| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-36页 |
| 一. 植物Ca~(2+)信号系统中的CaM | 第14-22页 |
| 1 Ca~(2+)信号系统简介 | 第14-16页 |
| (1) Ca~(2+)信号转导的基础 | 第14-16页 |
| (2) Ca~(2+)结合蛋白 | 第16页 |
| 2 CaM的结构和亚型 | 第16-17页 |
| 3 CaM的靶蛋白 | 第17-19页 |
| 4 CaM的功能 | 第19-22页 |
| (1) CaM的细胞核功能 | 第19页 |
| (2) 调控离子运输 | 第19-20页 |
| (3) 参与植物对环境的刺激反应 | 第20-22页 |
| 二. 花粉的萌发和生长中的信号 | 第22-30页 |
| 1 花粉的结构 | 第22-23页 |
| 2 花粉的极性生长 | 第23页 |
| 3 胞外Ca~(2+)信号及向化性信号 | 第23-24页 |
| 4 花粉管生长的向触性信号(粘附信号) | 第24-25页 |
| 5 参与花粉管生长的信号分子 | 第25-30页 |
| (1) Ca~(2+) | 第25-28页 |
| ① Ca~(2+)在花粉萌发和生长中的作用 | 第25-27页 |
| ② 测量Ca~(2+)_i的方法 | 第27-28页 |
| (2) CaM及CaM结合蛋白 | 第28页 |
| (3) CDPK | 第28-29页 |
| (4) cAMP | 第29页 |
| (5) Rop-GTPasc | 第29-30页 |
| 三. 花粉萌发和花粉管生长中的CaM | 第30-34页 |
| 1 CaM在花粉萌发和花粉管生长中的作用 | 第30-31页 |
| 2 CaM的研究方法 | 第31-34页 |
| (1) 免疫细胞化学定位法 | 第31页 |
| (2) CaM拮抗剂标记法 | 第31-32页 |
| (3) mRNA原位杂交及荧光标记CaM和CaM mRNA | 第32页 |
| (4) GFP-CaM融合蛋白定位法 | 第32-34页 |
| 四. 本论文研究的目的和意义 | 第34-36页 |
| 第二章 转化载体的构建和烟草转基因体系的建立 | 第36-46页 |
| 摘要 | 第36页 |
| 一. 引言 | 第36页 |
| 二. 材料和方法 | 第36-42页 |
| 1 载体的构建 | 第36-38页 |
| (1) 质粒的提取 | 第36-37页 |
| (2) 限制性内切酶消化 | 第37页 |
| (3) 酶切片段的去磷酸化 | 第37-38页 |
| (4) 限制性内切酶片段的回收 | 第38页 |
| (5) 载体和插入片段的连接反应 | 第38页 |
| 2 大肠杆菌的转化 | 第38-39页 |
| (1) 大肠杆菌的培养 | 第38页 |
| (2) 大肠杆菌的保存 | 第38-39页 |
| (3) 制备大肠杆菌感受态 | 第39页 |
| (4) 大肠杆菌的转化 | 第39页 |
| 3 植物表达载体的构建 | 第39-41页 |
| (1) pMD／CaM-GFP、pMD／GFP、pBI／LAT-CaM-GFP和pBI／LAT-GFP植物表达载体的构建 | 第39-40页 |
| (2) pMD／CaM-GUS和pBI／LAT-CaM-GUS植物表达载体的构建 | 第40-41页 |
| (3) 植物表达载体转化农杆菌 | 第41页 |
| 4 农杆菌的转化 | 第41-42页 |
| (1) 农杆菌的培养及感受态的制备 | 第41页 |
| (2) 农杆菌的转化 | 第41-42页 |
| 5 烟草转基因体系的建立 | 第42页 |
| (1) 烟草无菌苗的培养 | 第42页 |
| (2) 农杆菌介导的烟草叶盘转化及愈伤组织的筛选 | 第42页 |
| 三. 结果 | 第42-43页 |
| 附: 所用溶液和配方 | 第43-46页 |
| 第三章 采用GUS标记技术研究CaM在烟草中的分布 | 第46-53页 |
| 摘要 | 第46页 |
| 一. 引言 | 第46-47页 |
