| 目录 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-26页 |
| 1 马铃薯三种主要的病毒 | 第9-14页 |
| ·马铃薯x病毒(Pvx) | 第9-11页 |
| ·马铃薯Y病毒(PVY) | 第11-12页 |
| ·马铃薯卷叶病毒(PLRV) | 第12-14页 |
| 2 RNAi | 第14-19页 |
| ·RNAi的发现 | 第14-16页 |
| ·RNAi的分子机制和作用特点 | 第16-18页 |
| ·RNAi的分子机制 | 第16-17页 |
| ·RNAi的作用特点 | 第17-18页 |
| ·RNAi在植物抗病毒中的应用 | 第18-19页 |
| 3 RNAi载体的构建和评测系统 | 第19-25页 |
| ·TC-RT-PCR | 第19-20页 |
| ·Overlap PCR | 第20-22页 |
| ·应用Gateway技术构建RNAi载体 | 第22-24页 |
| ·农杆菌介导的瞬时表达(Agroinfiltration) | 第24-25页 |
| 本研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 第二章 用于同时抗三种病毒基因工程的RNAi载体构建 #24与干涉效果测定 | 第26-52页 |
| 1 TC-RT-PCR克隆PVX、PVY、PLRV外壳蛋白基因 | 第26-32页 |
| ·材料和方法 | 第26-30页 |
| ·材料 | 第26-27页 |
| ·方法 | 第27-30页 |
| ·结果与分析 | 第30-32页 |
| ·TC-RT-PCR克隆PVX外壳蛋白基因 | 第30-31页 |
| ·TC-RT-PCR克隆PVY外壳蛋白基因 | 第31页 |
| ·TC-RT-PCR克隆PLRV外壳蛋白基因 | 第31-32页 |
| ·连接 | 第32页 |
| ·测序 | 第32页 |
| ·小结 | 第32页 |
| 2 Overlap-PCR拼接三种病毒CP基因片段 | 第32-36页 |
| ·材料与方法 | 第32-35页 |
| ·材料 | 第32-33页 |
| ·方法 | 第33-35页 |
| ·结果与分析 | 第35-36页 |
| ·Y300-rh、R327-rh电泳检测 | 第35页 |
| ·Oerlap-PCR扩增得到的融合片段Y300+R327 | 第35页 |
| ·Y300+R327-rh、X302-rh电泳检测 | 第35-36页 |
| ·Oerlap-PCR扩增得到的融合片段Y300+R327+X302 | 第36页 |
| ·小结 | 第36页 |
| 3 Gateway技术构建RNAi载体 | 第36-46页 |
| ·材料与方法 | 第36-42页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·方法 | 第37-42页 |
| ·结果分析 | 第42-46页 |
| ·含attB位点的PCR产物电泳检测 | 第42-43页 |
| ·BP反应阳性克隆检测 | 第43-44页 |
| ·中间载体测序 | 第44页 |
| ·LR反应阳性克隆检测 | 第44页 |
| ·表达载体酶切检测 | 第44-45页 |
| ·转化农杆菌菌落PCR检测 | 第45-46页 |
| ·小结 | 第46页 |
| 4 农杆菌渗入法介导的瞬时表达检测载体干涉效果 | 第46-52页 |
| ·材料和方法 | 第46-49页 |
| ·材料 | 第46-47页 |
| ·方法 | 第47-49页 |
| ·结果与分析 | 第49页 |
| ·小结 | 第49-52页 |
| 第三章 讨论 | 第52-61页 |
| 1 构建三价RNAi载体用于RNAi介导的广谱病毒抗性研究 | 第52-54页 |
| 2 TC-RT-PCR克隆三种外壳蛋白序列和比对分析 | 第54页 |
| 3 Overlap-PCR反应体系优化及在多价干涉载体构建中的应用 | 第54-55页 |
| ·Overlap-PCR技术用于多价RNAi载体构建 | 第54-55页 |
| ·Overlap-PCR条件优化 | 第55页 |
| ·反应过程 | 第55页 |
| ·模板浓度 | 第55页 |
| ·退火温度的选择 | 第55页 |
| 4 Gateway cloning system | 第55-57页 |
| ·Gateway Cloning System构建RNAi载体 | 第55-56页 |
| ·Gateway技术构建RNA干涉载体注意事项 | 第56-57页 |
| 5 瞬时表达评测RNAi载体的干涉效果 | 第57-59页 |
| 6 RNAi载体的构建和评测系统 | 第59-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 攻读硕士期间论文发表情况 | 第69-70页 |
| 附录1 | 第70-71页 |
| 附录2 | 第71-73页 |
| 附录3 | 第73-76页 |
