| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-15页 |
| 第一章 序言 | 第15-28页 |
| ·研究目的和意义 | 第15-16页 |
| ·文献综述：膜联蛋白A2——病毒感染的全面参与 | 第16-28页 |
| ·膜联蛋白A2 及其异四聚体结构 | 第17-19页 |
| ·膜联蛋白A2——病毒感染的全面参与者 | 第19-28页 |
| 第二章 猪源膜联蛋白A2 和EGFP 基因的原核表达、纯化与鉴定 | 第28-53页 |
| 实验一 猪源膜联蛋白 A2 和 EGFP 基因融合 | 第28-41页 |
| ·实验材料 | 第28-30页 |
| ·实验动物 | 第28页 |
| ·质粒及感受态细胞 | 第28页 |
| ·工具酶及试剂 | 第28页 |
| ·仪器 | 第28-29页 |
| ·主要溶液及配制 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-35页 |
| ·猪肺脏肺泡巨噬细胞中总RNA 的提取 | 第30页 |
| ·PCR 融合引物的设计与合成 | 第30-31页 |
| ·猪膜联蛋白A2 基因的RT-PCR 扩增和EGFP 的PCR 扩增 | 第31-33页 |
| ·重组PCR 构建猪膜联蛋白A2-EGFP 融合基因 | 第33页 |
| ·猪膜联蛋白A2-EGFP 融合基因克隆到pMD-18T 载体 | 第33-35页 |
| ·结果 | 第35-39页 |
| ·总RNA 含量及甲醛变性电泳 | 第35-36页 |
| ·RT-PCR 扩增猪膜联蛋白A2 | 第36页 |
| ·PCR 扩增EGFP 基因 | 第36-37页 |
| ·重组PCR 构建A2-EGFP | 第37页 |
| ·重组PCR 产物A2-EGFP 质粒鉴定 | 第37-39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| 实验二 猪膜联蛋白 A2 和增强型绿色荧光蛋白融合基因的原核表达、纯化与鉴定 | 第41-53页 |
| ·实验材料 | 第41-44页 |
| ·质粒及感受态细胞 | 第41页 |
| ·工具酶及试剂 | 第41页 |
| ·仪器 | 第41-42页 |
| ·主要溶液及培养基配制 | 第42-44页 |
| ·实验方法 | 第44-48页 |
| ·猪膜联蛋白A2 和增强型绿色荧光蛋白融合基因原核表达载体的构建 | 第44-46页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达及表达产物的纯化 | 第46-47页 |
| ·表达产物的western blot 鉴定 | 第47-48页 |
| ·结果 | 第48-51页 |
| ·重组表达质粒PCR 和酶切鉴定 | 第48-49页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达 | 第49页 |
| ·重组表达质粒的可溶性分析 | 第49-50页 |
| ·目的蛋白的分离纯化和含量测定 | 第50页 |
| ·诱导表达蛋白的Western blot 鉴定 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 第三章 猪膜联蛋白A2 全长及部分C 端和N 端基因的原核表达 | 第53-69页 |
| ·实验材料 | 第53-54页 |
| ·质粒及感受态细胞 | 第53页 |
| ·工具酶及试剂 | 第53页 |
| ·仪器 | 第53页 |
| ·主要溶液及培养基 | 第53-54页 |
| ·实验方法 | 第54-60页 |
| ·猪膜联蛋白A2 全长基因原核表达载体的构建 | 第54-58页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达及表达产物的纯化 | 第58页 |
| ·表达产物的western blot 鉴定 | 第58-59页 |
| ·猪膜联蛋白A2 全长蛋白（IA2）的Ca2+依赖性磷脂结合活性 | 第59-60页 |
| ·结果 | 第60-67页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第60-61页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达及可溶性分析 | 第61-64页 |
| ·目的蛋白的分离纯化和含量测定 | 第64-65页 |
| ·表达产物的western blot 鉴定 | 第65-67页 |
| ·全长猪膜联蛋白A2（IA2）的Ca2+依赖性磷脂结合活性检测 | 第67页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| 第四章 猪膜联蛋白A2 多克隆抗体的制备、亲和纯化与鉴定 | 第69-79页 |
| ·实验材料 | 第69-71页 |
| ·免疫抗原 | 第69页 |
| ·试剂 | 第69页 |
| ·实验动物 | 第69页 |
| ·主要仪器 | 第69页 |
| ·溶液配制 | 第69-71页 |
| ·实验方法 | 第71-74页 |
| ·免疫方案 | 第71页 |
| ·多克隆抗体的收集和纯化 | 第71-73页 |
| ·间接ELISA 检测多克隆抗体效价 | 第73-74页 |
| ·多克隆抗体的western blot 特异性检测 | 第74页 |
| ·结果 | 第74-77页 |
| ·多抗效价分析 | 第74-76页 |
| ·抗体纯化分析 | 第76-77页 |
| ·Western blot 检测抗体特异性 | 第77页 |
| ·讨论 | 第77-79页 |
| 第五章 猪膜联蛋白A2 真核表达载体的构建及其在PK-15 细胞中的瞬时表达 | 第79-87页 |
| ·实验材料 | 第79-80页 |
| ·质粒及感受态细胞 | 第79页 |
| ·工具酶及试剂 | 第79页 |
| ·仪器 | 第79-80页 |
| ·主要溶液及培养基 | 第80页 |
| ·实验方法 | 第80-83页 |
| ·猪膜联蛋白A2-EGFP 真核表达载体的构建 | 第80-82页 |
| ·重组表达载体转染PK-15 细胞 | 第82页 |
| ·表达产物的western blot 鉴定 | 第82-83页 |
| ·结果 | 第83-86页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第83页 |
| ·猪Annexin A2 在PK-15 细胞中的瞬时表达 | 第83-84页 |
| ·表达产物的western blot 鉴定 | 第84-86页 |
| ·讨论 | 第86-87页 |
| 第六章 猪源膜联蛋白A2 的结构预测及同源模建 | 第87-96页 |
| ·材料 | 第87-88页 |
| ·氨基酸序列 | 第87页 |
| ·所用软件 | 第87-88页 |
| ·方法 | 第88页 |
| ·猪源膜联蛋白A2 的一级结构分析 | 第88页 |
| ·疏水性、抗原表位、亚细胞定位、结构域、跨膜区和信号肽预测及分析 | 第88页 |
| ·猪源膜联蛋白A2 二级结构分析 | 第88页 |
| ·猪源膜联蛋白A2 三级结构的同源模建 | 第88页 |
| ·结果与分析 | 第88-95页 |
| ·猪源膜联蛋白 A2 的一级结构分析 | 第88页 |
| ·疏水性、抗原表位、亚细胞定位、结构域、跨膜区和信号肽预测分析 | 第88-90页 |
| ·猪源膜联蛋白 A2 二级结构分析 | 第90页 |
| ·猪源膜联蛋白 A2 三级结构的同源模建分析 | 第90-95页 |
| ·讨论 | 第95-96页 |
| 第七章 研究结论 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-107页 |
| 附录 | 第107-114页 |
| 附录 1:载体构建 | 第107-112页 |
| 附图 2:猪源膜联蛋白 A2 氨基酸序列相似性比对 | 第112-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 作者简介 | 第115页 |
