| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-11页 |
| 目录 | 第11-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-52页 |
| 1.植物的遗传转化研究进展 | 第17-29页 |
| ·遗传转化的受体选择 | 第17-19页 |
| ·愈伤组织受体系统 | 第17-18页 |
| ·直接分化受体系统 | 第18页 |
| ·原生质体受体系统 | 第18页 |
| ·种质受体系统 | 第18-19页 |
| ·遗传转化的方法 | 第19-23页 |
| ·农杆菌介导法 | 第19-20页 |
| ·基因枪法 | 第20-21页 |
| ·花粉管导入法 | 第21-22页 |
| ·其它方法 | 第22-23页 |
| ·转基因植物中的标记基因 | 第23-26页 |
| ·植物遗传转化中常用的标记基因 | 第23-24页 |
| ·标记基因的安全性问题 | 第24-25页 |
| ·转基因作物中标记基因的消除 | 第25-26页 |
| ·外源基因在转基因后代中的遗传行为 | 第26-28页 |
| ·转基因植株的遗传行为 | 第26页 |
| ·转基因沉默及对策 | 第26-28页 |
| ·转基因植物的商业化生产 | 第28-29页 |
| 2.褪黑素的研究进展 | 第29-50页 |
| ·褪黑素的生物化学性质 | 第30-37页 |
| ·褪黑素的生物来源 | 第30页 |
| ·褪黑素的合成与代谢 | 第30-35页 |
| ·褪黑素的结构 | 第30-31页 |
| ·褪黑素的合成 | 第31-34页 |
| ·褪黑素的代谢 | 第34-35页 |
| ·褪黑素含量的分析 | 第35-37页 |
| ·褪黑素的生理功能及意义 | 第37-44页 |
| ·褪黑素的作用机制—受体与信号转导途径 | 第37-39页 |
| ·褪黑素的生理功能 | 第39-42页 |
| ·褪黑素的应用 | 第42-43页 |
| ·褪黑素应用的安全性 | 第43-44页 |
| ·植物中的褪黑素的研究进展 | 第44-50页 |
| ·植物中褪黑素的含量 | 第44-47页 |
| ·植物中褪黑素合成 | 第47-48页 |
| ·植物中褪黑素的功能 | 第48-50页 |
| 3.本研究的目的和意义 | 第50-52页 |
| 第二章 AANAT-HIOMT基因植物表达载体结构的验证 | 第52-62页 |
| 1.材料与方法 | 第52-55页 |
| ·材料 | 第52-53页 |
| ·菌株 | 第52页 |
| ·载体 | 第52页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第52页 |
| ·主要试剂的配制 | 第52-53页 |
| ·细菌培养用LB液体培养基 | 第52页 |
| ·农杆菌培养用YEB液体培养基 | 第52页 |
| ·常用抗生素的配制 | 第52-53页 |
| ·大肠杆菌感受态溶液的配制 | 第53页 |
| ·质粒DNA小量提取溶液的配制 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-55页 |
| ·农杆菌质粒DNA小量提取 | 第53-54页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制作 | 第54页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第54页 |
| ·转化子的鉴定 | 第54-55页 |
| 2.结果 | 第55-61页 |
| ·pYXu55植物表达载体的验证 | 第55-56页 |
| ·测序结果及质粒图谱修正 | 第56-61页 |
| 3.讨论 | 第61-62页 |
| 第三章 褪黑素合成酶基因对烟草(秦烟95)的遗传转化 | 第62-86页 |
| 1.材料与方法 | 第62-75页 |
| ·实验材料 | 第62-65页 |
