缩略词表(Abbreviation) | 第1-8页 |
中文摘要 | 第8-11页 |
英文摘要 | 第11-14页 |
前言 | 第14-17页 |
材料与方法 | 第17-31页 |
1. 材料 | 第17-19页 |
2. PERV前病毒全基因扩增与克隆 | 第19-25页 |
·PERV前病毒全基因克隆的引物设计与合成 | 第19-20页 |
·PBMC外周血单个核细胞的分离 | 第20页 |
·五指山猪PBMC基因组的制备 | 第20-21页 |
·PBMC总RNA的制备 | 第21页 |
·反转录合成cDNA第一链 | 第21页 |
·PCR扩增产物的克隆与鉴定 | 第21-25页 |
3. PERV前病毒全基因克隆构建与鉴定 | 第25-26页 |
·PERV前病毒全基因克隆PCR鉴定 | 第25-26页 |
·PERV前病毒全基因克隆酶切鉴定 | 第26页 |
4. PERV感染性克隆的筛选 | 第26-31页 |
·细胞转染 | 第26页 |
·RT-PCR鉴定及PERV亚型鉴定 | 第26-27页 |
·PERV病毒传代后实时荧光定量RT-PCR分析 | 第27-28页 |
·SDS-PAGE与Western Blot鉴定 | 第28-30页 |
·间接免疫荧光法检测细胞特异性抗原表达 | 第30页 |
·透射电子显微镜观察PERV病毒粒子 | 第30页 |
·PERV感染性克隆序列测定与分析 | 第30-31页 |
结果 | 第31-43页 |
1 PERV前病毒序列扩增结果 | 第31页 |
2 PCR克隆产物鉴定结果 | 第31-34页 |
·pMD18-5’half重组质粒鉴定结果 | 第31-32页 |
·pMD18-3’half重组质粒鉴定结果 | 第32-33页 |
·pBluescript SK+-3’half重组质粒鉴定结果 | 第33-34页 |
3 PERV 前病毒全基因克隆鉴定结果 | 第34-35页 |
·PERV前病毒全基因克隆PCR鉴定结果 | 第34页 |
·PERV前病毒全基因克隆酶切鉴定结果 | 第34-35页 |
4 PERV感染性克隆筛选及PERV亚型分析结果 | 第35-36页 |
5 PERV感染性克隆细胞培养上清感染HEK293 细胞结果 | 第36-37页 |
6 PERV病毒传代后实时定量RT-PCR结果 | 第37-38页 |
7 SDS-PAGE与Western Blot鉴定结果 | 第38-39页 |
8 细胞免疫荧光分析结果 | 第39-40页 |
9 透射电子显微镜结果 | 第40页 |
10 PERV感染性克隆序列测定与初步分析 | 第40-43页 |
讨论 | 第43-49页 |
1. PERV及其在异种移植中的相关研究 | 第43-44页 |
2. PERV感染性克隆的构建 | 第44-47页 |
3. PERV感染性克隆构建的意义 | 第47-49页 |
结论 | 第49-50页 |
参考文献 | 第50-56页 |
文献综述 | 第56-65页 |
代表性论著 | 第65-75页 |
附录 | 第75-76页 |
个人简历 | 第76-77页 |
致谢 | 第77页 |