| 摘要 | 第1-14页 |
| Abstract | 第14-17页 |
| 英文缩略表 | 第17-18页 |
| 第一部分 文献综述 | 第18-52页 |
| 第一章 成骨生长肽研究进展 | 第18-25页 |
| ·成骨生长肽的发现简史 | 第18-19页 |
| ·OGP的一级结构与活性成分 | 第19页 |
| ·成骨生长肽的生物学活性 | 第19-20页 |
| ·成骨生长肽与碱性磷酸酶(ALP) | 第20页 |
| ·成骨生长肽与血清骨钙素(BGP) | 第20页 |
| ·成骨生长肽与Ⅰ型胶原MRNA、BGP MRNA表达 | 第20-21页 |
| ·成骨生长肽的功能 | 第21-22页 |
| ·成骨活性 | 第21-22页 |
| ·OGP的促进骨折愈合作用 | 第22页 |
| ·有丝分裂原活性 | 第22页 |
| ·成骨生长肽的临床应用前景 | 第22-25页 |
| ·成骨生长肽与骨质疏松 | 第23页 |
| ·成骨生长肽在骨创伤中的应用 | 第23-24页 |
| ·成骨生长肽在矫形外科手术中的应用 | 第24-25页 |
| 第二章 成骨细胞及骨髓基质干细胞研究进展 | 第25-41页 |
| ·骨髓基质干细胞 | 第25-33页 |
| ·骨髓基质干细胞的表面标记 | 第25页 |
| ·骨髓基质干细胞生物学特性 | 第25-26页 |
| ·骨髓基质干细胞分离培养 | 第26-29页 |
| ·骨髓基质干细胞向成骨方向分化 | 第29-33页 |
| ·地塞米松 | 第29-30页 |
| ·雌激素 | 第30页 |
| ·1,25(OH)_2 D_3 | 第30-31页 |
| ·甲状旁腺激素(PTH) | 第31页 |
| ·骨形态发生蛋白(BMP) | 第31-32页 |
| ·碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) | 第32页 |
| ·转化生长因子 | 第32页 |
| ·胰岛素养生长因子 | 第32-33页 |
| ·瘦素 | 第33页 |
| ·成骨生长肽 | 第33页 |
| ·成骨细胞 | 第33-41页 |
| ·成骨细胞的来源 | 第33-34页 |
| ·成骨细胞功能 | 第34页 |
| ·成骨细胞分化标志物 | 第34-35页 |
| ·碱性磷酸酶(alkaline phosphatase;简称ALP) | 第35页 |
| ·骨桥蛋白(osteopontin;简称OPN) | 第35页 |
| ·骨钙蛋白(BGP) | 第35页 |
| ·成骨细胞分化调控途径 | 第35-41页 |
| ·Ihh信号传导与成骨分化 | 第35-36页 |
| ·TGF-β/BMPs信号传导与成骨分化 | 第36-38页 |
| ·MAPK信号传导途径与成骨分化 | 第38-39页 |
| ·Wnt/β-catenin信号传导途径与成骨细胞分化 | 第39页 |
| ·FGFs信号传导与成骨分化 | 第39-41页 |
| 第三章 细胞微囊技术研究进展 | 第41-52页 |
| ·微囊材料 | 第41-42页 |
| ·目前医学领域应用较为广泛微囊种类 | 第42-44页 |
| ·海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠 | 第42-43页 |
| ·海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠 | 第43-44页 |
| ·微囊发生器的研制 | 第44-45页 |
| ·影响微囊性能的主要因素 | 第45页 |
| ·功能细胞微囊技术在治疗领域的应用 | 第45-48页 |
| ·微囊化胰岛移植治疗糖尿病 | 第46页 |
| ·微囊化肝细胞治疗肝脏疾病 | 第46页 |
| ·微囊化细胞治疗中枢神经系统疾病 | 第46-47页 |
| ·微囊化细胞治疗甲状旁腺功能低下症 | 第47页 |
| ·微囊化细胞在骨科领域的应用 | 第47-48页 |