| ·植物材料 | 第62页 |
| ·植物转化载体 | 第62页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第62-63页 |
| ·所需引物 | 第63页 |
| ·主要试剂的配制 | 第63-65页 |
| ·培养基配制 | 第63-64页 |
| ·常用抗生素的配制 | 第64页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第64页 |
| ·植物DNA提取溶液 | 第64-65页 |
| ·Southern转移,杂交所需溶液 | 第65页 |
| ·植物RNA提取溶液 | 第65页 |
| ·实验方法 | 第65-75页 |
| ·受体植物(秦烟95)无菌苗获得 | 第65-66页 |
| ·秦烟95对庆大霉素的敏感性测定 | 第66页 |
| ·含有YXu55和pZP122的农杆菌转化秦烟95及转化材料的培养 | 第66-68页 |
| ·农杆菌菌株的培养 | 第66页 |
| ·农杆菌感染 | 第66-67页 |
| ·烟草转化材料的培养及筛选 | 第67页 |
| ·假定烟草转基因苗的培养 | 第67页 |
| ·烟草转基因苗的炼苗移栽 | 第67-68页 |
| ·转基因烟草的鉴定 | 第68-75页 |
| ·烟草基因组DNA的提取 | 第68页 |
| ·转基因烟草的PCR检测 | 第68-70页 |
| ·转基因烟草的Southern blot检测 | 第70-74页 |
| ·转基因烟草的RT-PCR检测 | 第74-75页 |
| 2.结果与分析 | 第75-83页 |
| ·农杆菌介导的AANAT-HIOMT基因对烟草的遗传转化 | 第75-79页 |
| ·受体植物庆大霉素抗性浓度的确定 | 第75-76页 |
| ·基因转化条件的确定 | 第76-78页 |
| ·外植体预培养时间对转化效率的影响 | 第76-77页 |
| ·农杆菌菌液浓度和浸染时间对转化的影响 | 第77-78页 |
| ·转AANAT-HIOMT基因烟草的获得 | 第78-79页 |
| ·转基因植株的分子生物学鉴定 | 第79-83页 |
| ·转基因植物的PCR检测 | 第79-81页 |
| ·转基因植物的Southern blot检测 | 第81-82页 |
| ·转基因植物的RT-PCR检测 | 第82-83页 |
| 3.讨论 | 第83-86页 |
| 第四章 贯叶连翘离体再生体系的建立及转褪黑素合成酶基因再生植株的获得 | 第86-103页 |
| (一).贯叶连翘离体再生体系的建立 | 第87-92页 |
| 1.材料与方法 | 第87-88页 |
| ·实验材料 | 第87页 |
| ·实验方法 | 第87-88页 |
| ·无菌苗体系建立 | 第87页 |
| ·不同激素组合对愈伤组织诱导的影响 | 第87页 |
| ·不同激素组合对不定芽形成的影响 | 第87页 |
| ·6-BA与NAA浓度对芽增殖的影响 | 第87-88页 |
| ·不同激素组合对贯叶连翘再生根的影响 | 第88页 |
| 2.结果与分析 | 第88-92页 |
| ·不同激素组合对愈伤组织诱导的影响 | 第88-89页 |
| ·不同激素种类及配比对不定芽形成的影响 | 第89页 |
| ·6-BA与NAA浓度对芽增殖的影响 | 第89-90页 |
| ·不同激素组合对生根的影响 | 第90页 |
| ·贯叶连翘的离体再生结果 | 第90-92页 |
| (二).贯叶连翘的遗传转化和转基因植株的获得 | 第92-100页 |
| 1.材料与方法 | 第92-94页 |
| ·实验材料 | 第92页 |
| ·植物材料 | 第92页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第92页 |
| ·实验方法 | 第92-94页 |
| ·贯叶连翘对庆大霉素的敏感性测定 | 第92页 |
| ·受体植物的培养及转化 | 第92-94页 |
| ·农杆菌菌株的培养 | 第92页 |
