| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1． RNA干涉的研究进展 | 第11-15页 |
| 1．1 基因沉默的发现 | 第11页 |
| 1．2 基因沉默的类型与特点 | 第11-12页 |
| 1．3 基因干涉的两种方法 | 第12页 |
| 1．4 在线虫中发现了RNAi现象 | 第12-13页 |
| 1．5 RNAi现象广泛存在于各种不同生物中 | 第13-15页 |
| 1．6 RNAi的技术途径 | 第15页 |
| 2． RNA干涉机制 | 第15-19页 |
| 2．1 siRNA是RNAi的中间效应分子 | 第15-16页 |
| 2．2 siRNA结构和功能的关系 | 第16页 |
| 2．3 RNAi的效应物 | 第16-17页 |
| 2．4 参与RNAi反应的酶 | 第17页 |
| 2．5 ATP在RNAi过程的作用 | 第17页 |
| 2．6 现有RNAi机制模型 | 第17-19页 |
| 3． RNA干涉的特征及应用 | 第19-21页 |
| 3．1 RNA干涉的特征 | 第19页 |
| 3．2 RNAi的应用 | 第19-21页 |
| 3．2．1 高通量的研究基因功能 | 第19-20页 |
| 3．2．2 基因敲除 | 第20页 |
| 3．2．3 基因治疗 | 第20-21页 |
| 3．2．4 基因表达调控 | 第21页 |
| 4． RNA干涉技术在蚕功能基因研究中的价值 | 第21-23页 |
| 4．1 基因的反求分析法在功能基因研究中的利用 | 第21页 |
| 4．2 RNA干涉技术在家蚕功能基因组研究的应用前景 | 第21-23页 |
| 4．2．1 在家蚕中尚无成功的反求遗传法 | 第22页 |
| 4．2．2 从家蚕EST序列出发利用RNAi研究基因功能 | 第22-23页 |
| 第二章 引言 | 第23-25页 |
| 1． 研究背景及意义 | 第23-24页 |
| 2． 技术路线 | 第24-25页 |
| 第三章 Bmdsx基因dsRNA的制备 | 第25-34页 |
| 1． 材料和方法 | 第26-30页 |
| 1．1 材料 | 第26页 |
| 1．2 主要试剂和酶 | 第26页 |
| 1．3 主要仪器与设备 | 第26-27页 |
| 1．4 部分试剂配制 | 第27-28页 |
| 1．5 实验方法 | 第28-30页 |
| 1．5．1 Bmdsx基因的克隆 | 第28-29页 |
| 1．5．1．1 总RNA的提取 | 第28页 |
| 1．5．1．2 cDNA的合成 | 第28页 |
| 1．5．1．3 Bmdsx基因的扩增 | 第28-29页 |
| 1．5．1．4 Bmdsx基因的克隆 | 第29页 |
| 1．5．2 Bmdsx基因dsRNA的制备 | 第29-30页 |
| 1．5．2．1 用Pst1酶线性化Bmdsx基因质粒DNA | 第30页 |
| 1．5．2．2 Klenow酶补平粘端 | 第30页 |
| 1．5．2．3 dsRNA的制备 | 第30页 |
| 1．5．3 显微注射 | 第30页 |
| 2． 结果与分析 | 第30-34页 |
| 2．1 Bmdsx基因的克隆 | 第30-32页 |
| 2．1．1 总RNA的提取 | 第30-31页 |
| 2．1．2 Bmdsx基因的PCR扩增 | 第31页 |
| 2．1．3 Bmdsx基因的克隆及测序 | 第31-32页 |
| 2．2 Bmdsx基因质粒DNA的酶切线化性 | 第32页 |
| 2．3 Bmdsx基因dsRNA制备 | 第32-33页 |
| 2．4 注射Bmdsx基因dsRNA对家蚕胚胎的影响 | 第33-34页 |
| 第四章 家蚕胚胎发育时期的RNA干涉研究 | 第34-43页 |
| 1． 材料与方法 | 第34-39页 |
| 1．1 材料 | 第34页 |
| 1．2 所用试剂和酶 | 第34页 |
| 1．3 方法 | 第34-39页 |
| 1．3．1 Bmwh3基因质粒DNA的大量抽提及测序 | 第34-36页 |
| 1．3．1．1 感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| 1．3．1．2 转化 | 第36页 |
| 1．3．2 Bmwh3基因的dsRNA制备 | 第36-37页 |
| 1．3．2．1 质粒DNA的酶切线性化 | 第36页 |
| 1．3．2．2 线性化产物的纯化 | 第36-37页 |
| 1．3．2．3 Klelow酶补平粘端 | 第37页 |
| 1．3．2．4 dsRNA的制备 | 第37页 |
| 1．3．3 蚕卵准备及显微注射 | 第37-38页 |
| 1．3．3．1 注射蚕卵的处理 | 第37页 |
| 1．3．3．2 显微注射 | 第37-38页 |
| 1．3．3．2．1 注射打孔针的准备 | 第37-38页 |
| 1．3．3．2．2 注射针的准备—拉针 | 第38页 |
| 1．3．3．2．3 微量注射 | 第38页 |
| 1．3．4 注射后的RNAi表型观察 | 第38-39页 |
| 1．3．5 用精子介导法诱导Bmwh3基因的RNAi表型 | 第39页 |
| 2． 结果与分析 | 第39-43页 |
| 2．1 Bmwh3基因的质粒DNA抽提及测序结果 | 第39页 |
| 2．2 Bmwh3基因dsRNA的制备 | 第39-40页 |
| 2．3 Bmwh3 dsRNA对蚕卵表型的影响 | 第40-42页 |
| 2．4 用精子介导法诱导Bmwh3基因的RNAi的表型 | 第42-43页 |
| 第五章 讨论 | 第43-48页 |
| 1 家蚕RNAi的技术体系 | 第43-46页 |
| 1．1 实验材料 | 第43页 |
| 1．2 dsRNA的制备 | 第43-44页 |
| 1．3 注射时间的选择 | 第44页 |
| 1．4 导入方法的探讨 | 第44-45页 |
| 1．5 注射剂量的控制及注射方式探讨 | 第45页 |
| 1．6 蚕卵注射前后的处理 | 第45页 |
| 1．7 家蚕中RNAi有效体系的构建 | 第45-46页 |
| 2 家蚕Bmwh3基因及干涉后果分析 | 第46页 |
| 3 Bmdsx基因的RNA干涉初步探讨 | 第46-47页 |
| 4 家蚕RNAi的应用及展望 | 第47-48页 |
| 小结 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-58页 |
| 附录 | 第58-62页 |
| 发表论文目录及课题一览表 | 第62-63页 |
| 英文缩写 | 第63-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
