| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略语表 | 第8-9页 |
| 第一章 引言 | 第9-15页 |
| ·研究的目的和意义 | 第9-10页 |
| ·国内外研究现状 | 第10-15页 |
| ·肉毒中毒 | 第10页 |
| ·肉毒毒素的结构 | 第10-11页 |
| ·肉毒素的作用机理 | 第11-12页 |
| ·A型肉毒毒素的分子遗传学 | 第12-13页 |
| ·类毒毒素疫苗研究 | 第13页 |
| ·重组疫苗 | 第13-14页 |
| ·其他研究肉毒毒素疫苗的策略 | 第14页 |
| ·国内最新研究 | 第14-15页 |
| 第二章 A型肉毒毒素段基因在大肠杆菌中表达 | 第15-33页 |
| ·实验材料 | 第15-18页 |
| ·菌株和质粒 | 第15页 |
| ·核苷酸引物寡 | 第15页 |
| ·主要工具酶及试剂盒来源 | 第15-16页 |
| ·主要生化试剂 | 第16页 |
| ·主要试剂的配制 | 第16-17页 |
| ·主要仪器设备 | 第17页 |
| ·计算机软件包 | 第17-18页 |
| ·实验方法 | 第18-23页 |
| ·质粒的提取及纯化 | 第18页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第18-19页 |
| ·限制性内切酶消化DNA分子 | 第19页 |
| ·DNA片段的回收 | 第19页 |
| ·DNA片段的连接 | 第19-20页 |
| ·DNA的定量 | 第20页 |
| ·感受态细胞的制备与质粒的转化 | 第20-21页 |
| ·大肠杆菌重组蛋白的诱导表达 | 第21页 |
| ·包涵体的提取与纯化(1L培养物) | 第21页 |
| ·细菌周质蛋白的提取 | 第21页 |
| ·培养基内可溶部分的浓缩 | 第21页 |
| ·表达产物的纯化 | 第21-22页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE和Western blot分析 | 第22页 |
| ·蛋白质的定量分析 | 第22-23页 |
| ·实验结果 | 第23-28页 |
| ·扩增BONT／A的Hc段基因的引物设计 | 第23页 |
| ·PCR扩增BONT／A的Hc段基因 | 第23页 |
| ·PQE-60Hc原核表达载体的构建 | 第23-24页 |
| ·BONT／A的Hc段基因在大肠杆菌中的表达 | 第24-26页 |
| ·BONT／A的Hc重组蛋白的纯化 | 第26页 |
| ·Western blot分析 | 第26-28页 |
| ·讨论 | 第28-33页 |
| ·表达载体及宿主菌的影响 | 第28页 |
| ·外源基因mRNA的因素 | 第28-29页 |
| ·密码子的使用 | 第29-30页 |
| ·表达产物的形式 | 第30页 |
| ·降解问题 | 第30-31页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第31页 |
| ·细菌的培养条件 | 第31页 |
| ·表达产物的检测 | 第31-33页 |
| 第三章 A型肉毒毒素Hc段基因在毕赤酵母中表达研究 | 第33-50页 |
| ·实验材料 | 第33-36页 |
| ·菌株和质粒 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33-34页 |
| ·主要试剂的配制 | 第34-36页 |
| ·实验方法 | 第36-40页 |
| ·分泌表达质粒的构建 | 第36页 |
| ·质粒的大量提取 | 第36页 |
| ·电击转化法 | 第36-37页 |
| ·酵母重组子的筛选 | 第37-38页 |
| ·重组阳性克隆细胞营养表性的确定 | 第38页 |
| ·酵母菌的诱导表达 | 第38-39页 |
| ·重组表达产物的分析 | 第39-40页 |
| ·实验结果 | 第40-46页 |
| ·分泌表达载体pPIC9K-Hc的构建 | 第40-41页 |
| ·基因工程菌的重组 | 第41-42页 |
| ·重组酵母表达株的筛选 | 第42-44页 |
| ·表达细胞株的营养型鉴定 | 第44页 |
| ·重组酵母细胞株的诱导表达 | 第44-45页 |
| ·不同时间对重组酵母细胞株的表达量的影响 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-50页 |
| ·毕赤酵母(Pichia pastoris)的生物学特性 | 第46页 |
| ·外源基因对表达的影响 | 第46-47页 |
| ·表达载体及菌株的的选择 | 第47页 |
| ·转化的影响 | 第47-48页 |
| ·筛选的作用 | 第48页 |
| ·培养条件的控制 | 第48页 |
| ·降解问题 | 第48-50页 |
| 第四章 结论与建议 | 第50-51页 |
| ·结论 | 第50页 |
| ·建议 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
