| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-17页 |
| 缩略词表 | 第17-21页 |
| 第一章 文献综述 | 第21-49页 |
| 前言 | 第21页 |
| ·维生素E的生理作用 | 第21-28页 |
| ·维生素E在哺乳动物体内的作用 | 第21-22页 |
| ·维生素E在植物体内的作用 | 第22-28页 |
| ·维生素E的来源 | 第28-30页 |
| ·维生素E生物合成途径的研究 | 第30-38页 |
| ·莽草酸途径及HPP的合成 | 第32-33页 |
| ·DXP途径及GGDP、PDP的合成 | 第33-34页 |
| ·HGA的合成 | 第34-35页 |
| ·HGA与类异戊二烯基的缩合 | 第35-37页 |
| ·MPBQ和MGGBQ的甲基化 | 第37页 |
| ·环化反应 | 第37-38页 |
| ·生育酚和生育三烯酚的甲基化 | 第38页 |
| ·利用基因工程改良维生素E生物合成途径 | 第38-46页 |
| ·过量表达HPPD基因的研究 | 第39-40页 |
| ·过量表达HPT和HGGT基因的研究 | 第40-41页 |
| ·过量表达MPBQ MT基因的研究 | 第41页 |
| ·过量表达TC基因的研究 | 第41-42页 |
| ·对γ-TMT基因的研究 | 第42-43页 |
| ·多基因共同表达的研究 | 第43-46页 |
| ·本研究目的意义及技术路线 | 第46-49页 |
| ·目的意义 | 第46-47页 |
| ·技术路线 | 第47-49页 |
| 第二章 生菜维生素E合成途径关键酶基因LsHPPD和LsHPT的克隆 | 第49-78页 |
| 前言 | 第49-50页 |
| ·材料与试剂 | 第50-53页 |
| ·植物材料 | 第50页 |
| ·菌株 | 第50页 |
| ·引物序列 | 第50-51页 |
| ·试剂、试剂盒及耗材 | 第51-52页 |
| ·培养基、试剂配制 | 第52-53页 |
| ·方法 | 第53-63页 |
| ·生菜叶片总RNA的提取与检测 | 第53-54页 |
| ·LsHPPD和LsHPT基因的克隆 | 第54-62页 |
| ·生物信息学分析 | 第62-63页 |
| ·结果与分析 | 第63-76页 |
| ·生菜RNA样品的检测 | 第63-64页 |
| ·LsHPPD和LsHPT基因的克隆 | 第64-70页 |
| ·生物信息学分析 | 第70-76页 |
| ·小结 | 第76-78页 |
| 第三章 生菜LsHPPD和LsHPT基因Southern blot及表达谱分析 | 第78-115页 |
| 前言 | 第78页 |
| ·材料与试剂 | 第78-82页 |
| ·植物材料 | 第78-79页 |
| ·引物序列 | 第79页 |
| ·试剂、试剂盒及耗材 | 第79-80页 |
| ·试剂配制 | 第80-82页 |
| ·实验方法 | 第82-91页 |
| ·生菜Southern blot分析 | 第82-87页 |
| ·植株培养及处理 | 第87-88页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR检测 | 第88-90页 |
| ·维生素E含量测定 | 第90-91页 |
| ·结果与分析 | 第91-113页 |
| ·Southern blot分析 | 第91-93页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR标准曲线的制作 | 第93-95页 |
| ·HPLC标准曲线的制作 | 第95-97页 |
| ·基因表达水平及维生素E含量检测 | 第97-113页 |
| ·小结 | 第113-115页 |
| 第四章 农杆菌渗入法瞬时表达LsHPPD和LsHPT基因 | 第115-146页 |
| 前言 | 第115-116页 |
| ·材料与试剂 | 第116-119页 |
| ·植物材料 | 第116页 |
| ·菌株 | 第116页 |
| ·质粒载体 | 第116页 |
| ·引物序列 | 第116-117页 |
| ·试剂与试剂盒 | 第117-118页 |
| ·培养基配制 | 第118页 |
| ·抗生素配制 | 第118页 |
| ·农杆菌瞬时转化渗透液 | 第118-119页 |
| ·GUS染色液 | 第119页 |