| ·微囊化细胞在其他医学领域的应用 | 第48页 |
| ·微囊化细胞技术在基因治疗领域的应用 | 第48-50页 |
| ·血友病基因治疗 | 第48-49页 |
| ·帕金森病基因治疗 | 第49页 |
| ·肿瘤基因治疗 | 第49-50页 |
| ·细胞微囊移植存在的问题 | 第50-52页 |
| 第二部分 试验研究 | 第52-130页 |
| 第四章 奶牛骨钙素基因的克隆与原核表达 | 第52-67页 |
| ·研究背景 | 第52-53页 |
| ·材料与方法 | 第53-61页 |
| ·试验动物 | 第53页 |
| ·主要试验材料 | 第53页 |
| ·主要仪器设备 | 第53-54页 |
| ·奶牛骨钙素基因克隆及同义突变 | 第54-58页 |
| ·总RNA的提取 | 第54页 |
| ·RT-PCR扩增奶牛BGP基因 | 第54-55页 |
| ·成熟蛋白基因的定点同义突变 | 第55-56页 |
| ·目的序列与载体的连接 | 第56页 |
| ·感受态菌的制备 | 第56-57页 |
| ·重组质粒的转化 | 第57页 |
| ·重组质粒的小量制备(碱裂解法) | 第57-58页 |
| ·重组质粒双酶切鉴定 | 第58页 |
| ·重组质粒的序列测定 | 第58页 |
| ·表达载体构建 | 第58页 |
| ·连接产物的转化 | 第58-59页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第59页 |
| ·重组表达菌的诱导 | 第59页 |
| ·表达蛋白检测 | 第59-60页 |
| ·SDS-PAGE样品的制备 | 第59-60页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电流(SDS-PAGE) | 第60页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第60-61页 |
| ·免疫印记(Western-blot)分析 | 第61页 |
| ·结果 | 第61-62页 |
| ·cDNA的扩增与克隆 | 第61-62页 |
| ·骨钙素蛋白基因同义定点突变 | 第62页 |
| ·重组质粒序列的测定 | 第62页 |
| ·表达产物SDS-PAGE电泳 | 第62页 |
| ·Western-blot方法检测多克隆抗体 | 第62页 |
| ·讨论 | 第62-67页 |
| 第五章 成骨生长肽对奶牛骨髓基质干细胞促成骨分化研究 | 第67-88页 |
| ·研究背景 | 第67-68页 |
| ·材料与方法 | 第68-77页 |
| ·试验动物 | 第68页 |
| ·主要试验试剂及配制 | 第68-70页 |
| ·主要试验仪器和设备 | 第70-71页 |
| ·骨髓基质干细胞的培养 | 第71-72页 |
| ·原代培养 | 第71页 |
| ·传代培养 | 第71-72页 |
| ·骨髓基质干细胞体外培养生物学特性观察 | 第72-73页 |
| ·细胞形态观察 | 第72页 |
| ·矿化结节染色 | 第72页 |
| ·骨钙素mRNA表达 | 第72-73页 |
| ·骨髓基质干细胞增值的检测 | 第73-74页 |
| ·成骨生长肽对ALP及骨钙素活性的影响 | 第74页 |
| ·成骨生长肽对矿化结节的影响 | 第74-75页 |
| ·Western-blot检测eNOS | 第75-76页 |
| ·SDS-PAGE样品的制备 | 第75页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电流(SDS-PAGE) | 第75-76页 |
| ·免疫印记(Western-blot)分析 | 第76页 |
| ·L-NAME阻断OGP促进骨髓基质干细胞分化 | 第76-77页 |
| ·数据处理 | 第77页 |
| ·实验结果 | 第77-78页 |
| ·细胞形态观察及生物学特性 | 第77页 |