| ·农杆菌感染 | 第92-93页 |
| ·贯叶连翘转化材料的培养及筛选 | 第93页 |
| ·假定的贯叶连翘转基因苗的培养 | 第93页 |
| ·贯叶连翘转基因苗的炼苗移栽 | 第93-94页 |
| ·转基因贯叶连翘的分子生物学鉴定 | 第94页 |
| 2.结果与分析 | 第94-100页 |
| ·农杆菌介导的AANAT-HIOMT基因对贯叶连翘的遗传转化 | 第94-97页 |
| ·受体材料对庆大霉素的抗性 | 第94页 |
| ·基因转化条件的确定 | 第94-97页 |
| ·外植体预培养时间对转化效率的影响 | 第94-95页 |
| ·农杆菌菌液浓度和浸染时间对转化的影响 | 第95-97页 |
| ·转基因贯叶连翘的培养和筛选结果 | 第97页 |
| ·转基因贯叶连翘的分子生物学鉴定 | 第97-100页 |
| ·PCR检测 | 第97-99页 |
| ·Southern blot检测 | 第99页 |
| ·转基因贯叶连翘的RT-PCR检测 | 第99-100页 |
| (三).本章讨论 | 第100-103页 |
| 第五章 RP-HPLC法测定转基因植株中褪黑激素含量 | 第103-113页 |
| 1.材料与方法 | 第103-106页 |
| ·仪器、材料与试剂 | 第103页 |
| ·溶液配制 | 第103-104页 |
| ·供试溶液 | 第103-104页 |
| ·对照品溶液 | 第104页 |
| ·色谱条件 | 第104页 |
| ·褪黑素测定HPLC线性关系 | 第104-105页 |
| ·线性关系考察 | 第104页 |
| ·样品最低检测量试验 | 第104-105页 |
| ·干扰性试验 | 第105页 |
| ·精密度实验 | 第105页 |
| ·稳定性实验 | 第105页 |
| ·重复性试验 | 第105页 |
| ·加样回收率试验 | 第105页 |
| ·样品的测定 | 第105-106页 |
| 2.结果与分析 | 第106-111页 |
| ·色谱条件选择 | 第106页 |
| ·褪黑素测定的HPLC线性关系 | 第106-110页 |
| ·线性关系考察 | 第106页 |
| ·样品最低检测量试验 | 第106页 |
| ·干扰性试验 | 第106-109页 |
| ·精密度实验结果 | 第109页 |
| ·稳定性实验结果 | 第109页 |
| ·重复性试验 | 第109-110页 |
| ·加样回收率试验 | 第110页 |
| ·样品的测定 | 第110-111页 |
| 3.讨论 | 第111-113页 |
| 第六章 转褪黑素合成酶基因植物的抗氧化系统变化 | 第113-126页 |
| 1.材料与方法 | 第113-118页 |
| ·仪器、材料与试剂 | 第113-114页 |
| ·方法 | 第114-118页 |
| ·超氧化物歧化酶(SOD)的提取及活性测定 | 第114页 |
| ·过氧化物酶(POD)的提取及活性测定 | 第114-115页 |
| ·过氧化氢酶(CAT)的提取及活性测定 | 第115-116页 |
| ·丙二醛(MDA)含量的测定 | 第116-117页 |
| ·谷胱甘肽(GSH)含量的测定 | 第117页 |
| ·总抗氧化能力的测定 | 第117-118页 |
| ·统计分析 | 第118页 |
| 2.结果与分析 | 第118-123页 |
| ·超氧化物歧化酶(SOD)的活性 | 第118-119页 |
| ·过氧化物酶(POD)的活性 | 第119-120页 |
| ·过氧化氢酶(CAT)的活性 | 第120-121页 |
| ·丙二醛(MDA)含量变化 | 第121页 |
| ·谷胱甘肽(GSH)含量变化 | 第121-123页 |
| ·总抗氧化能力 | 第123页 |
| 3.讨论 | 第123-126页 |
| 论文主要结论、创新点与展望 | 第126-130页 |
| 参考文献 | 第130-143页 |
| 攻读博士期间的科研成果 | 第143-145页 |
| 致谢 | 第145页 |
