| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第10-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-31页 |
| ·PRRSV的研究进展 | 第13-25页 |
| ·PRRSV的病原特征 | 第13-15页 |
| ·PRRSV的分子生物学特征 | 第15-23页 |
| ·PRRSV的感染与防治 | 第23-25页 |
| ·脂筏的构成及生物学功能 | 第25-31页 |
| ·脂筏的结构及特性 | 第25-27页 |
| ·脂筏的种类 | 第27页 |
| ·脂筏的功能 | 第27-29页 |
| ·脂筏在微生物感染中的作用 | 第29-31页 |
| 2 研究目的与意义 | 第31-32页 |
| 3 材料与方法 | 第32-47页 |
| ·试验材料 | 第32-34页 |
| ·细胞、毒株 | 第32页 |
| ·引物 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·培养基及主要试剂的配制 | 第32-33页 |
| ·主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第33-34页 |
| ·试验方法 | 第34-47页 |
| ·病毒的培养与收集 | 第34-35页 |
| ·半数细胞培养物感染量(TCID50)的测定 | 第35页 |
| ·病毒纯化及检测 | 第35页 |
| ·生物素标记病毒 | 第35-36页 |
| ·甲基-β-环糊精对MARC-145细胞的毒性测定 | 第36页 |
| ·细胞膜中胆固醇的去除 | 第36页 |
| ·细胞膜中胆固醇的补充 | 第36-37页 |
| ·细胞膜中胆固醇含量的测定 | 第37页 |
| ·RNA提取 | 第37-38页 |
| ·逆转录PCR | 第38页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第38-39页 |
| ·流式细胞计数 | 第39页 |
| ·共聚焦显微技术 | 第39页 |
| ·病毒穿透细胞 | 第39-40页 |
| ·病毒侵入试验 | 第40页 |
| ·病毒释放试验 | 第40页 |
| ·脂筏与病毒增殖相关性试验 | 第40页 |
| ·目的外源基因的PCR扩增 | 第40-41页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第41页 |
| ·PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第41页 |
| ·PCR产物或酶切产物回收与纯化 | 第41-42页 |
| ·外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第42页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第42-43页 |
| ·连接产物的转化 | 第43页 |
| ·质粒的小量制备 | 第43页 |
| ·质粒的大量制备 | 第43-44页 |
| ·质粒DNA的定量 | 第44-45页 |
| ·重组质粒(阳性质粒)的鉴定 | 第45页 |
| ·质粒转染(脂质体介导转染法) | 第45页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第45-46页 |
| ·统计学方法 | 第46-47页 |
| 4 结果与分析 | 第47-58页 |
| ·脂筏在PRRSV感染中的作用 | 第47页 |
| ·细胞膜中胆固醇在PRRSV感染中的作用研究 | 第47-54页 |
| ·MβCD处理对MARC-145细胞的毒性检测 | 第47-48页 |
| ·MβCD萃取MARC-145细胞膜胆固醇的能力检测 | 第48页 |
| ·细胞膜中胆固醇缺失抑制PRRSV感染 | 第48-51页 |
| ·细胞膜中胆固醇缺失减弱PRRSV侵入细胞的能力 | 第51-53页 |
| ·细胞膜中胆固醇缺失增强PRRSV释放能力但降低病毒感染力 | 第53-54页 |
| ·与PRRSV胞吞过程相关蛋白的研究 | 第54-58页 |
| ·真核表达质粒的构建与鉴定 | 第54-55页 |
| ·小窝蛋白-1对PRRSV感染的作用不显著 | 第55页 |
| ·网格蛋白(clathrin)可影响PRRSV感染 | 第55-58页 |
| 5 讨论与结论 | 第58-63页 |
| ·讨论 | 第58-61页 |
| ·细胞膜中胆固醇对PRRSV侵入细胞的影响 | 第58-59页 |
| ·细胞膜中胆固醇对PRRSV释放的影响 | 第59页 |
| ·细胞膜中胆固醇对PRRSV粒子感染力的影响 | 第59-60页 |
| ·细胞膜中胆固醇对PRRSV感染MARC-145细胞的影响 | 第60页 |
| ·PRRSV侵入MARC-145细胞的胞吞途径 | 第60-61页 |
| ·脂筏在PRRSV感染MARC-145细胞中的作用 | 第61页 |
| ·结论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 附录 | 第77页 |
