| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-24页 |
| ·猪瘟病毒的流行病学 | 第11-13页 |
| ·猪瘟的病理特征 | 第13-15页 |
| ·猪瘟病毒分子生物学研究进展 | 第15-21页 |
| ·非编码区研究进展 | 第15-17页 |
| ·编码区各基因研究进展 | 第17-21页 |
| ·猪瘟病毒基因组感染性克隆研究概况 | 第21-23页 |
| ·开展本论文研究的背景及意义 | 第23-24页 |
| 第二章 猪瘟病毒持续感染毒株基因组测序与分析 | 第24-33页 |
| ·材料和方法 | 第24-27页 |
| ·细胞毒CSFV39 | 第24页 |
| ·实验试剂和细菌 | 第24-25页 |
| ·RNA提取 | 第25页 |
| ·引物设计与合成 | 第25页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第25-26页 |
| ·PCR产物凝胶回收与克隆 | 第26页 |
| ·连接产物转化 | 第26-27页 |
| ·cDNA阳性克隆筛选 | 第27页 |
| ·全基因组序列测定与分析 | 第27页 |
| ·实验结果 | 第27-30页 |
| ·RT-PCR扩增各cDNA片段 | 第27-28页 |
| ·cDNA片段克隆与测序 | 第28页 |
| ·序列分析 | 第28-30页 |
| ·讨论 | 第30-33页 |
| 第三章 构建CSFV石门株基因组感染性cDNA克隆 | 第33-58页 |
| ·材料与方法 | 第33-42页 |
| ·病毒、细菌、载体和细胞 | 第33页 |
| ·试剂、溶液与培养基 | 第33-34页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第34页 |
| ·cDNA阳性克隆筛选与鉴定 | 第34-35页 |
| ·基因组末端cDNA片段的修饰 | 第35-36页 |
| ·全基因组cDNA的连接与克隆 | 第36-38页 |
| ·全基因组cDNA克隆质粒的鉴定 | 第38页 |
| ·基因组克隆质粒抽提与浓缩 | 第38-39页 |
| ·基因组质粒的线性化与末端平滑 | 第39-40页 |
| ·脂质体介导的转染 | 第40页 |
| ·感染性病毒粒子的检测 | 第40-42页 |
| ·RT-PCR检测 | 第41页 |
| ·免疫组织化学检测 | 第41-42页 |
| ·间接免疫荧光检测 | 第42页 |
| ·病毒粒子的电镜检查及感染性检测 | 第42页 |
| ·实验结果 | 第42-51页 |
| ·Shimen株基因组cDNA片段扩增 | 第42-43页 |
| ·各cDNA片段克隆质粒的鉴定 | 第43页 |
| ·基因组cDNA5’和3’大片段的连接 | 第43-46页 |
| ·基因组全长cDNA的连接 | 第46-47页 |
| ·全基因组cDNA克隆质粒的鉴定 | 第47-48页 |
| ·转染 | 第48-49页 |
| ·RT-PCR检测基因组片段 | 第49页 |
| ·免疫组化检测细胞培养物中病毒抗原 | 第49-50页 |
| ·间接免疫荧光检测猪瘟病毒抗原 | 第50-51页 |
| ·病毒粒子观察及感染性 | 第51页 |
| ·讨论 | 第51-58页 |
| ·分段扩增基因组cDNA | 第51-52页 |
| ·两端单独扩增 | 第52-53页 |
| ·连接和克隆策略 | 第53-54页 |
| ·基因组cDNA克隆pT7SM的感染性 | 第54-56页 |
| ·转染前的处理 | 第56页 |
| ·痘苗病毒诱导系统 | 第56页 |
| ·获得全基因组病毒 | 第56-58页 |
| 第四章 建立CSFV石门株致细胞病变模型 | 第58-77页 |
