摘要 | 第1-7页 |
Abstract | 第7-12页 |
第一章文献综述 | 第12-28页 |
引言 | 第12页 |
1. 病原性细菌致病机制 | 第12-19页 |
·病原菌的致病性 | 第12-14页 |
·病原菌的一般致病机制 | 第14-19页 |
2. 细菌的分泌系统 | 第19-28页 |
·革兰氏阴性细菌的Ⅰ~Ⅴ型分泌系统 | 第19-22页 |
·革兰氏阴性细菌的T6SS | 第22-28页 |
第二章鳗弧菌M3菌株T6SS基因序列的克隆及生物信息学分析 | 第28-43页 |
1. 实验材料 | 第29-30页 |
·实验用菌株 | 第29页 |
·实验仪器 | 第29页 |
·实验试剂 | 第29-30页 |
2. 实验方法 | 第30-36页 |
·引物设计 | 第30-31页 |
·鳗弧菌M3 基因组DNA 的提取 | 第31-32页 |
·PCR 扩增 | 第32页 |
·PCR 产物的胶回收、连接、转化及阳性克隆筛选 | 第32-34页 |
·鳗弧菌M3 T6SS 分泌系统操纵子的推测 | 第34-36页 |
·生物信息学分析 | 第36页 |
3. 结果与分析 | 第36-43页 |
·鳗弧菌T6SS 分泌系统序列分析 | 第36页 |
·鳗弧菌T6SS 操纵子结构预测 | 第36-38页 |
·编码序列的直系同源体分析 | 第38-39页 |
·鳗弧菌VI 系统编码蛋白的功能预测 | 第39-43页 |
第三章鳗弧菌T6SS基因缺失突变株的构建、表型特征及毒力检测 | 第43-67页 |
1. 实验材料 | 第43-45页 |
·实验菌株和动物 | 第43页 |
·实验仪器 | 第43页 |
·试剂 | 第43-45页 |
2. 实验方法 | 第45-54页 |
·鳗弧菌M3 菌株T6SS 部分基因缺失突变株的构建 | 第45-51页 |
·鳗弧菌M3 菌株和基因缺失突变株生长曲线的检测 | 第51-52页 |
·平板泳动实验 | 第52页 |
·API ZYM 酶活检测 | 第52-53页 |
·vaa117 基因对菌膜(biofilm)形成的影响 | 第53页 |
·LD_(50)检测 | 第53-54页 |
3. 结果与讨论 | 第54-67页 |
·基因缺失突变株的构建 | 第54-57页 |
·鳗弧菌M3 菌株野生型和突变株生长曲线的分析 | 第57-59页 |
·平板泳动实验 | 第59-60页 |
·API ZYM 酶活检测 | 第60-62页 |
·菌膜形成 | 第62-65页 |
·感染实验结果 | 第65-67页 |
第四章RT-PCR检测VAA117基因对VAA017基因转录的调控 | 第67-78页 |
1. 实验材料 | 第67-68页 |
·实验菌株 | 第67页 |
·实验仪器 | 第67页 |
·试剂 | 第67-68页 |
2. 实验方法 | 第68-71页 |
·细菌总RNA 的提取 | 第68-69页 |
·反转录RNA 合成cDNA | 第69-70页 |
·RNA 质量的检测 | 第70页 |
·cDNA 质量的检测 | 第70-71页 |
·荧光定量PCR | 第71页 |
3. 结果与讨论 | 第71-78页 |
·RNA 提取质量的检测 | 第71-72页 |
·RNA 反转录质量的检测 | 第72页 |
·定量PCR 反应标准曲线的绘制 | 第72-76页 |
·vaa117 基因缺失对hcp 基因转录的影响 | 第76-78页 |
参考文献 | 第78-85页 |
已发表和已接受的文章 | 第85-86页 |
致谢 | 第86页 |