 | 第36-40页 |
| ·真核表达系统 | 第36-40页 |
| ·真核表达系统概述 | 第36页 |
| ·酵母表达系统的发展 | 第36-37页 |
| ·毕赤氏酵母菌种和载体 | 第37页 |
| ·载体元件的发展 | 第37-39页 |
| ·启动子 | 第37页 |
| ·选择标记 | 第37-38页 |
| ·信号肽序列 | 第38页 |
| ·表达载体的构建方法 | 第38页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达菌株的生长 | 第38-39页 |
| ·表达方式 | 第39页 |
| ·影响外源基因表达的主要因素 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-44页 |
| 附录 | 第44-47页 |
| 致谢 | 第47页 |