| ·OGP对奶牛骨髓机制干细胞的增殖影响 | 第77-78页 |
| ·OGP调节奶牛骨髓基质干细胞分化与矿化 | 第78页 |
| ·OGP对eNOS表达的影响 | 第78页 |
| ·讨论 | 第78-88页 |
| 第六章 OGP对奶牛成骨细胞的作用研究 | 第88-106页 |
| ·研究背景 | 第88-89页 |
| ·材料与方法 | 第89-97页 |
| ·试验动物: | 第89页 |
| ·主要试验试剂及配制 | 第89页 |
| ·主要试验仪器和设备 | 第89页 |
| ·奶牛成骨细胞培养 | 第89-90页 |
| ·成骨细胞鉴定 | 第90-91页 |
| ·细胞增殖的检测 | 第91页 |
| ·细胞内ALP活性检测 | 第91-92页 |
| ·细胞钙化结节的测定 | 第92页 |
| ·成骨细胞骨钙素测定 | 第92-93页 |
| ·shRNA表达载体构建 | 第93页 |
| ·Osterix-RNAi阻断OGP促进奶牛成骨细胞分化 | 第93-97页 |
| ·数据处理 | 第97页 |
| ·实验结果 | 第97-98页 |
| ·成骨细胞鉴定 | 第97页 |
| ·OGP对成骨细胞增殖活性的影响 | 第97-98页 |
| ·OGP对细胞上清液中ALP活性的影响 | 第98页 |
| ·OGP对奶牛成骨细胞骨钙素及矿化的影响 | 第98页 |
| ·OGP对osterix表达的影响 | 第98页 |
| ·Osterix-RNAi阻断OGP诱导的成骨细胞分化 | 第98页 |
| ·讨论 | 第98-106页 |
| 第七章 氧自由基对微囊化细胞体内移植增殖的影响 | 第106-118页 |
| ·研究背景 | 第106-107页 |
| ·材料与方法 | 第107-109页 |
| ·试验动物 | 第107页 |
| ·试验材料 | 第107-108页 |
| ·试验仪器设备 | 第108页 |
| ·细胞培养 | 第108-109页 |
| ·微囊化细胞制备 | 第109页 |
| ·细胞微囊移植 | 第109页 |
| ·血清指标的测定 | 第109页 |
| ·AO/EB染色 | 第109页 |
| ·数据处理 | 第109页 |
| ·实验结果 | 第109-111页 |
| ·微囊细胞体内增殖 | 第109-110页 |
| ·血清氧自由基及抗氧化物酶测定 | 第110页 |
| ·微囊化细胞移植体内活性观察 | 第110-111页 |
| ·讨论 | 第111-118页 |
| 第八章 OGP转基因细胞微囊体内及体外增殖及分泌特性研究 | 第118-130页 |
| ·研究背景 | 第118-119页 |
| ·材料与方法 | 第119-121页 |
| ·试验动物 | 第119页 |
| ·主要试验试剂 | 第119页 |
| ·试验仪器设备 | 第119页 |
| ·OGP基因稳定转染 | 第119页 |
| ·细胞微囊制备 | 第119页 |
| ·细胞微囊培养 | 第119-120页 |
| ·骨质疏松模型建立 | 第120页 |
| ·细胞微囊移植 | 第120页 |
| ·微囊细胞增殖检测 | 第120页 |
| ·AO/EB染色 | 第120页 |
| ·OGP检测 | 第120页 |
| ·测量骨密度及收集血样 | 第120页 |
| ·指标测定 | 第120-121页 |
| ·数据处理 | 第121页 |
| ·实验结果 | 第121-122页 |
| ·OGP转基因细胞稳定表达筛选 | 第121页 |
| ·OGP转基因细胞微囊体外增殖及分泌 | 第121页 |
| ·OGP转基因细胞微囊在骨质疏松模型体内增殖分泌 | 第121页 |
| ·醋酸泼尼松龙对骨密度及血清碱性磷酸酶的影响 | 第121-122页 |
| ·醋酸泼尼松龙对血清氧自由基及SOD活性的影响 | 第122页 |
| ·讨论 | 第122-130页 |
| 结语 | 第130-131页 |
| 参考文献 | 第131-149页 |
| 致谢 | 第149-150页 |
| 附录 | 第150页 |
