| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-15页 |
| 缩略词表(Abbreviation) | 第15-17页 |
| 第一章 果树病毒的研究进展 | 第17-34页 |
| ·苹果茎沟病毒和苹果褪绿叶斑病毒的分子生物学特性研究 | 第17-19页 |
| ·病毒分子变异研究的常用技术—单链构象多态性(Single-Strand Conformation Polymorphism,SSCP)分析 | 第19-21页 |
| ·病毒在寄主中的定位分布检测技术研究 | 第21-23页 |
| ·高温非生物因子诱导寄主获得抗性机理 | 第23-25页 |
| ·热处理和茎尖脱除病毒机理的研究 | 第25-29页 |
| ·热处理脱病毒机理的研究 | 第26-28页 |
| ·茎尖培养脱病毒机理研究 | 第28-29页 |
| ·抑制消减杂交技术和表达序列标签(ESTs)技术在植物基因表达研究中的应用 | 第29-32页 |
| ·目的和意义 | 第32-34页 |
| 第二章 两种线状病毒的分子变异研究 | 第34-78页 |
| ·前言 | 第34-35页 |
| ·研究材料 | 第35-37页 |
| ·梨和苹果样品 | 第35页 |
| ·核果类样品 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35-36页 |
| ·RT-PCR引物的设计及合成引物 | 第36-37页 |
| ·研究方法 | 第37-44页 |
| ·双抗夹心法(Double Antibody Sandwich-Enzyme Linked Immunosorbent Assay,DAS-ELISA) | 第37页 |
| ·CTAB法提取总RNA | 第37页 |
| ·Trizol法提取总RNA | 第37-38页 |
| ·SuperScript~(TM) Ⅲ One-Step RT-PCR | 第38页 |
| ·试管捕捉RT-PCR(TC-RT-PCR) | 第38-40页 |
| ·一步法多重PCR检测体系 | 第40页 |
| ·PCR产物的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE) | 第40-41页 |
| ·单链构象多态性(Single-Strand Conformation Polymorphism,SSCP)分析 | 第41页 |
| ·DNA片段的回收与纯化 | 第41-42页 |
| ·连接 | 第42页 |
| ·大肠杆菌JM109感受态细胞的制备及转化 | 第42-43页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第43页 |
| ·质粒DNA酶切鉴定 | 第43页 |
| ·克隆和序列分析 | 第43-44页 |
| ·结果和分析 | 第44-76页 |
| ·梨和苹果四种主要病毒的检测结果 | 第44-48页 |
| ·ACLSV、ASGV、ASPV和ApMV的DAS-ELISA检测结果 | 第44页 |
| ·CTAB和Trizol法提取总RNA的电泳检测结果 | 第44-46页 |
| ·苹果上四种病毒的多重RT-PCR检测结果 | 第46-47页 |
| ·ELISA和多重RT-PCR法检测苹果上四种病毒的检测效果比较 | 第47-48页 |
| ·苹果和梨的ACLSV不同分离物3′端基因克隆及序列分析 | 第48-72页 |
| ·苹果和梨的ACLSV不同分离物3′端基因的RT-PCR检测结果 | 第48-49页 |
| ·ACLSV的3′端基因的RT-PCR产物的阳性克隆鉴定结果 | 第49-50页 |
| ·来源于加拿大ACLSV分离物的3′端基因的核苷酸序列分析 | 第50-53页 |
| ·来源于加拿大ACLSV分离物的C端CP基因的氨基酸序列分析 | 第53-56页 |
| ·来源于中国ACLSV分离物的3′端基因的核苷酸序列分析 | 第56-60页 |
| ·来源于中国ACLSV分离物的C端CP基因的氨基酸序列分析 | 第60-63页 |
| ·来源于砂梨的ACLSV分离物的PCR-SSCP分析结果 | 第63页 |
| ·来源于砂梨的ACLSV分离物内部的遗传变异分析结果 | 第63-72页 |
| ·One-step RT-PCR和嫁接‘Kwanzan'的生物学法检测CGRM的结果 | 第72-74页 |
| ·CGRMV不同分离物CP基因克隆及序列分析 | 第74-76页 |
| ·CGRMV不同分离物CP基因的RT-PCR产物的阳性克隆鉴定结果 | 第74页 |
| ·CGRMV分离物的CP基因编码的氨基酸序列分析 | 第74-76页 |
| ·结论与讨论 | 第76-78页 |
| 第三章 热处理对病毒在砂梨离体植株内分布的影响 | 第78-84页 |
| ·前言 | 第78页 |
| ·研究材料 | 第78-79页 |
| ·砂梨样品 | 第78-79页 |
| ·培养基 | 第79页 |
| ·杂交检测的主要试剂 | 第79页 |
| ·研究方法 | 第79-80页 |
| ·脱毒材料的处理 | 第79页 |
| ·试管苗准备 | 第79页 |
| ·变温热处理 | 第79页 |
| ·组织印迹杂交检测 | 第79-80页 |
| ·结果与分析 | 第80-82页 |
| ·ACLSV和ASGV在砂梨离体植株中的分布特点 | 第80-81页 |
| ·变温34℃/42℃处理50d对ACLSV和ASGV在梨离体植株中分布的影响 | 第81-82页 |
| ·结论与讨论 | 第82-84页 |
| 第四章 热处理对梨离体植株基因表达的影响 | 第84-120页 |
| ·前言 | 第84-85页 |
| ·研究材料 | 第85页 |
| ·梨离体植株材料 | 第85页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第85页 |
| ·研究方法 | 第85-95页 |
| ·梨离体植株的热处理 | 第85页 |
| ·总RNA的提取及mRNA的分离 | 第85-87页 |
| ·抑制差减杂交 | 第87-92页 |
| ·ds cDNA合成 | 第88-89页 |
| ·Rsa Ⅰ酶切 | 第89-90页 |
| ·接头连接 | 第90-91页 |
| ·差减杂交 | 第91-92页 |
| ·两次PCR选择性扩增 | 第92页 |
| ·差减文库生成 | 第92-93页 |
| ·差减文库筛选 | 第93-95页 |
| ·插入片段的扩增及反向Southern斑点杂交膜的制备 | 第93页 |
| ·反向Southern斑点杂交 | 第93-94页 |
| ·差异表达克隆选取 | 第94页 |
| ·序列同源性检索 | 第94-95页 |
| ·结果与分析 | 第95-117页 |
| ·差减文库构建 | 第95-100页 |
| ·Tester和Driver样品总RNA质量检测 | 第95页 |
| ·mRNA质量检测 | 第95-96页 |
| ·接头连接及连接效率检测 | 第96-97页 |
| ·差减杂交产物的选择性PCR扩增结果 | 第97-98页 |
| ·SSH cDNA差减文库质量评价 | 第98-100页 |
| ·差异表达片段的反向Southern斑点杂交筛选结果 | 第100-101页 |
| ·差异表达片段的序列分析及功能分类 | 第101-117页 |
| ·差异表达片段的序列分析 | 第101-115页 |
| ·差异表达片段的基因功能分类 | 第115-117页 |
| ·讨论与小结 | 第117-120页 |
| 参考文献 | 第120-133页 |
| 附录A:主要试剂及溶液的配制 | 第133-136页 |
| 附录B:差减文库所用接头和引物信息 | 第136-137页 |
| 附录C:PMD18-T载体信息 | 第137-138页 |
| 附录D:pGEM-T Easy载体信息图 | 第138-139页 |
| 附录E:研究生在读期间已发表或已接受的文章 | 第139-140页 |
| 致谢 | 第140页 |