| 二. 材料和方法 | 第47-48页 |
| 1 载体的构建 | 第47-48页 |
| 2 植物转化和组织培养 | 第48页 |
| 3 GUS的组织化学检测 | 第48页 |
| 三. 结果 | 第48-49页 |
| 四. 讨论和分析 | 第49-51页 |
| 图版及图版说明 | 第51-53页 |
| 3-2 GUS染色显示CaM在转基因烟草中的分布 | 第51-53页 |
| 第四章 CaM-GFP融合蛋白在烟草中的表达及定位 | 第53-67页 |
| 摘要 | 第53页 |
| 一. 引言 | 第53页 |
| 二. 材料与方法 | 第53-54页 |
| 1 观测对象的确定 | 第53-54页 |
| 2 叶肉细胞原生质体的提取 | 第54页 |
| 3 转基因烟草茎尖分生组织的振荡切片 | 第54页 |
| 4 转基因烟草胚囊的分离 | 第54页 |
| 5 烟草及拟南芥花粉的萌发 | 第54页 |
| 6 显微镜镜检观察 | 第54页 |
| 三. 结果 | 第54-55页 |
| 四. 分析与讨论 | 第55-57页 |
| 图版及图版说明 | 第57-67页 |
| 4-1 CaM在转基因烟草幼苗、根和叶片中的表达和定位 | 第57-59页 |
| 4-2 CaM在表皮毛细胞、保卫细胞和根毛细胞中的表达和定位 | 第59-61页 |
| 4-3 CaM在茎尖分生组织中的表达和定位 | 第61-63页 |
| 4-4 转基因烟草的胚珠和胚囊 | 第63-65页 |
| 4-5 CAM在花粉和花粉管中的表达 | 第65-67页 |
| 第五章 CaM在烟草花粉水合及花粉管萌发过程中的极性分布 | 第67-81页 |
| 摘要 | 第67页 |
| 一. 引言 | 第67-68页 |
| 二. 材料和方法 | 第68-69页 |
| 1 载体的构建和烟草的转化 | 第68-69页 |
| 2 花粉的培养和试剂处理 | 第69页 |
| 3 图象的采集和分析 | 第69页 |
| 三. 结果 | 第69-70页 |
| 四. 分析和讨论 | 第70-73页 |
| 图版及图版说明 | 第73-81页 |
| 5-2 水合烟草花粉的共聚焦扫描图片 | 第73-75页 |
| 5-3 水合花粉和正在生长的花粉管内CaM的分布 | 第75-77页 |
| 5-4 花粉萌发过程中CaM的极性分布 | 第77-79页 |
| 5-5 没有萌发或CaM拮抗剂处理后的花粉内CaM的分布 | 第79-81页 |
| 第六章 CaM在转基因烟草花粉管顶区的振荡分布与花粉管脉冲生长的关系 | 第81-102页 |
| 摘要 | 第81页 |
| 一. 引言 | 第81-82页 |
| 二. 材料和方法 | 第82-84页 |
| 1 载体的构建和烟草的转化 | 第82-83页 |
| 2 花粉的培养及药物处理 | 第83页 |
| 3 显微图象的采集和分析 | 第83-84页 |
| 4 花粉管生长速率的测量 | 第84页 |
| 三. 结果 | 第84-86页 |
| 1 CaM在转基因烟草花粉中的极性分布及CaM随花粉管脉冲生长在花粉管顶区的振荡 | 第84页 |
| 2 外源Ca~(2+)处理下CaM在花粉管顶区的变化 | 第84-86页 |
| 3 CaM拮抗剂calmidazolium对顶端聚集的CaM的影响 | 第86页 |
| 4 BFA处理后CaM在花粉管顶区分布的变化 | 第86页 |
| 四. 分析和讨论 | 第86-89页 |
| 图版及图版说明 | 第89-102页 |
| 6-2 花粉管顶区CaM的振荡分布以及花粉管的生长速率 | 第89-93页 |
| 6-3 Ca~(2+)处理后花粉管顶区CaM分布和花粉管生长速率的变化 | 第93-97页 |
| 6-4 拮抗剂处理后花粉管顶区CaM分布和花粉管生长速率的变化 | 第97-99页 |
| 6-5 BFA处理下后花粉管顶区CaM分布和花粉管生长速率的改变 | 第99-102页 |
| 第七章 总讨论 | 第102-105页 |
| 参考文献 | 第105-122页 |
| 在读期间发表的论文 | 第122-123页 |
| 致谢 | 第123页 |