| ·实验方法 | 第119-131页 |
| ·载体构建 | 第119-127页 |
| ·植物表达载体的农杆菌转化 | 第127-129页 |
| ·农杆菌渗入法转化生菜 | 第129页 |
| ·检测基因的瞬时表达 | 第129-130页 |
| ·维生素E含量的测定 | 第130-131页 |
| ·结果与分析 | 第131-145页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第131-134页 |
| ·农杆菌阳性克隆的鉴定 | 第134-136页 |
| ·GUS染色 | 第136页 |
| ·GFP检测 | 第136-137页 |
| ·RT-PCR检测 | 第137-143页 |
| ·维生素E含量测定 | 第143-145页 |
| ·小结 | 第145-146页 |
| 第五章 LsHPPD和LsHPT基因的遗传转化 | 第146-176页 |
| 前言 | 第146页 |
| ·实验材料和试剂 | 第146-150页 |
| ·植物材料 | 第146-147页 |
| ·菌株 | 第147页 |
| ·质粒载体 | 第147页 |
| ·引物序列 | 第147-148页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第148页 |
| ·培养基及溶液配制 | 第148-150页 |
| ·实验方法 | 第150-156页 |
| ·植物表达载体的农杆菌转化 | 第150-151页 |
| ·拟南芥的种植及转化 | 第151-152页 |
| ·拟南芥抗性植株的PCR检测 | 第152-153页 |
| ·生菜的遗传转化及PCR检测 | 第153-155页 |
| ·生菜Southern blot分析 | 第155-156页 |
| ·RT-PCR检测 | 第156页 |
| ·维生素E含量测定 | 第156页 |
| ·生菜T_1 代植株分析 | 第156页 |
| ·结果与分析 | 第156-175页 |
| ·农杆菌阳性克隆的鉴定 | 第156-158页 |
| ·拟南芥遗传转化分析 | 第158-162页 |
| ·生菜遗传转化分析 | 第162-170页 |
| ·转基因生菜T_1 代分析 | 第170-175页 |
| ·小结 | 第175-176页 |
| 第六章 AtHPT和AtTMT基因在生菜中的共表达 | 第176-192页 |
| 前言 | 第176-177页 |
| ·实验材料和试剂 | 第177-180页 |
| ·植物材料 | 第177页 |
| ·菌株 | 第177页 |
| ·质粒载体 | 第177-178页 |
| ·引物序列 | 第178-179页 |
| ·酶与试剂 | 第179页 |
| ·培养基及溶液配制 | 第179-180页 |
| ·实验方法 | 第180-184页 |
| ·载体构建 | 第180-183页 |
| ·植物表达载体的农杆菌转化 | 第183页 |
| ·生菜遗传转化及PCR检测 | 第183页 |
| ·RT-PCR检测 | 第183-184页 |
| ·维生素E含量测定 | 第184页 |
| ·结果与分析 | 第184-190页 |
| ·拟南芥叶片总RNA的提取 | 第184页 |
| ·目的基因及其他表达盒元件的克隆 | 第184-185页 |
| ·双基因共表达载体的构建 | 第185-186页 |
| ·农杆菌阳性克隆的鉴定 | 第186页 |
| ·生菜抗性植株的PCR检测 | 第186-187页 |
| ·RT-PCR检测 | 第187-189页 |
| ·维生素E含量测定 | 第189-190页 |
| ·小结 | 第190-192页 |
| 第七章 结论与展望 | 第192-196页 |
| ·研究结论 | 第192-193页 |
| ·本研究的主要创新点 | 第193-194页 |
| ·后续研究方向 | 第194-196页 |
| 参考文献 | 第196-208页 |
| 附录 主要仪器设备 | 第208-209页 |
| 致谢 | 第209-211页 |
| 攻读博士学位期间参与的科研项目 | 第211页 |
| 攻读博士学位期间参与的其他工作 | 第211-212页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第212-213页 |
| 攻读博士学位期间申请及授权的发明专利 | 第213-215页 |