| ·材料与方法 | 第59-67页 |
| ·质粒与试剂 | 第59页 |
| ·干扰缺损颗粒亚基因组克隆的构建 | 第59-62页 |
| ·PCR扩增引入缺失 | 第59-60页 |
| ·PCR产物磷酸化与分子内连接 | 第60页 |
| ·基因组克隆质粒的构建 | 第60-61页 |
| ·基因组克隆的鉴定 | 第61-62页 |
| ·缺陷型病毒亚基因组克隆的构建 | 第62-64页 |
| ·NS3基因的扩增 | 第62页 |
| ·NS3基因3’端的BamHI酶切反应 | 第62-63页 |
| ·NS3基因5’端磷酸化 | 第63页 |
| ·pBlue12-4质粒的双酶切反应 | 第63-64页 |
| ·在pD8-8中插入cDNA0 | 第64页 |
| ·缺陷型病毒亚基因组cDNA的连接 | 第64页 |
| ·基因组克隆质粒转染宿主细胞 | 第64-66页 |
| ·基因组克隆质粒抽提与浓缩 | 第64-65页 |
| ·转染采用的宿主细胞 | 第65-66页 |
| ·转染 | 第66页 |
| ·基因组特异片段的检测 | 第66-67页 |
| ·构建致细胞病变模型 | 第67页 |
| ·实验结果 | 第67-73页 |
| ·构建干扰缺损颗粒的亚基因组克隆 | 第67-69页 |
| ·构建缺失NS2基因的亚基因组克隆 | 第69-71页 |
| ·转染 | 第71页 |
| ·检测亚基因组病毒的特异性片段 | 第71-72页 |
| ·致细胞病变模型 | 第72-73页 |
| ·讨论 | 第73-77页 |
| ·构建两种亚基因组克隆 | 第73-75页 |
| ·构建亚基因组克隆的策略 | 第75-76页 |
| ·致细胞病变模型的构建 | 第76-77页 |
| 第五章 缺陷型病毒诱导宿主细胞调亡 | 第77-85页 |
| ·材料与方法 | 第77-80页 |
| ·缺陷型病毒 | 第77-78页 |
| ·实验试剂和溶液 | 第78页 |
| ·Hoe33258荧光探针检测细胞调亡 | 第78-79页 |
| ·调亡细胞基因组DNA ladder条带的检测 | 第79页 |
| ·流式细胞仪分析调亡细胞 | 第79-80页 |
| ·实验结果 | 第80-82页 |
| ·Hoe33258荧光探针检测 | 第80页 |
| ·基因组DNA ladder分析 | 第80-82页 |
| ·凋亡细胞的流式细胞计数 | 第82页 |
| ·讨论 | 第82-85页 |
| 第六章 缺陷型病毒致细胞病变的分子机制研究 | 第85-99页 |
| ·材料和方法 | 第85-89页 |
| ·质粒和试剂 | 第85页 |
| ·NS2基因PCR扩增 | 第85-86页 |
| ·NS2基因克隆 | 第86-87页 |
| ·NS2基因表达质粒构建 | 第87页 |
| ·表达质粒转染PK-15细胞 | 第87页 |
| ·稳定表达细胞系的筛选 | 第87-88页 |
| ·G418最适筛选浓度的确定 | 第87-88页 |
| ·建立稳定表达细胞系 | 第88页 |
| ·检测稳定细胞系中NS2蛋白的表达 | 第88-89页 |
| ·NS2蛋白互补实验 | 第89页 |
| ·实验结果 | 第89-92页 |
| ·NS2基因扩增与克隆 | 第89页 |
| ·NS2真核表达质粒构建与鉴定 | 第89-91页 |
| ·筛选稳定表达的细胞系 | 第91页 |
| ·NS2抑制CPE | 第91-92页 |
| ·讨论 | 第92-99页 |
| 研究总结 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-116页 |
| 附录 | 第116-123页 |
| 硕、博连读期间发表的论文 | 第123-125页 |
| 致谢 | 第125页 |