中文摘要 | 第1-10页 |
英文摘要 | 第10-14页 |
一、 前言 | 第14-38页 |
1 对虾养殖及免疫学防治研究进展 | 第14-19页 |
·对虾养殖及南美白对虾概况 | 第14-16页 |
·对虾的主要疾病及诊断方法 | 第16-18页 |
·虾病免疫学防治研究进展 | 第18-19页 |
2 对虾类免疫学基础研究进展 | 第19-26页 |
·免疫系统的研究 | 第20-25页 |
·虾类免疫应答机制 | 第25-26页 |
·展望 | 第26页 |
3 无脊椎动物免疫球蛋白超家族分子及适应性免疫初步研究进展 | 第26-33页 |
·无脊椎动物免疫球蛋白超家族分子研究进展 | 第26-30页 |
·无脊椎动物适应性免疫初步研究进展 | 第30-33页 |
4 两种与本课题有关的生物技术-蛋白质组和生物信息学研究进展 | 第33-37页 |
·蛋白质组研究进展 | 第33-35页 |
·生物信息学研究概况及其在蛋白质组研究中的应用 | 第35-37页 |
5 本论文研究的内容、目的及意义 | 第37-38页 |
二、 材料与方法 | 第38-64页 |
1 实验材料 | 第38-46页 |
2 技术路线 | 第46-47页 |
3 方法 | 第47-64页 |
·类Ig蛋白(Ig-like protein)的免疫学研究 | 第47-50页 |
·类Ig蛋白的分离、纯化和鉴定 | 第50-53页 |
·生物信息学分析 | 第53页 |
·类Ig蛋白-血蓝蛋白与羊抗人Ig结合特异性比较分析 | 第53-54页 |
·类Ig蛋白-血蓝蛋白全基因的克隆、表达及Western-blotting分析 | 第54-59页 |
·类Ig蛋白-血蓝蛋白功能区的克隆、表达和免疫学研究 | 第59-60页 |
·类Ig蛋白(血蓝蛋白)的功能研究 | 第60-64页 |
三、 结果与分析 | 第64-159页 |
1 类Ig蛋白(Ig-like protein)的免疫学研究 | 第64-72页 |
·单向免疫扩散法(Single radial immunodiffusion,SRID)检测对虾血清中的类IgM、IgG和IgA | 第64页 |
·免疫酶斑点法(Dot enzyme-linked immunosorbent assay,Dot-ELISA)检测虾血清中类IgM、IgG和IgA | 第64-66页 |
·免疫酶斑点法检测虾血清中类IgM、IgG和IgA的特异性 | 第66-68页 |
·免疫印迹(Western-blotting)检测虾血清中的类IgM、IgG和IgA | 第68-69页 |
·免疫酶斑点法检测虾血清中类IgM、IgG和IgA的含量 | 第69页 |
·免疫酶法检测类Ig的组织和血细胞分布 | 第69-72页 |
2 类Ig的分离、纯化和鉴定 | 第72-91页 |
·类Ig的1-DE和1-D immunoblot分析 | 第72-73页 |
·类Ig的2-DE和2-D immunoblot分析 | 第73-75页 |
·类Ig的鉴定 | 第75-91页 |
3 类Ig(血蓝蛋白及其前体)的生物信息学分析 | 第91-117页 |
·血蓝蛋白及其前体保守区分析 | 第91-95页 |
·血蓝蛋白及其前体与人Ig及相关免疫分子蛋白质的序列比对分析 | 第95-103页 |
·血蓝蛋白及其前体与人Ig三维结构比较分析 | 第103-110页 |
·血蓝蛋白前体HpCR_(611-625) motif序列比对分析 | 第110-116页 |
·血蓝蛋白前体和IgSF分子进化树的构建 | 第116-117页 |
4 类Ig蛋白(血蓝蛋白)与羊抗人Ig结合的分析 | 第117-122页 |
·分子筛柱层析纯化的血蓝蛋白与羊抗人Ig相互作用的分析 | 第117-120页 |
·两种方法鉴定的类Ig的比较分析 | 第120-122页 |
·虾血清亲和层析纯化的血蓝蛋白(ESI-MS/MS鉴定)与人IgG抗体交叉反应的比较分析 | 第122页 |
5 血蓝蛋白全基因的克隆、表达及Western-blotting分析 | 第122-128页 |
·血蓝蛋白全基因克隆 | 第122-124页 |
·Hc基因重组蛋白的小量表达和纯化 | 第124页 |
·Hc基因重组表达蛋白的Western-blotting分析 | 第124-128页 |
6 类Ig(血蓝蛋白)与羊抗人Ig结合区域的分析 | 第128-140页 |
·血蓝蛋白保守区的划分 | 第128页 |
·Hc-I基因的克隆和表达分析 | 第128-133页 |
·Hc-NI基因的克隆和表达分析 | 第133-137页 |
·Hc-IB基因的克隆和表达分析 | 第137页 |
·Hc-I、Hc-NI和Hc-IB基因重组表达蛋白的纯化和Western-blotting分析 | 第137-140页 |
7 类Ig蛋白(血蓝蛋白)功能研究 | 第140-159页 |
·类Ig蛋白(血蓝蛋白)与细菌相互作用研究 | 第140-146页 |
·类Ig(血蓝蛋白前体)的凝集活性分析 | 第146-147页 |
·类Ig(血蓝蛋白)与酚氧化酶活性相互关系探讨 | 第147-151页 |
·血蓝蛋白免疫学功能探讨 | 第151-159页 |
四、 讨论 | 第159-178页 |
1 亲和蛋白质组学技术是快速鉴定目的蛋白的有效手段 | 第159-160页 |
2 南美白对虾血清中与抗人Ig发生特异性结合的类Ig蛋白为血蓝蛋白及其前体 | 第160-166页 |
·虾血清中确实存在能与羊抗人IgM、IgG和IgA反应的类Ig | 第160-161页 |
·虾血清类Ig为血蓝蛋白及其前体 | 第161-162页 |
·类Ig蛋白(血蓝蛋白及其前体)与抗人Ig能发生特异性的结合 | 第162-164页 |
·只有少量血蓝蛋白能与抗人Ig结合 | 第164-165页 |
·对虾的血细胞和组织中亦可检出类Ig | 第165-166页 |
3 血蓝蛋白是一种重要的免疫分子 | 第166-173页 |
·血蓝蛋白能与细菌相互作用 | 第166-170页 |
·血蓝蛋白具有凝集活性 | 第170-171页 |
·血蓝蛋白C端28.5 kDa裂解片段与对虾抗菌能力大小有关 | 第171-173页 |
4 血蓝蛋白及其前体在免疫分子起源和进化中可能具有特殊地位 | 第173-178页 |
五、 结论 | 第178-179页 |
参考文献 | 第179-210页 |
附录 | 第210-220页 |
缩略语 | 第220-222页 |
攻读博士学位期间发表的论文 | 第222-223页 |
致谢 | 第223页 |