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南美白对虾类Ig的定性、功能和免疫分子进化的研究

中文摘要第1-10页
英文摘要第10-14页
一、 前言第14-38页
 1 对虾养殖及免疫学防治研究进展第14-19页
   ·对虾养殖及南美白对虾概况第14-16页
   ·对虾的主要疾病及诊断方法第16-18页
   ·虾病免疫学防治研究进展第18-19页
 2 对虾类免疫学基础研究进展第19-26页
   ·免疫系统的研究第20-25页
   ·虾类免疫应答机制第25-26页
   ·展望第26页
 3 无脊椎动物免疫球蛋白超家族分子及适应性免疫初步研究进展第26-33页
   ·无脊椎动物免疫球蛋白超家族分子研究进展第26-30页
   ·无脊椎动物适应性免疫初步研究进展第30-33页
 4 两种与本课题有关的生物技术-蛋白质组和生物信息学研究进展第33-37页
   ·蛋白质组研究进展第33-35页
   ·生物信息学研究概况及其在蛋白质组研究中的应用第35-37页
 5 本论文研究的内容、目的及意义第37-38页
二、 材料与方法第38-64页
 1 实验材料第38-46页
 2 技术路线第46-47页
 3 方法第47-64页
   ·类Ig蛋白(Ig-like protein)的免疫学研究第47-50页
   ·类Ig蛋白的分离、纯化和鉴定第50-53页
   ·生物信息学分析第53页
   ·类Ig蛋白-血蓝蛋白与羊抗人Ig结合特异性比较分析第53-54页
   ·类Ig蛋白-血蓝蛋白全基因的克隆、表达及Western-blotting分析第54-59页
   ·类Ig蛋白-血蓝蛋白功能区的克隆、表达和免疫学研究第59-60页
   ·类Ig蛋白(血蓝蛋白)的功能研究第60-64页
三、 结果与分析第64-159页
 1 类Ig蛋白(Ig-like protein)的免疫学研究第64-72页
   ·单向免疫扩散法(Single radial immunodiffusion,SRID)检测对虾血清中的类IgM、IgG和IgA第64页
   ·免疫酶斑点法(Dot enzyme-linked immunosorbent assay,Dot-ELISA)检测虾血清中类IgM、IgG和IgA第64-66页
   ·免疫酶斑点法检测虾血清中类IgM、IgG和IgA的特异性第66-68页
   ·免疫印迹(Western-blotting)检测虾血清中的类IgM、IgG和IgA第68-69页
   ·免疫酶斑点法检测虾血清中类IgM、IgG和IgA的含量第69页
   ·免疫酶法检测类Ig的组织和血细胞分布第69-72页
 2 类Ig的分离、纯化和鉴定第72-91页
   ·类Ig的1-DE和1-D immunoblot分析第72-73页
   ·类Ig的2-DE和2-D immunoblot分析第73-75页
   ·类Ig的鉴定第75-91页
 3 类Ig(血蓝蛋白及其前体)的生物信息学分析第91-117页
   ·血蓝蛋白及其前体保守区分析第91-95页
   ·血蓝蛋白及其前体与人Ig及相关免疫分子蛋白质的序列比对分析第95-103页
   ·血蓝蛋白及其前体与人Ig三维结构比较分析第103-110页
   ·血蓝蛋白前体HpCR_(611-625) motif序列比对分析第110-116页
   ·血蓝蛋白前体和IgSF分子进化树的构建第116-117页
 4 类Ig蛋白(血蓝蛋白)与羊抗人Ig结合的分析第117-122页
   ·分子筛柱层析纯化的血蓝蛋白与羊抗人Ig相互作用的分析第117-120页
   ·两种方法鉴定的类Ig的比较分析第120-122页
   ·虾血清亲和层析纯化的血蓝蛋白(ESI-MS/MS鉴定)与人IgG抗体交叉反应的比较分析第122页
 5 血蓝蛋白全基因的克隆、表达及Western-blotting分析第122-128页
   ·血蓝蛋白全基因克隆第122-124页
   ·Hc基因重组蛋白的小量表达和纯化第124页
   ·Hc基因重组表达蛋白的Western-blotting分析第124-128页
 6 类Ig(血蓝蛋白)与羊抗人Ig结合区域的分析第128-140页
   ·血蓝蛋白保守区的划分第128页
   ·Hc-I基因的克隆和表达分析第128-133页
   ·Hc-NI基因的克隆和表达分析第133-137页
   ·Hc-IB基因的克隆和表达分析第137页
   ·Hc-I、Hc-NI和Hc-IB基因重组表达蛋白的纯化和Western-blotting分析第137-140页
 7 类Ig蛋白(血蓝蛋白)功能研究第140-159页
   ·类Ig蛋白(血蓝蛋白)与细菌相互作用研究第140-146页
   ·类Ig(血蓝蛋白前体)的凝集活性分析第146-147页
   ·类Ig(血蓝蛋白)与酚氧化酶活性相互关系探讨第147-151页
   ·血蓝蛋白免疫学功能探讨第151-159页
四、 讨论第159-178页
 1 亲和蛋白质组学技术是快速鉴定目的蛋白的有效手段第159-160页
 2 南美白对虾血清中与抗人Ig发生特异性结合的类Ig蛋白为血蓝蛋白及其前体第160-166页
   ·虾血清中确实存在能与羊抗人IgM、IgG和IgA反应的类Ig第160-161页
   ·虾血清类Ig为血蓝蛋白及其前体第161-162页
   ·类Ig蛋白(血蓝蛋白及其前体)与抗人Ig能发生特异性的结合第162-164页
   ·只有少量血蓝蛋白能与抗人Ig结合第164-165页
   ·对虾的血细胞和组织中亦可检出类Ig第165-166页
 3 血蓝蛋白是一种重要的免疫分子第166-173页
   ·血蓝蛋白能与细菌相互作用第166-170页
   ·血蓝蛋白具有凝集活性第170-171页
   ·血蓝蛋白C端28.5 kDa裂解片段与对虾抗菌能力大小有关第171-173页
 4 血蓝蛋白及其前体在免疫分子起源和进化中可能具有特殊地位第173-178页
五、 结论第178-179页
参考文献第179-210页
附录第210-220页
缩略语第220-222页
攻读博士学位期间发表的论文第222-223页
致谢第223页

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